苜蓿中华根瘤菌042B nodD基因的克隆、序列分析及其表达

摘要:

苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium melioti) 042B是一株能在苜蓿和大豆上结瘤的菌株。将042B的nodD基因克隆到载体pBBR1MCS5，并在豌豆根瘤菌(Rhizobium leguminosarum bv.viciae)LRR5045系统中进行功能分析，发现042B的NodD蛋白能与大豆的类黄酮化合物genistein结合，也能与苜蓿的类黄酮化合物luteolin反应。表明042B nodD基因很可能是其能够在两类寄主植物上结瘤的寄主专一性决定因子。将nodD基因片段分别克隆到表达载体pThioHis A、B和C，得到了3个重组质粒pXDA、pXDB和pXDC。通过序列分析发现，pXDC中的nodD基因与pThioHis C中的trxA基因阅读框吻合。将大肠杆菌(E.coli)Top10(pXDC)经IPTG诱导后用SDSPAGE分析，发现融合蛋白表达成功，其分子量恰为TrxA与NodD之和。利用Western印迹法证明E.coli Top10(pXDC)所表达的蛋白质是由目的基因编码的。

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