HSP70基因上游调控序列对GST基因在耻垢分枝杆菌中表达效率的 影响

摘要:

将外源基因——日本血吸虫26kD抗原(Sj26GST)基因克隆 到大肠杆菌分枝杆菌穿梭质粒中，构建成四个不同的表达截体，研究它们在耻垢后分枝杆 菌(Mycobacterium smegmatis)中的表达效率。首先将含有结核杆菌热休克蛋白70(Heat Shock Protein,HSP70)的启动子的质粒pMT70用NcoI切，进行两种不同的修饰后，得到 不同的SD序列；将Sj26GST基因克隆进去。再将含HSP70启动子和Sj26GST基因的片段切下， 克隆到分枝杆菌大肠杆菌穿梭质粒pBCG2000中，筛选出不同SD序列、不同方向和不同拷 贝数的分枝杆菌表达载体四个。所表达的重组天然Sj26GST(rSj26GST)为可溶性蛋白，在SDS PAGE上分子量为26kD处可见明显的表达蛋白带。通过薄层扫描分析，发现表达质粒中双拷 贝启动子外源基因组合，表达效率最高，是单拷贝组合的16倍，占分枝杆菌菌体总蛋白 的28%。而不同的克隆方向和不同的SD序列(两者相差3个碱基)对表达效率的影响不明显。

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