2000, 40(1).
摘要:在数值分类、SDSPAGE 全细胞蛋白分析、DNADNA 杂交、16SrDNAPCRRFLP 的基础上,测定了两个分离自干旱地区苜蓿、草木樨根瘤菌新群1 、2 的中心株XJ96060 、XJ96408 的16SrDNA 全序列,并进一步将中心株和31 株已知菌、3 株分自黄土高原的根瘤菌进行了系统发育学分析。结果表明,供试菌株在系统发育树中基本分成Sinorhizobium 、Mesorhizobium 、AgrobacteriumRhizobium 、Rhizobiu m 、Bradyrhizobium 、Azorhizobium 六个分枝。群1 ,2 落入Sinorhizobiu m 分枝。
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摘要:根据酵母属( Saccharomyces Meyen ex Reess) 分类学研究最新进展,核实并更新了保藏于中国普通微生物菌种保藏中心的该属菌株的种类归属。在形态和生理生化性状,包括对6 种糖的发酵能力、对18 种碳源和3 种氮源化合物的同化能力、在无维生素培养基中和37 ℃下的生长情况、对放线菌素酮的抗性等常规分类学研究的基础上,对部分疑难菌株进行了脉冲电泳核型比较分析。酿酒酵母( Saccharomycescerevisiae) 、贝酵母( S.Bayanus) 和巴氏酵母( S.Pastorianus) 三者与少孢酵母( S.Exiguus) 在电泳核型上具有明显的差异,主要表现在前三者染色体DNA 分子的大小范围均为225 ~2200 kb ,而S.Exiguus 缺少小于365 kb 的染色体DNA 分子。S.Cerevisiae 的模式和权威菌株具有12 ~14 条染色体DNA 带;S.Bayanus 和S.Pastorianus 的模式菌株均有17 条带,但在带型上存在一定差异。原归于S.Cerevisiae 的株菌AS2-100 具有16 条带,与S.Cerevisiae 区别明显而与S.…
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摘要:从污水处理厂分离到一株紫色非硫细菌3p ,该菌株具避光性,能形成孢囊,具片层状光合内膜,在波长798 nm 处的吸收峰很低,需硫胺素和维生素B12 作生长因子。该菌株可以琥珀酸为碳源,最佳生长温度为34 ℃~41 ℃,体内未发现R 体结构,醌类的主要成分是Q9 。对菌株3p 的16SrRNA 基因的分子系统学分析结果表明,菌株3p 与世纪红篓菌( Rhodocista centenaria) 关系最近,相似性为95 % ,二者可归为同一属;与Rc.Centenaria 的杂交结果表明,二者的DNA 相关性为56 % ,故可把3p 定为一个新种:北京红篓菌( Rhodocistapekinense sp .Nov) .
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摘要:从一例多细菌协同性坏疽患者的临床标本中分离到了一株革兰氏阳性杆菌Y6 菌株,使用常规方法不能鉴定,通过16SrDNA 序列分析和同源性检索发现Y6 菌株16SrDNA与肉杆菌属的同源性较高,为93 % ~97 % 。其中16SrDNA 的特征序列也和肉杆菌属的相同。其它性状也和肉杆菌属的特征相似,但和已经报道的种有明显区别。因此认为Y6 菌株可能是肉杆菌属的一个新种,暂命名为肉杆菌样细菌。
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摘要:重组大肠杆菌Escherichia coliHMS174(pTZ18UPHB) 含有携带聚羟基烷酸(PHA) 合成基因( phaCAB)** 的质粒pTZ18UPHB,是很有潜力的PHA 生产菌,但存在着质粒不稳定和不能合成3羟基丁酸(3HB) 与3羟基戊酸(3HV) 共聚物[P(3HBco3HV)] 的缺陷。将RK2 质粒上的par DE 基因引入pTZ18UPHB 构成质粒pJMC2 ,该质粒可以在宿主E.ColiHMS174 中稳定遗传。将培养基中的磷酸盐浓度降至18 m mol/L,发现E.Coli HMS174(pJMC2) 能够以丙酸为前体合成P(3HBco3HV) ,其中3HV 在共聚物中的含量为5 % ~8 % 。在5L自动发酵罐中分批补料培养E.Coli HMS174(pJMC2) ,培养基初始磷酸盐浓度为15 m mol/L,30 h 后每升培养液中干菌体可达42-5 g,P(3HBco3HV) 占干重的70 % ,其中3HV 在共聚物中的含量为4-9 % 。
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摘要:参考已发表的猪瘟病毒序列,设计并合成了一对引物,应用RTPCR 技术,扩增了猪瘟兔化弱毒(Hog cholera virus lapinized Chinese strain , HCLV) 和石门强毒株的E0 糖蛋白基因,并将其克隆到pGEMT 载体中,测定了其核苷酸序列,并推导了其氨基酸序列。结果表明我国这两株强弱不同毒株E0 糖蛋白核苷酸序列同源性和推导的氨基酸序列同源性分别为95-0 % 和94-3 % ,有13 个氨基酸的差异,HCLV 比石门株多了一个潜在的N糖基化位点。将我国这两株病毒与国外已报导的HCV 毒株E0 基因序列进行了比较,发现石门株与日本的两株毒株ALD 和GPE- 同源性较高,核苷酸序列同源性分别为97-4 % 和96-5 % ,氨基酸同源性分别为97-4 % 和96-0 % ,而与欧洲Brescia 株和Alfort 株同源性较低,核苷酸同源性分别为92-2 % 和86-5 % ,氨基酸同源性为95-2 % 和92-5 % , HCLV 与ALD、GPE- 、Brescia、Alfort 株核苷酸同源性分别为95-6 % 、94-9 % 、91-3 % 、85-5 % …
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摘要::Bm NPV gp64 基因在杆状病毒分子生物学和杆状病毒表达系统研究中具有重要的作用,以AcMNPV gp64 基因为探针,杂交显示Bm NPV gp64 基因定位于其基因组Bam HI酶切的4 .2kb 和7-4kb 片段上,克隆阳性片段,重组质粒分别命名为pZDBM42 和pZDBM74 。对重组质粒进一步杂交,将片断更精确定位于0-45kb 片段、0-75kb 片断上和1-15kb 片断上,将三个片断DNA 进行序列分析,结果表明:Bm NPV 的gp64 基因的开放阅读框(ORF) 有1530 核苷酸,编码509 个氨基酸。序列同源性比较显示,Bm NPV gp64 基因和AcMNPVgp64 基因的核苷酸序列同源性达84-3 % ,氨基酸序列同源性达94-7 % 。Bm NPV gp64 基因C 端的信号肽序列和N 端的锚定序列对于Bm NPV 表达系统的改进具有重要的意义。
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摘要:含信号肽的可溶性人干细胞因子(hSCF)cDNA 基因重组于杆状病毒转移载体pVL941 中,重组转移载体pVL941SCF与野生型苜蓿夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)DNA 共转染草地夜蛾细胞Sf9 后,通过体内同源重组构建了重组病毒AcNPVSCF。Southern 杂交表明重组病毒基因组中含有hSCF基因片段。重组病毒感染单层Sf9 细胞后,表达产物分泌到胞外培养液中。用MTT 比色法和TF1 细胞株测定表达产物与IL3 的协同效应,测得感染重组病毒的培养细胞第三天表达量为1970 units/m L培养液。Westernblotting 分析可见分子量为18 ×103 、20 ×103 和22 ×103 三条带。
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摘要:将含有自身启动子的透明颤菌血红蛋白基因( vhb) 克隆至大肠杆菌—链霉菌穿梭质粒载体pIJ653 中构建成表达载体p WY101 和p WY102 ,用它们转化阿维菌素(avermectins) 产生菌———阿维链霉菌( Streptomyces avermitilis) ,经Western blotting 分析并未检测到vhb 基因表达,但用穿梭载体pHZ1252( 其中的vhb 基因位于受硫链丝菌素诱导的链霉菌强启动子PtipA之下) 转化阿维链霉菌并经硫链丝菌素诱导,则在该菌中表达出了有活性的VHb 蛋白。pHZ1252 在阿维链霉菌中发生了重组缺失,但缺失的pHZ1252 上仍含有完整的vhb 基因及诱导型强启动子,且可在阿维链霉菌中稳定遗传,却不能再转化大肠杆菌。
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摘要:用PCR 方法从芝田硫化叶菌中扩增了编码一种新酶,即麦芽寡糖基海藻糖合酶( MTSase) 的基因,扩增的2-2kb DNA 插入到原核表达载体pBV220 中,构建成重组质粒pSBGT1 。pSBGT1 中MTSase 基因在大肠杆菌中得到表达。SDSPAGE 分析表达产物MTSase蛋白的分子量约为74kDa ,同核苷酸序列测定所推导的值相符。表达产物占细胞总蛋白约4-4 % 。pSBGT1 产生的重组酶作用于淀粉部分水解物,使DE 值降低,得到非还原糖或低还原糖。
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摘要:从土壤中分离到9 株产生β甘露聚糖酶的芽孢杆菌( Bacillus sp .) 。Bacillussp . M50250m L三角瓶摇瓶培养试验,以4 % 的魔芋粉为碳源,1-0 % ( NH4)2SO4 为氮源,0-35 %Na2CO3 ,30 ~34 ℃培养60h 产酶达到高峰。酶活力为180 ~200u/m L。100L 罐发酵,在30 ~32 ℃,1∶0 .75vvm 通气量,200r/min 条件下,发酵液酶活力高达330u/m L。酶的最适反应温度和pH 分别为50 ℃和6-0 ,低于50 ℃,pH5 .0 ~7 .0 酶稳定。Fe3+ 、Al3+ 、EDTA、Hg2+ 对酶有抑制作用,而Ba2+ 、Mn2+ 对酶有激活作用。发酵粗酶液对苎麻精干麻精练,显示对精干麻的半纤维素残胶具有降解作用。
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摘要:产β1 ,4D甘露聚糖酶的诺卡氏菌形放线菌( Nocardioform actinomycetes) 菌株NA3540 ,发酵培养72h ,发酵液离心去菌体,上清经硫酸铵沉淀,95 % 乙醇沉淀,CMSephadex A50 柱层析、羟基磷灰石柱层析、DEAE纤维素离子交换及Sephadex G100 分子凝胶过滤柱等步骤,β甘露聚糖酶的比活提高了137 倍,获得凝胶电泳均一的蛋白样品。经SDSPAGE 和凝胶过滤法分别测定β甘露聚糖酶分子量为41kD和40kD,证明该酶为单聚体;用等电聚焦电泳测得其等电点为4-8 ;经氨基酸组成分析,发现蛋白中有较高含量的Gly、Asp、Ala 及Glu 残基。该酶的最适反应温度为75 ℃,在不超过60 ℃时酶活较稳定;酶反应的最适pH 为8-0 ,pH 稳定范围为6-5~11-0 。重金属离子Hg2+ 、Cu2+ 、Pb2+ 、Fe3+ 、Co2+ 、Zn2+ 能强烈抑制该酶活性,而Mn2+ 、Fe2+ 、Ag+ 对该酶有部分的抑制作用,低浓度的Na+ 、K+ 、Li+ 对该酶基本没有影响。
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摘要:在152 株脂肪酶产生菌中,链霉菌Z942 产脂肪酶活力为596u/ mL,其最适培养基(g/L) 为:糊精10 、黄豆饼粉30 、尿素10 、K2HPO4 0-5 、MgSO4 0-5 、NaCl 1 和AEO9 0 .5 ,产酶的最适条件为:初始pH9 .5 ~10-0 ,在26 ℃培养48h 。用PVA 橄榄油乳化系统测定该酶的最适pH9 .8 ,最适温度37 ℃,在pH8-6 ~10-2 于5 ℃存放24 h ,酶活力不变。0-14mol/L 的氯化钙有较大的激活作用。
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摘要:经SDSPAGE 分析发现,空肠弯曲菌细胞紧张性肠毒素(Cytotonic enterotoxin ,CE) 的硫酸胺盐析粗提物除有一条68kD 的带外,还有一些未分开的小分子物质,而经神经节苷脂GM1 亲和层析后仅有68KD 的一条带,即表明68kD 的蛋白质为CE 的主要成分。CE 不耐热、pH 依赖和对胰酶有抗性。56 ℃和60 ℃加热30min 、100 ℃加热15min 即可完全失活。其活性在pH6-0 时最高,在pH3-0 和9-0 时均可使其完全丧失活性。在4 ℃保存超过3d 后,其活性迅速降低。抗LT 血清能完全抑制CE 的活性。
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摘要:逐级从42 ℃到44 ℃和46 ℃升温培养、并用0-05 % SDS 处理苏云金芽孢杆菌YBT1463 ,获得了一系列内生质粒被部分或完全消除的无晶体(Cry -) 突变株,对4 种Cry - 突变株的转化性能及导入的外源质粒的稳定性进行了研究。用限量培养基和42 ℃培养筛选到Cry - 突变株后,升温至44 ℃,从Cry - 突变株得到内生质粒被进一步消除的突变株;然后升温至46 ℃来培养其中突变株BMB170 ,并用0-05 % 的SDS进行处理,最终筛选到1 株无质粒突变株BMB171 。用pHT3101 、pBMB1736 、pBTL1 和pHV1249 等4 种外源质粒进行的转化及稳定性研究表明,转化频率的大小及导入质粒的稳定性与用作受体菌的Cry - 突变株携有的内生质粒数之间呈现一定的相关性,Cry- 突变株的转化频率显著高于出发菌株,其中BMB171 的转化频率最高达107 转化子/μg DNA,且所导入的外源质粒的稳定性也高于其它Cry - 突变株及出发菌株YBT1463 。
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摘要:提纯了嗜水气单胞菌(Ah)J1 株的铁载体(siderophore) ,并对其特性进行了初步分析。Ah J1 株的培养上清液经聚酰胺柱层析、双蒸水洗脱、乙酸乙脂沉淀和真空冻干,获得白色粉末。用CAS法及Arnow 法检测均为阳性,证实为铁载体,含有2 ,3二羟基苯甲酸(2 ,3DHB) 功能团,属酚盐类铁载体。高压液相色谱分析表明,此种铁载体仅含甘氨酸、赖氨酸及色氨酸。上述纯化的铁载体,在体外培养条件下能促进产铁载体为弱阳性的Ah N9a 株的生长,且能对抗EDDA 对细菌生长的抑制作用,显示铁载体能促进细菌的增殖,在细菌的感染致病过程中可能起重要作用。
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摘要:本文对发生在琼脂平板上的枯草芽孢杆菌自然遗传转化进行了初步的研究。结果表明,在相同条件下,该菌在琼脂平板上的自然转化率明显高于传统液体转化,并且转化反应对DNase 的抗性增强,通常被认为不能建立感受态的LB 培养物当涂布到平板上后也很快具有了自然转化的能力,说明在固相物表面进行的转化过程与传统的液体法存在一定的差异。在琼脂平板上,也能观察到具不同遗传标记的菌株间进行的细胞间自然转化。
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摘要:In the cultivation of gene engineered strain of Escherichia coli on glucose medium, excretion and accumulation of acetic acid inhibit not only cell growth but also the the expression of heterologous protein. It is obvious that the desirable host strain maintaining acetate at a low level is one of the approaches to increase the production of recombinant protein. The present article deals with the selection of mutants of E.coli DP19, DP8, which grow on the medium containing pyruvate as the sole carbon…
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摘要:Killer toxin from \%Saccharomyces cerevisiae\% SK was isolated by ultrafiltration of culture supernatants and purified by poly(ethylene glycol). The toxin migrates as one single protein band on SDS-PAGE and its molecular weight is 15kD. The SK toxin has the greatest lethal effect on the sensitive yeast strain in the lat lag phase. Extraction and purification of killer heretity factor(dsRNA) from SK found that M dsRNA plasmid and L dsRNA plasmid have different molecular lengths being 1.7kb and 4.0kb.
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