摘要:在大肠杆菌中高效表达结核分枝杆菌Rv3369蛋白，获得纯化的重组蛋白rRv3369。通过聚合酶链反应 (Polymerase chain reaction，PCR) 扩增Rv3369 基因；以质粒pET28a为表达载体，构建重组质粒，转化大肠杆菌BL21 (DE3)；以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG) 诱导表达目的蛋白，通过SDSPAGE鉴定rRv3369在大肠杆菌中的表达，确定rRv3369在大肠杆菌中的表达形式；采用NiNTA His·Bind Resin来纯化重组蛋白。重组质粒pET28aRv3369中目的基因测序结果与报道序列相同。分子量约19.5kDa，表达量约占菌体总蛋白的18%，纯化后的重组蛋白样品经SDSPAGE和激光密度扫描分析表明其纯度为90%以上，每100mL培养菌可获得1.56mg左右的重组蛋白。用亲和层析法纯化的重组蛋白纯度较好。
