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产紫蓝状菌解磷条件的优化及对辣椒生长与品质的影响  PDF

  • 徐云龙 1
  • 周游 1
  • 郭立佳 1
  • 汪军 1
  • 梁昌聪 1
  • 杨扬 1
  • 他永全 1
  • 韩丙军 2
  • 杨腊英 1
1. 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,热带作物生物育种全国重点实验室,农业农村部热带作物有害生物综合治理重点实验室,国家肥料微生物种质资源库(海南),海南省热带农业微生物菌种资源库, 海南 海口; 2. 中国热带农业科学院分析测试中心,农业农村部亚热带果品蔬菜质量安全控制重点实验室,海南 海口

最近更新:2025-04-30

DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20240787

CSTR: 32112.14.j.AMS.20240787

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摘要

目的

从玉米根际土壤中筛选出一株对磷酸三钙与植酸钙均有较好的解磷效果的解磷真菌——产紫篮状菌(Talaromyces purpureogenus),并命名为XZY3PSF。为了后续将该菌株应用于农业生产,开展其解磷条件优化及对辣椒生长与品质影响的研究。

方法

采用液体摇培法测定溶液中有效磷含量,研究该菌株对Ca3(PO4)2、FePO4、AlPO4、磷矿粉、大豆卵磷脂及鸡蛋黄等6种难溶性磷酸盐的溶解能力,并探讨碳源、氮源、pH、装液量等因素对其解磷能力的影响;采用温室盆栽法评价该菌株对辣椒的促生作用及对果实品质的影响。

结果

该菌株对碳源的利用顺序依次为果糖>葡萄糖>麦芽糖>蔗糖;对氮源的利用顺序依次为氯化铵>硝酸铵>硫酸铵>硝酸钾>脲。菌株在初始pH 6.0-7.0的条件下解磷能力较强,不同装液量对菌株的解磷能力无显著性影响。在供试的6种磷源培养液中,该菌株对磷酸三钙和磷矿粉的解磷量最高。其中,磷酸三钙在第5天达到最高解磷量,且极显著高于其他磷源(P<0.01);磷矿粉则在第21天达到最高解磷量,且极显著高于其他磷源(P<0.01)。与施用复合化肥相比,该菌株可显著提高辣椒苗的株高、辣椒产量、辣椒维生素C含量与辣椒素类物质总量(P<0.05)。Pearson相关性分析结果表明,菌株XZY3PSF在不同氮源或不同碳源的培养液中的解磷量与pH变化呈极显著负相关关系,与菌丝干重呈显著或极显著负相关关系;辣椒素类物质含量与维生素C含量、糖度之间分别呈极显著与显著正相关关系。

结论

菌株XZY3PSF解磷能力强,尤其对磷酸铝与磷酸铁类磷源也具有一定的解磷能力,能显著提高作物的主要营养指标,推测其在南方砖红土壤中将具有较强的解磷能力,为后续田间应用奠定良好基础。

磷是植物生长和发育过程中不可或缺的元素,它参与了许多生物大分子的合成,如核酸、蛋白质和抗性物质,对植物的光合作用、呼吸作用及生物合成过程具有重要影[

1]。然而,土壤中的磷元素存在形态复杂,难以被植物直接吸收利用,绝大多数磷元素都以不能直接被植物吸收利用的有机磷和难溶性的无机磷酸盐沉淀(如磷酸钙盐等)形式存[2-3],而可以被植物吸收利用的磷酸盐极为缺乏。土壤中可供植物利用的游离磷浓度平均仅为-1 μmol/L或更低,很少高于10 μmol/L,远低于植物组织中的磷含量(5-20 mmol/L)[4],且可溶性磷酸盐在土壤中的迁移率很低,导致植物对游离磷的利用率极低。

有机磷虽然只约占土壤磷元素总量的15%-18%,但在磷的生物地球化学循环中扮演着重要角色,主要包括土壤有机质中的有机磷、生物体内的有机磷(如磷酸肌醇、核酸、磷脂等)及与腐殖质结合的某些有机磷;土壤中的有机磷在微生物的作用下,通过矿化作用转化为无机磷,供植物吸收利用;无机磷通常占土壤总磷含量的60%-80%,包括吸附态磷、矿物态磷和水溶性磷,主要以正磷酸盐的形式存在于钙、镁、铁、铝及黏粒结合的磷中;在土壤无机磷化合物中,除了少量的水溶态磷外,绝大部分以吸附态和固体矿物态存在;这些难溶性无机磷在酸性土壤中与Fe3+、Al3+形成难溶性化合物,在中性条件下与Ca2+和Mg2+形成易溶性化合物,而在碱性条件下则与Ca2+形成难溶性化合[

5-6]

解磷菌(phosphate-solubilizing microorganisms, PSM)是一类能够分解有机或无机磷物质的微生物,种类繁多,已报道的解磷菌有20多个属,包括细菌、真菌和放线菌[

7]。在土壤微生物总量中,解磷放线菌数量占15%-45%,解磷细菌数量占1%-60%,而解磷真菌数量仅占0.1%-0.5%[8]。目前报道的解磷细菌较多,包括沙门氏菌属、产碱菌属、假单胞菌属、芽孢杆菌属等;解磷放线菌有欧链霉菌、小单孢菌等;解磷真菌有青霉属、丛枝菌根(arbuscular mycorrhiza, AM)、曲霉属、根霉属等,解磷真菌的种类和数量较少;有些蓝细菌也具有解磷功能,如繁育拟惠氏蓝细菌和鱼腥藻[8]。尽管解磷细菌在土壤中数量最多,但从解磷能力来看,真菌往往更为高效,且解磷真菌具有更稳定的遗传特[9]。解磷菌通过分泌有机酸、质子、多糖、酶等物质,将难溶性磷转化为植物可吸收利用的无机磷酸盐,从而改善土壤磷素供应,提高植物吸收磷素的效[10]。此外,解磷菌不仅能为植物根部周围提供磷素资源,还能分泌植物生长激素等特殊物质,促进植物根系对磷素的吸收、转化和利用,这种作用有助于植物在缺磷环境下保持正常生长和发育,对于提高土壤肥力、促进植物生长具有重要意[11]

本研究对前期筛选获得的解磷真菌XZY3PSF[

12]进行了解磷条件的优化并研究其对辣椒生长与品质的影响,旨在为后续田间应用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株

菌株XZY3PSF分离自西藏自治区墨脱县背崩乡(29°14′36″N, 95°10′9″E)的玉米根际土壤样品,并经鉴定为Talaromyces purpureogenus,保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号为GDMCC 62750。

1.1.2 培养基

简化版无机磷液体培养基(g/L):葡萄糖10.0,硫酸铵2.0,磷酸三钙5.0,胰蛋白胨0.5,pH 7.0-7.5;保存用PDA培养基(g/L):马铃薯200.0,葡萄糖20.0,琼脂18.0,pH自然。所有培养基均在121 ℃条件下灭菌20 min。

1.1.3 供试溶液

钼酸盐溶液:将13.00 g钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·4H2O]溶于100 mL蒸馏水中,0.35 g酒石酸锑钾(KSbC4H4O7·H2O)溶于100 mL蒸馏水中。在不断搅拌的情况下,将钼酸铵溶液缓慢加入300 mL 50%硫酸溶液中,再加入酒石酸锑钾溶液混匀,置于棕色瓶4 ℃保存。10%抗坏血酸溶液:将10 g抗坏血酸溶于100 mL蒸馏水中,置于棕色瓶4 ℃保存。150 mmol/L对硝基苯磷酸二钠(p-disodium 4-nitrophenyl phosphate, pNPP)溶液:称取2.784 g pNPP溶于50 mL蒸馏水中。

1.2 孢子接种液制备方法

挑取菌株的菌丝,接种于PDA平板中,28 ℃恒温培养至长出孢子。用无菌水冲洗孢子,并经无菌3层擦镜纸过滤后,制备成真菌的孢子悬液,经镜检孢子数约为7×106个孢子/mL。

1.3 菌株解磷能力的测定

1.3.1 不同碳源对解磷菌生长及解磷能力的影响试验

以简化版无机磷液体培养基为基础,分别以半乳糖、海藻糖、阿拉伯糖、可溶性淀粉、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖为碳源,其他成分保持不变。各碳源添加量:海藻糖10.50 g/L,葡萄糖、半乳糖、果糖、阿拉伯糖10.00 g/L,蔗糖、麦芽糖9.50 g/L,可溶性淀粉9.00 g/L,使每个处理中的碳(C)含量一致。在150 mL三角瓶中分别装入50 mL各培养液,121 ℃条件下灭菌20 min,接菌后于28 ℃、170 r/min摇床培养7 d,测定各培养液的可溶性磷浓度、pH及菌丝干重。

1.3.2 不同氮源对解磷菌生长及解磷能力的影响试验

以简化版无机磷液体培养基为基础,分别以(NH4)2SO4、NH4Cl、KNO3、NH4NO3、脲[CO(NH2)2]作为氮源,其他成分保持不变。各氮源添加量分别为(NH4)2SO4 0.50 g/L、NH4Cl 0.41 g/L、KNO3 0.76 g/L、NH4NO3 0.30 g/L、脲0.23 g/L,使每个处理的氮(N)含量一致。在150 mL三角瓶中装入50 mL各培养液,28 ℃、170 r/min培养7 d,测定各培养液的可溶性磷浓度、pH及菌丝干重。

1.3.3 解磷菌对6种难溶性磷源的溶解能力及溶解动态测定

以简化版无机磷液体培养基为基础,分别加入磷酸三钙、磷矿粉、磷酸铁、磷酸铝、大豆卵磷脂、鸡蛋黄液作为磷源。在150 mL三角瓶中装入50 mL基础营养液,各磷源加入量均为每瓶0.25 g。各培养基中磷(P)元素加入量分别为磷酸三钙1 000.00 mg/L、磷矿粉506.00 mg/L、磷酸铝1 270.00 mg/L、磷酸铁830.00 mg/L、大豆卵磷脂476.49 mg/L、鸡蛋黄液13.30 mg/L。分别于第5、9、15、21、30天测定可溶性磷浓度。

1.3.4 不同初始pH对解磷菌生长及解磷能力的影响试验

以简化版无机磷液体培养基为基础,用HCl和NaOH将培养基分别调至pH 4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0。在150 mL三角瓶中分别装入50 mL各培养液,28 ℃、180 r/min培养7 d,测定各培养液的可溶性磷浓度、pH及菌丝干重。

1.3.5 不同装液量对解磷菌生长及解磷能力的影响试验

配制简化版无机磷液体培养基,分别在100、150、250 mL三角瓶中装入50 mL培养液,121 ℃灭菌20 min。接菌后于28 ℃、180 r/min摇床培养7 d,测定各培养液的可溶性磷浓度、pH及菌丝干重。

1.3.6 摇培方法

除装液量外,其余实验均在150 mL三角瓶中装入50 mL培养液,121 ℃灭菌20 min。接菌后于28 ℃、180 r/min摇床培养,于相应测定时间取上清液测定可溶性磷浓度。各实验中的每个处理设3次重复。

1.3.7 测定方法

pH值用台式pH计(Thermofisher公司)直接测定。培养液可溶性磷浓度用钼锑抗比色法测[

13]。解磷能力为接菌培养液的有效磷浓度减去未接菌培养液的有效磷浓度,取3次重复的平均值,以mg/L表示。菌丝干重为过滤菌丝,用稀盐酸溶液溶解未分解的磷酸三钙粉末,然后用蒸馏水反复冲洗,40 ℃低温烘干至恒重,以g表示。

1.4 解磷菌对室内盆栽辣椒苗生长及果实品质的影响

1.4.1 辣椒种植与处理方法

取香蕉种植地土壤作为盆栽用土(土壤pH为6.0,有机质含量为58.5 g/kg,碱解氮为89.30 mg/kg,有效磷含量为95.58 mg/kg,速效钾为329.7 mg/kg)。以终浓度1 g/kg将磷酸三钙混入土壤中,设置以下处理:土壤中接入解磷菌、未接入解磷菌(该处理作为对照)以及施用N/P/K=15/15/15的复合化肥。将活化好的菌株配制成孢子悬液,并保证菌悬液浓度达到106 CFU/mL。将朝天椒种子用椰糠育苗,培养至有5片真叶以上后移植至花盆中。每个花盆(规格500 mm×210 mm×150 mm)中移栽一株辣椒苗,定植培养7 d后,分别浇灌100 mL自来水、100 mL菌悬液、100 mL自来水加入2 g复合化肥。之后在整个试验过程中,不再施加任何肥料,仅根据植株干燥情况适当补充水分。每种处理方式各设3组平行。

1.4.2 植株生物量的测定

植株培养约2个月,收获果实5批次以上后,将整株植株从土壤中取出,用清水冲洗干净泥沙,再用滤纸吸干水分。用直尺测量株高,用游标卡尺测量植株基部的茎粗。将根和茎分离后,用电子天平分别称量其质量,并取平均值。产量统计为同一植株不同批次摘取的充分红熟的红椒果实总量,用电子天平称量其质量并分别取平均值。

1.4.3 辣椒果实的品质测定内容与测定方法

采收充分红熟且无病虫害的红椒果实,经80 ℃热风烘干至恒重,去掉果柄后粉碎,分别过40目和80目筛,并保存于避光的干燥器内。用于测定干物质、维生素C、糖含量、蛋白质和辣椒素共5个品质指标,设3次重复,取平均值。干物质含量采用烘干法测定,维生素C含量采用2,6-二氯酚靛酚法测[

14],蛋白质含量采用考马斯亮蓝G-250法测定,可溶性总糖含量采用蒽酮比色法测[15],辣椒素含量采用高效液相色谱仪(Agilent公司)测定。测定方法参照中华人民共和国国家标准《辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质测定及辣度表示方法》(GB/T 21266—2007)[16]并稍作修改,具体方法:称取样品2 g,用甲醇40 mL分2次提取,取提取液用水定容至50 mL,随后取提取液1 mL,用甲醇稀释至10 mL后上机测定,流动相为水:甲醇=35:65。

1.5 数据处理与分析

采用Excel 2010和SPSS 19.0对数据进行分析处理。多重比较采用LSD法,相关性分析采用Pearson法,利用Excel 2010软件作图。

2 结果与分析

2.1 菌株解磷能力的测定

2.1.1 不同碳源对解磷菌生长及解磷能力的影响

菌株XZY3PSF在不同碳源的无机磷液体培养液中培养7 d后,分别测定其有效磷含量、菌丝干重及培养后液体的pH值。从表1可知,有效磷含量最高3种碳源为果糖、葡萄糖和麦芽糖,均高于350.0 mg/L。其中,果糖最高,达529.4 mg/L;其次为葡萄糖,达447.1 mg/L。三者之间无极显著性差异,但果糖与麦芽糖之间存在显著性差异,有效磷含量最低的为半乳糖,仅为0.7 mg/L,与其他碳源之间存在极显著性差异。菌丝干重最高的3种碳源为可溶性淀粉、麦芽糖和蔗糖,均高于0.160 g,但相互之间无显著性差异,半乳糖和海藻糖的菌丝干重最低,均为0.021 g,与其他碳源之间存在极显著性差异。培养后液体的pH值在4.84-8.11之间,半乳糖处理下pH值最高,呈碱性;其余碳源处理下pH均呈酸性,其中麦芽糖处理下pH值最低,为4.84,与其他碳源之间存在极显著性差异。

表1  菌株XZY3PSF在不同碳源的磷酸三钙培养液中的有效磷含量、菌丝干重与培养液终pH值比较分析结果
Table 1  Comparative analysis of available phosphorus content, dry weight of mycelium and final pH value of culture solution of strain XZY3PSF cultured in tricalcium phosphate culture solution with different carbon sources
Carbon sourcesAvailable phosphorus content (mg/L)Dry weight of mycelium (g)Final pH value of culture solution
Galactose 0.7±0.1Ee 0.021±0.002Bc 8.11±0.07Aa
Trehalose 14.2±3.2Dd 0.021±0.001Bc 6.70±0.14Bb
Arabinose 16.6±3.0Dd 0.092±0.008Ab 6.17±0.05BCc
Soluble starch 59.1±1.2Cc 0.111±0.005Aab 6.35±0.06Bbc
Sucrose 353.4±8.1Bb 0.179±0.012Aab 5.32±0.74DEde
Maltose 390.0±10.3ABb 0.181±0.017Aab 4.84±0.23Ee
Glucose 447.1±15.7ABab 0.157±0.007Aab 5.62±0.03CDd
Fructose 529.4±3.9Aa 0.153±0.016Aab 5.54±0.04CDd

There is a extremely significant difference between different uppercase letters (P<0.01), and there is a significant difference between different lowercase letters (P<0.05). The same as the following tables.

图1所示,菌株XZY3PSF在不同碳源培养液中的有效磷含量与菌丝干重及培养液终pH值之间呈极显著负相关关系。

fig

图1  菌株XZY3PSF在不同碳源下培养后溶液中的有效磷含量与菌丝干重、培养液终pH值之间的Pearson相关性分析结果。*:P<0.05;**:P<0.01。下同。

Figure 1  Pearson correlation analysis results between available phosphorus content in the solution of strain XZY3PSF cultured under different carbon sources and dry weight of mycelium and final pH value of the culture medium. *: P<0.05; **: P<0.01.The same below.

2.1.2 不同氮源对解磷菌生长及解磷能力的影响

菌株XZY3PSF在不同氮源的无机磷液体培养液中摇培养7 d后,分别测定其有效磷含量、菌丝干重及培养后液体的pH值。从表2可知,NH4Cl和NH4NO3处理下的有效磷含量较高,分别为594.9 mg/L和567.2 mg/L,二者之间无显著性差异。有效磷含量最低的为脲处理,为353.5 mg/L,与其他氮源处理之间存在极显著性差异;不同氮源处理下的菌丝干重范围为0.104-0.169 g,相互之间无显著性差异;各处理培养后pH值在4.71-6.12之间,KNO3处理下pH值最高、NH4Cl处理下pH值最低,二者之间存在极显著性差异,而KNO3与(NH4)2SO4、脲之间无显著性差异,但三者与NH4Cl、NH4NO3之间存在极显著性差异。

表2  菌株XZY3PSF在不同氮源的磷酸三钙培养液中培养后溶液中的有效磷含量、菌丝干重与培养液终pH值比较分析结果
Table 2  Comparative analysis results of available phosphorus content, dry weight of mycelium and final pH value of culture solution of strain XZY3PSF cultured in tricalcium phosphate culture solution with different nitrogen sources
Nitrogen sourcesAvailable phosphorus content (mg/L)Dry weight of mycelium (g)Final pH value of culture solution
NH4Cl 594.9±32.3Aa 0.107±0.054a 4.71±0.52Bb
NH4NO3 567.2±12.6Aa 0.104±0.041a 4.74±0.50Bb
(NH4)2SO4 481.9±4.4Bb 0.169±0.002a 5.57±0.11ABa
KNO3 382.2±16.1Cc 0.168±0.035a 6.12±0.18Aa
CO(NH2)2 353.5±2.2Cd 0.145±0.015a 5.49±0.50ABa

图2所示,菌株XZY3PSF在不同氮源培养液中的有效磷含量与菌丝干重呈显著负相关,与培养液终pH值的变化之间呈极显著负相关关系。

fig

图2  菌株XZY3PSF在不同氮源的磷酸三钙培养液中培养后溶液中的有效磷含量、菌丝干重、培养液终pH值之间的Pearson相关性分析结果

Figure 2  Pearson correlation analysis results of available phosphorus content in solution, dry weight of mycelium and final pH value of culture medium after XZY3PSF was cultured in tricalcium phosphate culture medium with different nitrogen sources.

2.1.3 不同初始pH对解磷菌生长及解磷能力的影响

菌株XZY3PSF在不同初始pH的无机磷液体培养液中培养7 d后,分别测定其有效磷含量、菌丝干重及培养后液体的pH值。如表3所示,随着初始pH的增加,有效磷含量整体呈现先增加后降低的趋势,在pH 6.0-7.0时达到最大值,分别为504.5 mg/L和484.6 mg/L,二者之间无显著性差异。当初始pH为9.0时,有效磷含量最低,为437.6 mg/L。菌丝干重在不同初始pH处理下整体无显著性差异,但在pH 7.0时相对较低,为0.110 g,与其余各处理(除pH 4.0)之间无显著性差异。培养后液体的pH值整体范围在5.0-6.0之间,初始pH 4.0-6.0的处理间无极显著性差异,但pH 6.0处理与pH 4.0处理之间存在显著性差异。初始pH 6.0-9.0的处理间无显著性差异。

表3  菌株XZY3PSF在不同初始pH的磷酸三钙培养液中培养后溶液中的有效磷含量、菌丝干重与培养液终pH值的比较分析结果
Table 3  Comparative analysis results of available phosphorus content, dry weight of mycelium and final pH value of culture solution of strain XZY3PSF cultured in tricalcium phosphate culture solution with different initial pH values
Initial pHAvailable phosphorus content (mg/L)Dry weight of mycelium (g)Final pH value of culture solution
4.0 462.1±13.8BCbc 0.126±0.015a 5.65±0.13Aa
5.0 456.8±7.0BCbc 0.121±0.004ab 5.63±0.02Aa
6.0 504.5±8.0Aa 0.113±0.002ab 5.38±0.11ABb
7.0 484.6±7.5ABab 0.110±0.009b 5.25±0.15Bb
8.0 459.4±6.8BCbc 0.121±0.004ab 5.31±0.02Bb
9.0 437.6±10.1Cc 0.113±0.005ab 5.29±0.14Bb

图3所示,菌株XZY3PSF在不同初始pH的培养液中,有效磷含量与菌丝干重及培养液终pH值之间均无显著相关性。

fig

图3  菌株XZY3PSF在不同初始pH的磷酸三钙培养液中培养后溶液中的有效磷含量与菌丝干重、培养液终pH值之间的Pearson相关性分析结果

Figure 3  Pearson correlation analysis results of available phosphorus content in solution, dry weight of mycelium and final pH value of culture medium after XZY3PSF was cultured in tricalcium phosphate culture medium with different initial pH.

2.1.4 不同装液量对解磷菌生长及解磷能力

菌株XZY3PSF在不同装液量的无机磷液体培养液中培养7 d后,分别测定其有效磷含量、菌丝干重及培养后液体的pH值。如表4所示,在3种装液量处理下,培养液中的有效磷含量、菌丝干重以及培养液终pH值之间均无显著性差异。如图4所示,有效磷含量与菌丝干重及培养液终pH值之间无显著相关性。

表4  菌株XZY3PSF在不同装液量的磷酸三钙培养液中培养后溶液中的有效磷含量、菌丝干重与培养液终pH值的比较分析结果
Table 4  Comparative analysis results of available phosphorus content, dry weight of mycelium and final pH value of culture solution of strain XZY3PSF cultured in tricalcium phosphate culture solution with different liquid volumes
Broth contentAvailable phosphorus content (mg/L)Dry weight of mycelium (g)Final pH value of culture solution
50 mL/250 mL 417.7±6.2a 0.111±0.012a 6.96±0.14a
50 mL/150 mL 414.2±19.9a 0.112±0.006a 6.84±0.03a
50 mL/100 mL 430.2±4.4a 0.123±0.009a 6.89±0.12a
fig

图4  菌株XZY3PSF在不同装液量的磷酸三钙培养液中培养后溶液中的有效磷含量与菌丝干重、培养液终pH值之间的Pearson相关性分析结果

Figure 4  The results of Pearson correlation analysis between available phosphorus content in solution dry weight of mycelium, and final pH value of culture medium after strain XZY3PSF was cultured in tricalcium phosphate medium with different liquid volumes.

2.1.5 解磷菌对6种难溶性磷源的溶解能力及溶解动态测定

表5所示,菌株XZY3PSF在供试的6种磷源培养液中,最高解磷量出现在磷酸三钙和磷矿粉处理中。磷酸钙在第5天达到最高解磷量(416.7 mg/L),且极显著高于其他磷源,随后解磷量随时间增加逐渐降低;磷矿粉和磷酸铝均在第21天达到最高解磷量,分别为604.5 mg/L和146.0 mg/L,且极显著高于其他磷源;磷酸铁在第21天达到最高解磷量(25.0 mg/L),但与其他磷源之间无显著性差异;大豆卵磷脂和鸡蛋黄液处理均在第30天达到最高解磷量,分别为100.2 mg/L和9.9 mg/L。其中,大豆卵磷脂处理的解磷量在第5天、第9天和第15天极显著低于第30天,而鸡蛋黄液处理的解磷量极显著高于其他磷源(表5图5)。

表5  菌株XZY3PSF对不同磷源在不同培养时间下的有效磷含量的差异性比较分析结果
Table 5  Comparative analysis of availablephosphorus content of different phosphorus sources at different culture times by strain XZY3PSF
Different phosphorus sourcesAvailable phosphorus content (mg/L)
5 d9 d15 d21 d30 d
Calcium phosphate 416.7±5.4Aa/Aa 241.0±8.4Aa/Bb 120.9±16.3Bb/Cc 66.1±9.1Cd/CDd 19.4±2.7Ccd/Dd
Ground phosphate rock 222.0±8.7Bb/Cc 248.1±14.1Aa/BCbc 278.3±10.1Aa/Bb 604.5±31.1Aa/Aa 595.5±12.1Aa/Aa
Aluminum phosphate 123.0±3.9Cc/Bb 76.9±4.0Bb/Dd 95.9±5.7Bc/Cc 146.0±7.0Bb/Aa 102.2±4.6Bb/Cc
Iron phosphate 20.3±2.6Dd/Aab 18.5±1.6Cc/Ab 18.9±2.7De/Ab 25.0±2.8De/Aa 23.1±7.1Ccd/Aab
Soy lecithin 13.8±1.9Dd/Dd 35.5±2.9BCc/Cc 52.9±4.0Cd/Bb 94.5±11.4Cc/Aa 100.2±5.0Bb/Aa
Egg yolk liquid 0.1±0.0Ee/Cc 4.0±1.4Cc/Bb 4.6±1.0De/Bb 4.2±0.3De/Bb 9.9±1.9Cd/Aa

The uppercase and lowercase letters before/represent the difference analysis results among values in the same column, while those after/represent the difference analysis results betweenamong values in the same row.

fig

图5  菌株XZY3PSF对不同磷源在不同培养时间下的有效磷含量变化趋势

Figure 5  Change trend of available phosphorus content of strain XZY3PSF under different phosphorus sources and culture times.

2.2 解磷菌对室内盆栽的辣椒苗生长及果实品质影响

2.2.1 对辣椒苗生长的影响

图6所示,除单果重量外,株高、植株总重、根干重和产量上在复合化肥和菌株XZY3PSF处理下均显著高于CK处理。其中菌株XZY3PSF处理下的株高、植株总重和产量最高,分别比CK处理增加了60.9%、162.2%和78.4%。在株高和产量方面,菌株XZY3PSF处理显著高于复合化肥处理。

fig

图6  室内盆栽种植的辣椒植株株高、根重与产量的比较分析结果。A:株高、植株总重与产量的比较分析;B:根干重与单果的比较分析。图中不同大小写字母表示存在极显著(P<0.01)或显著性差异(P<0.05)。下同。

Figure 6  Comparative analysis of plant height, root weight, and yield of pepper plants grown in pots indoors. A: Comparative analysis of plant height, total plant weight, and production; B: Comparative analysis of root dry weight and single fruit weight. In the figure, there is a extremely significant difference between different uppercase letters (P<0.01), and there is a significant difference between different lowercase letters (P<0.05). The same below.

2.2.2 对辣椒品质的影响

图7所示,与CK处理相比,菌株XZY3PSF处理的辣椒在糖含量、可溶性蛋白含量和维生素C含量方面均显著高于CK处理,增幅分别为58.9%、35.9%和169.9%;在干物质含量方面,3种处理间无显著性差异。复合化肥和菌株XZY3PSF处理下的辣椒糖含量、可溶性蛋白含量和维生素C含量均显著高于CK处理,且菌株XZY3PSF处理下的维生素C含量极显著高于复合化肥处理。

fig

图7  室内盆栽种植收获的辣椒主要营养物质含量的比较分析结果

Figure 7  Comparative analysis of the main nutrient contents of peppers harvested from indoor potted planting.

表6可知,菌株XZY3PSF处理下的辣椒中辣椒碱、二氢辣椒素、辣椒素类物质总量和辣度均极显著高于CK和复合化肥处理,相对CK处理的增幅分别为113.7%、68.9%、104.3%和104.5%。

表6  室内盆栽种植收获的辣椒辣度相关数据的比较分析结果
Table 6  Comparative analysis of data related to the spiciness of peppers harvested from indoor potted planting
TreatmentCapsaicin (g/kg)Dihydrocapsaicin (g/kg)Total amount of capsaicinoids (g/kg)Spicy degree
CK (H2O) 1.396±0.227Bb 0.367±0.069Bb 1.959±0.244Bb 201±26Bc
Composite fertilizer 1.747±0.203Bb 0.443±0.043ABb 2.434±0.269Bb 250±26Bb
XZY3PSF 2.983±0.358Aa 0.620±0.119Aa 4.003±0.510Aa 411±54Aa

Different uppercase letters indicate highly significant differences between each other (P<0.01), while different lowercase letters indicate significant differences between each other (P<0.05).

图8所示,通过相关分析研究干物质含量、糖含量、可溶性蛋白含量和维生素C含量与辣椒碱、二氢辣椒素、辣椒素类物质总量和辣度之间的相关性。结果显示,干物质含量和可溶性蛋白含量与辣椒碱、二氢辣椒素、辣椒素类物质总量和辣度均无显著相关性;糖含量与辣椒碱、二氢辣椒素、辣椒素类物质总量和辣度均呈现出显著正相关关系。

fig

图8  辣椒营养物质含量与辣味素等辣度相关指标之间的Pearson相关性结果

Figure 8  Pearson correlation results between pepper nutrient content and spicy related indicators such as capsaicin.

3 讨论与结论

根际微生物作为土壤和植株之间的连接体,在土壤与植株的物质和能量循环中发挥着至关重要的作[

17-18]。现代农业中磷肥的大量施用使得能被农作物吸收的磷素超标,反而会诱发土壤缺磷。这是因为施用后过量的磷会与锌结合,生成磷酸锌,导致作物无法有效吸收锌,从而出现缺锌症[9]。解磷菌可将难溶性磷矿盐转化为可被植物吸收利用的有效磷,既能提高土壤的有效磷含量,减少环境污染,还能有效提高植物的抗逆能[10,19]。本研究中筛选出的产紫篮状菌(Talaromyces purpureogenus) XZY3PSF菌株在液体培养条件下展现出良好的解磷能力,对磷酸三钙的溶解率在41%-60%。该结果与史发超[20]分离筛选的斜卧青霉菌(Penicillium decumbens)对磷酸三钙的溶解率相似或略高,但低于赖鉴添[21]分离筛选的泡盛曲霉(Aspergillus awamori)对磷酸三钙的溶解率。在盆栽土壤中,该菌株对作物生长的促进作用与上述研究结果一致。

碳是构成微生物的基本骨架,解磷微生物同样需要碳源来合成新的细胞,并参与体内碳化合物的氧[

22],因此碳被认为是影响微生物解磷作用的主要因素。研究表明,培养基中碳源和氮源会影响解磷菌的生长,并通过改变其产生的有机酸类型和浓度影响解磷效果。在本研究中,XZY3PSF菌株对半乳糖、海藻糖、阿拉伯糖、可溶性淀粉利用率较低,而对蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖的利用率较高,这可能与培养液终pH值有关。难以利用的碳源其终pH值在6.15以上,而利用率高且解磷效果好的碳源其终pH值均在5.65以下。同时,研究发现菌株XZY3PSF在以葡萄糖和果糖为碳源时具有最大的解磷量,二者之间无显著性差异。葡萄糖处理下培养后溶液中的有效磷含量为447.1 mg/L,是蔗糖处理下的1.3倍。这一结果与洋葱伯克氏菌(Burkholderia cepacia)[23-24]、粘质沙雷氏菌(S. marcescens)[25]、巨大芽孢杆[26]以及菌株PS-3[27]的研究结果一致,均表明以葡萄糖为碳源时解磷能力较好。关于解磷微生物对氮源的研究较多,但主要集中在氨态氮和硝态氮的利用上。Seshadri[28]发现,黑曲霉(Aspergillus niger)在以NH4NO3为氮源时,生物量最大且解磷效果最好,该结果与本研究一致。此外,张泽[29]和Nautiyal[30]的研究均发现,铵盐比其他氮源更能有效地溶解磷,推测其原因可能是NH4+的质子释放降低了培养基的pH值,从而促进了磷的溶解。在本研究中,不同氮源处理中有效磷含量最高的均为铵盐。李静[31]指出,微生物代谢会使培养介质的pH值下降,因此微生物的解磷量与pH值之间并不存在显著的相关性。本研究中菌株XZY3PSF在不同初始pH的培养液中,有效磷含量与pH值的变化之间也无显著相关关系,这间接佐证了本研究结果的可靠性。Fan[32]的研究中,BISR-HY65菌株的最适初始pH 6.0-8.0。本研究中初始pH值为6.0时,菌株在溶液中的有效磷含量最高,达504.5 mg/L。杨晓燕[33]研究发现,巨大芽孢杆菌能够有效降解有机磷和无机磷,对卵磷脂中的磷分解后有效磷含量最高为1.67 mg/L。本研究中菌株XZY3PSF对大豆卵磷脂中的磷降解率最高达94.5 mg/L。此外,菌株XZY3PSF对磷矿粉、磷酸铝与磷酸铁类磷源也具有一定的解磷能力,且其对磷矿粉的解磷能力随着培养时间的延长而增强。贾萌萌[5]报道,酸性土壤中主要为Fe3+、Al3+态形成的难溶性磷化合物,而南方砖红呈酸性,推测菌株XZY3PSF在以磷矿粉等矿源废渣肥料化利用以及在提高南方砖红土壤中磷的有效利用方面具有较好的应用前景。

辣椒富含辣椒素、维生素C、辣椒碱等,是重要的蔬菜之一,具有很高的营养价值和保健功[

34]。其中,辣椒碱还具有抗菌消炎、降低胆固醇等功[35]。付文婷[36]对10份地方辣椒的6个营养成分间相关性进行分析,发现部分性状显著相关,总体来看,维生素C与粗脂肪、辣椒素呈显著正相关,粗脂肪与辣椒素呈显著正相关。本研究中菌株处理下能显著提高作物的主要营养指标,其中维生素C含量与二氢辣椒素、辣椒碱、辣椒素类物质总量、辣度之间均呈极显著正相关关系,与付文婷[33]的研究结果一致。李凌凌[37]研究发现,以固氮菌株和解磷真菌产紫篮状菌混合发酵所制复合型菌肥对辣椒苗的促生效果最佳,Kharkwal[38]研究发现,经T. albobiverticillius HNB9定殖的植株生长增强,表现为茎长和根长增加。本研究中菌株XZY3PSF处理下与CK及复合化肥处理相比,株高与产量均为最高,增幅分别为60.9%和78.4%,显著提高了辣椒的生物量。

总体而言,菌株XZY3PSF在碳源为葡萄糖/果糖,氮源为NH4NO3/NH4Cl,初始pH值为6.0/7.0时,解磷效率最高。此外,对于不同磷源物质,该菌株对磷酸三钙与磷矿粉的解磷能力最强。在促进辣椒生长的试验中,菌株XZY3PSF能显著提高辣椒的生物量及主要营养指标。推测其在南方砖红土壤中将具有较强的解磷能力,具有开发成微生物菌肥的良好潜力,研究结果为后续田间应用奠定了良好基础。

作者贡献声明

徐云龙:本论文的主要实验参与者与撰写者;周游:试验方案设计及指导,参与部分稿件修改;郭立佳:试验设计及开展;汪军:参与试验数据收集;梁昌聪:试验方案设计及指导;杨扬:试验方案指导,论文修改及审核;他永全:试验指导;韩丙军:参与与辣味相关成分的分析与论文修改:杨腊英:整体实验完成人。

利益冲突

作者声明不存在任何可能会影响本文所报告工作的已知经济利益或个人关系。

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