以杆状病毒为载体表达可溶性55kD人肿瘤坏死因子受体

摘要:

从培养的HeLa细胞中提取总RNA，通过反转录PCR技术， 从该总RNA中扩增了约530 bp的shTNFR55基因的cDNA,将cDNA克隆至转移载体pAcGp67B的多角 体蛋白基因启动子的下游与转移载体构建成重组转移质粒pAcTNFR。pAcTNFR与杆状病毒AcNP V的DNA共转染昆虫细胞sf9，通过同源重组形成含有shTNFR55基因的重组病毒。经空斑分析 和DNA斑点杂交获得了纯化的重组病毒AcNPVTNFR。采用肿瘤坏死因子(TNF)敏感的L929细 胞检测表达产物的生物学活性。结果表明表达产物可以中和TNF对L929的细胞毒性。蛋白配 基印迹(Ligand blot)分析表明表达产物分子量约在20～25kD之间，有三条带。

关键词:杆状病毒，肿瘤坏死因子受体，昆虫细胞，表达

Abstract:

Key words:杆状病毒，肿瘤坏死因子受体，昆虫细胞，表达