1998, 38(3).
摘要:为了研究嗜甲基菌(Methylophilus)DM11菌株二氯甲烷脱卤素酶的不同氨基酸残基在底物结合、谷胱甘肽(GSH)亲和以及催化活力中的作用,对编码该酶的基因进行了定点诱变研究。将保守的103位色氨酸(W)分别用苯丙氨酸(F)、缬氨酸(V)或天冬酞胺(N)替换,109位精氨酸(R)用亮氨酸(L)替换,117位色氨酸用酪氨酸(Y)或苯丙氨酸替换,得到6种突变酶。其中3种突变酶具有较低的活力,另外3种突变酶没有活力。突变酶W117Y的性质与野生型酶明显不同。
1998, 38(3).
摘要:将粪产碱菌(Alcaligenesfaecalis)A1501ntrC基因和lacZ基因正向克隆于广泛性转移载体pLA2917上,获得多拷贝ntrC质粒pLAC1和含ntrC-lacZ融合基因的重组质粒pLAC2,采用双亲结合方法,将上述两个重组质粒导入A1501中,获得含ntrC-lacZ融合基因的结合子A15C2和ntrC多拷贝结合子A15C1。采用X-gal原位显色技术、显微切片、扫描电镜观察及ntrC部分缺失突变株研究粪产碱菌ntrC在根部的表达及功能,结果表明粪产碱菌A1501在水稻根部有较强的定殖能力,并能侵进入水稻根内定殖。在水稻主侧根伸长区及根内皮层薄壁细胞及侧根分生区ntrC-lacZ融合基因表达活性明显高于别的部位。高铵条件下多拷贝ntrC结合子根表定殖能力大于野生型,而ntrC突变株则低于野生型。表明ntrC基因参与固氮菌根表结合的过程。
1998, 38(3).
摘要:以小球藻NC64A株系为寄主,从17个省市采集的上百个水样中分离到了11个病毒分离物(BJ-1、BJ-2、BJ-3、BJ-4、FJ-1、FJ-2、NJ-1、HCJ-1、CDT-1、SCB—1、SCC-1)。这些病毒具有许多相同的性质,如均为球形多面体,基因组为300kb的dsDNA。但它们的DNA限制性酶切图谱,碱基组成和蛋白组分等均有差异。FJ-1的主要外壳蛋白的分子量小于54000,其它10个分离物则与PBCV-1一样,主要外壳蛋白的分子量为54000。Westernblot分析的结果显示,除FJ-1外其它病毒分离物与PBCV—1的抗血清有较强的免疫交叉反应。说明这些病毒与PBCV-1的同源性较高。在11个病毒分离物中,FJ-1在蛋白组分、碱基组成等方面与其它分离物和PBCV—1差别较大。
1998, 38(3).
摘要:用亚硝基胍(NTG)对球形芽孢杆菌(Bacillussphaericus)进行化学诱变,筛选到利福平(Rif)和链霉素(Sm)二个标记菌株。抗药浓度均达100u/ml培养基。其抗药性状能够获得较好地遗传。用含溶葡球菌酶基因的质粒DNA对RifR菌株进行原生质体转化,酶基因在该抗药菌株中获得了高效表达。经摇瓶发酵试验,溶葡球菌酶的活性约为122u/ml培养液。
1998, 38(3).
摘要:选用三类典型重组子3a、3b、A7-1和双亲本菌株AspersillusnigerAMSH、TrichodermareeseiQM9414为材料,按照所设计的纤维素酶系基因的通用序列和同工酶分型方法,进行基因组DNA指纹和酶系同工酶多态性比较分析。旨在提供重组子中基因重组的分子证据,阐明远缘双亲本基因组间的遗传表达相容性,并讨论其杂种优势的分子基础。结果发现重组子中基因组DNA指纹的重组特征稳定遗传,并能够相容性增强表达重组后的羧甲基纤维素酶(CMCase)和β-葡萄糖苷酶(βGlase)同工酶组分。纤维素酶系杂种优势的分子基础多样性包括:(1)3b中来自于双亲本部分编码βGlase的基因的杂合迭加和增强表达;(2)3a和A7-1中对应继承双亲本部分编码CMCase和βGlase的基因间协调性增强表达,并导致相应酶组分蛋白合成量的显著增加。由此综合提出了一个由βGlase介导的纤维素酶系活性调节和诱导合成调控的“双重协同增效”模型。此外还建立了考察重组子中杂种优势分子基础及其遗传稳定性的可行方法。
1998, 38(3).
摘要:将RT-PCR扩增得到的亲环素A(CyPA)基因片段插入原核表达载体pET11c中,得到重组质粒pET11/CyPA,转入大肠杆菌获得高效表达。Spe-PAGE分析表明,重组CyPA表达量占菌体可溶性蛋白的40%以上。经50%硫酸铵沉淀和DEAESepharoseCL-6B柱层析可纯化重组CyPA。用糜蛋白酶偶联法测定显示重组CyPA具有肽基脯氨酸顺/反异构酶活性。
1998, 38(3).
摘要:轮状病毒是引起婴幼儿严重腹泻的重要病原,其第四基因编码主要中和抗原VP4,而VP4可裂解为VP8和VP5两个片段。VP8为抗原型特异性片段。克隆并测定了具有代表性的三个轮状病毒北京株VP4编码基因5′端(VPS+VPS一部分)887个核苷酸序列并据此推导出其氨基酸序列。结果表明,相同血清型的地方株和标准株之间具有高度同源性(92%~966%),不同血清型间则变异较大(70.5%~71%)。氨基酸最大变异处位于aa84~172,并对胰酶作用位点在致病性中的可能性进行了讨论。
1998, 38(3).
摘要:将巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)青霉素酞化酶连接到聚丙烯腈纤维载体上,制成固定化青霉素酰化酶。其表现活力约为2000u/g。水解青霉素G的最适温度为50℃;最适PH为9.0;在PHS.5~10.3、温度50℃以下酶的活力稳定;表观米氏常数Ka为1.33×10-8mol/L;最大反应速度Vm为2.564mmol·min-1;苯乙酸为竞争性抑制剂,抑制常数为0.16mol/L。水解10%的青霉素G钾盐溶液,使用20批,保留酶活力80%。
1998, 38(3).
摘要:采用响应面方法(ResponseSurfaceMethod,RSM)对克鲁维酵母(Kluyveromycessp.)Y-85产菊粉酶培养基成份进行了优选,和正交试验相比,该法选出的最适培养基的酶发酵水平提高28%。用15L自控发酵罐进行产酶条件控制试验,并在1000L罐上进行5批次酶发酵中试,平均菊粉酶活性达68.9u/ml。
1998, 38(3).
摘要:含发光酶基因luxAB的Tn5转座子自杀质粒pHNC3,在辅助质粒pRK2013的帮助下,转入快生型大豆根瘤菌HN01中小,pHNC3经自杀重组,其Tn5-luxAB转座插入HN01基因组中,从而赋予HN01以发光活性。挑取具有发光活性的HN01杂交单菌落,进行质粒快检和以luxAB为探针的分子杂交,选取Tn5-luxAB分别插入到HN01染色体上和不同质粒上的标记菌株,进行灭菌盆栽实验,并对一株Tn5-luxAB标记于染色体上的菌株HN01LC02进行了模拟大豆栽培条件下的有菌盆栽实验,包括对发光根瘤菌占瘤率的测定和发光根瘤在根系上分布情况的测定。
1998, 38(3).
摘要:用酶标免疫检测法研究了根瘤菌4012a菌株细胞分裂素发酵的适宜培养基和培养条件。结果表明,其最佳培养基为(g/L):葡萄糖10.0,(NH4)2SO41.0,K2HPO4·3H2O0.6,MgSO4·7H2O0.1,CaCl2·2H2O0.4,FeCI3·6H2O0.04,Na2MoO4·2H2O0.1mg/L,泛酸钙100μg/L,腺漂吟200mg/L。该菌株在150r/min的旋转摇床上27℃振荡培养96h,发酵液中细胞分裂素产量可达908μg/L,生物活性(萝卜子叶扩大法)为1mg/L激动素当量。
1998, 38(3).
摘要:The large plasmids of strain 7653R were digested with restriction enzyme EcoRI. Their DNA fragments were cloned into the expression vector pMP220 to construct a lacZ fusion pool, which were transferred into the recipient strain 7653R Tri-transconjugants were selected onto plates containing X-gal and seed extract Five blue colonies were assayed of their β-galactosidase activity after incubation with or without seed extract. A positive induced strain HN18 was obtained. Hybridization of nodDABC probe on the re…
1998, 38(3).
摘要:An inorganic pyrophosphatase (EC3.6.1.1) from Saccharomyces cerevisiae was purified to PAGE homogeneity by sonication disruption. (NH4)2SO4 fractionation and DEAE-cellulose colunm chromatography. The optimum pH and temperature of the enzyme were 7.4~7. 8 and 60℃, respectively. The Km was 19.3 mmol / L. The enzyme required Mg2+ as a cofactor for hydrolysis of pyrophosphate and was inhibited by Ca2+, Hg2+, Pb2+, Mn2+.
1998, 38(3).
摘要:14 strains of Actinomycetes were isolated from soil samples collected in Yunnan China Experiments showed that they had activity of herbicide. In this paper,the morphological and chemotaxonomic characters of these strains were studied and they were identified as three genera of Actinomycetales respecitively, such as Streptomyces, Micromonospora and Nocardia.
1998, 38(3).
摘要:This paper reports the fermentation techmology of bacterial feed NO.633. A new fermentational technic, which was composed of fermentation medium, optimum pH,temperature, airate flow, pot pressure and fermentation time, was established.
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