摘要:

摘要:PCRRFLP分析适用于种和种间水平的多相分类研究。文章对PCRRFLP方法应用于糖单孢菌属分类的具体方法进行了探讨；报道了一组适于糖单孢菌属PCRRFLP分析的限制性内切酶，并用这组酶对6株糖单孢菌属分离株进行了研究，进一步探讨了实验菌株在该属的分类地位。同时指出了PCRRFLP方法应用中应注意的问题。

摘要:利用广宿主质粒载体pJMS6αlac将苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白基因cry1Ac和cry2Aa基因分别及一起进行克隆，将重组质粒导入能在多种作物上定殖、对植物病菌有良好抑菌和防治作用的荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)P303菌株，分别得到工程菌株IPP101、IPP201和IPP202。PCRRFLP和Southern blot检测均证明目的基因已经导入了工程菌。SDSPAGE电泳显示工程菌中存在明显的Cry1Ac蛋白带；透射电镜观察发现含cry1Ac基因的两个菌株IPP101和IPP202中杀虫蛋白形成了典型的菱形晶体和蛋白包含体，而在野生P303菌株中均无这些结构。这些结果说明，工程菌中cry1Ac基因得到了很好表达。室内杀虫试验表明：工程菌对棉铃虫初孵幼虫的致死中浓度(LC50)，只含cry1Ac的IPP101为000812mL/g饲料，只含cry2Aa的IPP201为002604mL/g饲料，含双基因的IPP202为000186mL/g饲料；HD73为000170mL/g饲料。cry1Ac和cry2Aa双基因表达产物具有显著增效作用，共毒系数达3328。

摘要:根据已报道的邻苯二酚1，2双加氧酶基因(tfd C)序列，设计PCR引物，从一株邻单胞菌(Plesiomonas)的pL1质粒上扩增到tfd C基因片段，连接到pGEM\|T载体上，并转化大肠杆菌JM109菌株，筛选到阳性克隆。序列分析结果表明，PCR产物全长801bp，有一个阅读框，编码255个氨基酸，与增氧产碱菌(Alcaligenes eutroplus)的tfd C基因相比，在693位相差一个碱基(C→A)，导致编码产物在228位相差一个氨基酸。将目的片段克隆到pBluescriptII KS质粒载体上，筛选到阳性克隆pBt12G,在大肠杆菌JM109中可表达邻苯二酚1，2双加氧酶(C120)的活性；将翻译起始密码子为ATG的目的片段克隆到pET\|30a质粒载体上，筛选到阳性克隆pET30A,在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中可表达目的蛋白。C120是芳香族化合物降解过程中的关键酶，为了进一步在草坪草中表达tfd C基因，利用草坪草降解环境中芳香族污染物，将该基因翻译起始密码子由GTG突变成ATG，突变后的基因在大肠杆菌中可正常表达C120的活性。

摘要:从E.coli MC4100菌体的染色体DNA中利用鸟枪法克隆含编码肉碱消旋酶及相关因子的caiDE基因片段，并经序列分析验证。由重组质粒pJX393亚克隆得到pDSW2重组表达质粒，后者转入E.coli BL21(DE3)菌株中，经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导，在聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)上分子量为30kD和24kD附近可见明显的表达蛋白带。

摘要:采用聚合酶链式反应(PCR)，从大肠杆菌O.138基因组DNA中分别扩增出志贺菌样毒素II型变体B的结构序列和包括信号肽的全序列两段基因，定向克隆进表达载体质粒pYA3334(asd\++)的EcoRI\,BamHI位点之间，构建成重组表达质粒。在大肠杆菌X6212(Δasd)筛选出重组质粒pB\-0和pB\-1后，经中间宿主X3730转化过渡，再导入ΔasdΔcyaΔcrp减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550，构建成宿主和载体之间具有平衡致死结构的SLTIIvB重组菌。SDSPAGE和Westernblot分析重组菌X4550(pB\-0)在76kD左右处有一条特异性蛋白条带。动物免疫试验表明该重组菌能刺激机体产生针对SLTIIvB和沙门氏菌的特异性抗体。这为进一步研制相应的抗猪水肿病及相应沙门氏菌病的双价活疫苗奠定了重要基础。

摘要:通过反向遗传学方法克隆到圈卷产色链霉菌尼可霉素生物合成基因簇中约7.0kb的DNA片段。该片段除含有尼可霉素生物合成基因sanF外，对sanF上游约22kb的BglⅡDNA片段进行序列测定及分析表明，还含有两个完整的开放阅读框(ORF)。ORF1由1233个核苷酸组成，ORF2由195个核苷酸组成，它们分别编码由410个氨基酸残基和64个氨基酸残基组成的蛋白质，依次命名为sanH和sanI。蛋白序列数据库比较结果表明，SanH和SanI与浅灰链霉菌(\%Streptomyces griseolus)\%中共转录的细胞色素P450(cytochrome P450)和铁氧还蛋白(ferredoxin)有较高的同源性，一致性分别为46%和56%，相似性分别为62%和70%。基因功能研究表明，sanH基因的破坏虽不影响圈卷产色链霉菌产生的尼可霉素的生物活性，但该基因可能参与了尼可霉素羟基化反应的生物合成。

摘要:质粒pSGL1(74kb)是从球孢链霉菌(\%Streptomyces geobisporus)\%中分离得到的一个高拷贝质粒，已测定其最小复制子序列。从球孢链霉菌总DNA中采用PCR方法扩增获得编码C1027前蛋白信号肽的DNA片断gpp。将gpp克隆至pSGL1的衍生质粒pSGLN中，获得新的链霉菌表达型质粒载体pSGLgpp。应用该质粒进行了人的河溶性白细胞介素1受体I型的表达。

摘要:为了克隆被孢霉不饱和脂肪酸生物合成途径的相关酶基因，构建了基于λgt10的被孢霉cDNA文库。cDNA文库库容量为2×１０.６pfu。以已克隆的被孢霉△９脂肪酸脱饱和酶保守区cDNA为探针对被孢霉cDNA文库进行筛选。经过两轮筛选获得1个阳性克隆，其插入片段长度大于16kb。

摘要:用RTPCR扩增了12个不同时期分离的HCV毒株E2基因主要抗原区域的cDNA片段并对其进行了序列测定。应用DNAstar序列分析软件对所测的12个HCV毒株与国内外已知的6个毒株Alfort株、Ald株、Brescia株、Gpe株、C株、CW株及早期已测定的HCLV株、HCVSM株和北京顺义株(BJSY2/96)3个毒株的相应片段进行了同源性比较分析。E2基因主要区域长度均为224 bp,包括从HCV 2485到2708位的E2基因B、C区域。所测的疫苗株HCLV与国外测得的疫苗株C株核苷酸及氨基酸同源性分别为991%和100%，表明目前应用的疫苗株是稳定的；用目前我国流行的部分野毒株对HCLV株免疫猪的攻击试验表明，HCLV对野毒株均具有很好的免疫力，这与序列分析结果相吻合。根据系统树分析，可将HCV分为两大群，5株90年代的野毒株及1株80年代的野毒株(其中北京3株、河南2株、广东1株)均与国内外C株、标准株属同一群(即第一群)，其核苷酸及氨基酸的同源性分别为857%～100%和838%～100%；与Alfort株同属第二群的有6个野毒株(广西北海、辽宁、河北黄骅、吉林、深圳光明、四川成都)，其中80年代与90年代的野毒株各有三株，核苷酸及氨基酸的同源性分别为843%～100%和851%～100%；21株HCV的核苷酸及氨基酸的同源性分别为781%～100%和784%～100%。两群之间的特征性差异表现在713和729位氨基酸位点的不同，经分析发现猪瘟野毒株具有复杂性与多样性。

摘要:本文利用同位素代谢标记在HEV感染85～10.5，6.5～7.5h分别检测到1及2个亚基因组RNA，而感染21h后及在成熟的病毒颗粒内未能检测到亚基因组RNA。通过杂交实验，发现HEV的亚基因组RNA具有典型的共3′端的半套式结构，且基因组RNA与亚基因组RNA的5′端不存在共同的引导序列。通过紫外转录图谱发现HEV的亚基因组RNA是通过独立转录的方式产生的。利用引物延伸反应发现两种亚基因组RNA的转录起始位点分别位于RNA聚合酶区及非结构区、结构区的基因间序列。

摘要:运用平板筛选法从20株不同来源的菌株中得到一株产组成型漆酶的担子菌(Basidiomycete sp.)。它在自制DC培养基上产酶能力达到058IU/mL；振荡培养的产酶效果约是静置培养的4倍。漆酶的产生与生物量在培养8d内呈现平行关系，但随后酶量并不随之而继续上升。4g/L的酪氨酸和胰蛋白胨有利于酶的产生，分别可使酶活力最高增加到249IU/mL和20IU/mL。某些化学试剂对酶的产量尚未达到诱导效果，但丁香醛连氮和邻联甲苯胺对酶产量有一定的促进作用。40℃下刺激1h后，可使酶活力提高13倍。

摘要:对耦合中空纤维膜超滤分离进行游离细胞催化合成ATP过程进行了实验研究，考察了细胞的催化效率和膜组件的操作稳定性。结果显示，中空纤维超滤膜的耦合分离能有效地截留反应液中的游离酶，其中乙醇脱氢酶(ADH)和已糖激酶(HK)的稳态截留效率在95%以上。耦合膜分离的酵母细胞催化ATP合成反应可重复使用2.5～3.0次，酶的利用率比普通分离的细胞提高2.0～2.5倍。中空纤维超滤膜于0.1Mpa工作压力下连续11批耦合分离操作，膜的渗透性无明显下降，过滤速率保持在初速率的95%以上。在稀释速率0.25h-1下，反应体系保持了连续5h的ATP高转化率合成与分离耦合的拟稳态操作。

摘要:稻温病菌的分生孢子、芽管、附着胞的混合物作为抗原免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在50%PEG下融合成杂交瘤细胞，用间接ELISA筛选阳性孔，获11株单克隆抗体。间接免疫荧光试验表明其中4株单克隆抗体2B4、4A1、1D1和2H4分别与孢子、芽管或附着胞有特异性结合；Western blotting分析发现2B4、4A1、1D1单克隆抗体分别与孢子、芽管表面的提取物有不同的结合带；此四株单克隆抗体均干扰稻温病菌附着胞形成，并抑制稻温病菌在叶表的致病性。

摘要:从南极乔治王岛土壤分离到一株诺卡氏菌形放线菌C3905菌株。其气生菌丝白色，基内菌丝无色至乳脂或浅粉；菌丝直径0.5～0.8μm，断裂为杆状和球状体，表面光滑。胞壁化学I型；无枝菌酸；磷酸类酯PI型；优势甲基萘酯为MK9(H4)。DNA中G+C含量为68.3～68.9mol%。兼性嗜冷，生长适温为15℃～20℃。产生抗肿瘤抗生素sandramycin。基于以上特征及分子遗传分类的研究结果，我们建议C3905菌株作为白色类诺卡氏菌的一个变种，命名为白色类诺卡氏菌南极变种，Nocardioides albus var.antarcticus。

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