产单核细胞李斯特菌actA基因在大肠杆菌中的表达及其单克隆抗体的研制

摘要:

利用PCR技术从血清型1/2a的产单核细胞李斯特菌Lm4株中扩增出actA基因，经克隆筛选和测序鉴定后，构建成该基因的原核表达载体pGEX-6P-1actA及pET-actA，转入E coli后，IPTG诱导目的蛋白的表达。SDSPAGE结果表明，actA基因在两种载体中均获得表达，融合蛋白的大小分别约为120kDa和97kDa。以纯化蛋白为材料进行了ActA单抗的研制，获得4株抗ActA的单克隆抗体杂交瘤细胞株，腹水单抗ELISA效价为1∶5×104～1∶1×105。选取单抗1A5进行Western blot分析，结果表明单抗1A5能和表达产物进行特异[JP2]性反应，且与Lm4多抗血清的Western blot结果一致。actA基因的原核表达及单抗的研制为研究ActA蛋白的生物学活性及其致病作用奠定了基础。

关键词:产单核细胞李斯特菌; actA基因; 表达; 单克隆抗体

Abstract:

Key words:产单核细胞李斯特菌; actA基因; 表达; 单克隆抗体