摘要:利用增强型绿色荧光蛋白（Enhance green flurenscent protein，EGFP）标记不同的截短型HPV16L1蛋白（Human papillomavirus type 16 L1protein，HPV16 L1），分析HPV16L1蛋白核定位信号（Nucleus location signal, NLS）的作用。构建重组pFB_EGFP、pFB_EGFP_HPV16L1、pFB_EGFP_HPV16L1△NLS和pFB_EGFP_NLSHPV16L1p转移载体；在DH10Bac宿主菌内经Tn7转座子介导的同源重组后转染Sf_9细胞，获得重组Ac_EGFP、Ac_EGFP_HPV16L1、Ac_EGFP_HPV16L1△NLS和Ac_EGFP_NLSHPV16L1杆状病毒，感染Sf_9昆虫细胞表达相应截短型HPV16L1融合蛋白；利用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察不同融合蛋白的荧光特性和核浆转运动力学过程。结果发现Ac_EGFP杆状病毒感染的Sf_9细胞内明亮的绿色荧光均匀分布；重组Ac_EGFP_HPV16L1和Ac_EGFP_NLSHPV16L1杆状病毒感染的Sf_9细胞，明亮的绿色荧光主要位于细胞核内；重组Ac_EGFP_HPV16L1△NLS杆状病毒感染的Sf_9细胞，绿色荧光局限于细胞浆内，细胞核内无绿色荧光。说明HPV16L1蛋白羧基端的23个氨基酸（GKRKATPTTSSTSTTAKRKKRKL）具有完全核定位作用，能引导HPV16 L1蛋白和EGFP突破核膜屏障进入Sf_9细胞核内。
