摘要:通过数值分类和16S rDNA PCR\|RFLP分析，对分离自新疆地区的中度嗜盐革兰氏阴性菌进行研究，发现了一个新类群。在此基础上，进行了中心株AI3的16S rDNA全序列分析，并与中度嗜盐菌已知种和相关种进行比较，得到系统发育树状图。在此树状图中，大多数参比菌株聚在一起，其16S rDNA全序列的同源性在96%以上，而AI3与参比菌株的16S rDNA全序列相比，其相似性低于75%。但是，AI3与Alcanivorax borkumensis［１］的16S rDNA全序列的相似性为96%，与Halobacillus litoralis的16S rDNA全序列的相似性为99%，三者构成一个独立的发育分支。这说明在系统发育上，AI3与参比菌株属于不同的分支，是一个新的类群。在新类群内，菌株之间的DNA同源性大于70%，而中心株AI3与标准菌株伸长盐单胞菌(Halomonas elongata)的DNA同源性为44%，表明新分离的菌株可能构成一个新种群。

摘要:利用纤维素降解细菌和纤维素粘附的方法分别从新鲜牛粪、高温堆肥和本实验室保存的纤维素降解富集物中分离得到4株嗜热厌氧纤维素降解细菌。分离菌株为革兰氏染色阴性，直的或稍弯曲杆菌，菌体大小为0.4μm～0.6μm×3μm～15μm，严格厌氧，不还原硫酸盐，形成芽孢。多数芽孢着生于菌体顶端。分离菌株能利用纤维素滤纸、纤维素粉Whatman CFII、微晶纤维素、纤维素粉MN300和未经处理的玉米秆芯、甘蔗渣、水稻秸杆。分离菌株在pH6.2～8.9、温度45℃～65℃范围内利用纤维素，最适pH为7.0～7.5，最适温度为55℃～60℃，发酵纤维素产生乙醇、乙酸、H2和CO2。分离菌株还可利用纤维二糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖、山梨醇作为碳源。部分长度的16S rDNA序列分析表明，分离菌株EVAI与Clostridium thermocellum具有99.8%相似性。

摘要:本研究用鸟枪法构建了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HB002的基因组文库，经平板法筛选得到了六株能水解合成底物对硝基苯αD葡萄糖吡喃糖苷的阳性克隆，经鉴定均含克隆了寡聚1，6葡萄糖苷酶基因的重组质粒(命名为pHBM001～pHBM006)。选择pHBM003，对其插入片段测序分析，此片段内有一编码561个氨基酸的开放阅读框，该蛋白质的计算分子量为65985kD。HB002的寡聚1，6葡萄糖苷酶的氨基酸序列与Bacillus sp.和凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)的寡聚1，6葡萄糖苷酶的氨基酸序列一致性分别为81%、67%，相似性分别为89%、79%。从pHBM003中扩增出寡聚1，6葡萄糖苷酶基因，克隆到pBV220上，转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α，得到三个能水解对硝基苯αD葡萄糖吡喃糖苷的阳性克隆HBM0031～HBM0033，将此三个菌株热诱导表达，SDSPAGE电泳可检测到特异表达的蛋白质，其中HBM0031、HBM0032表达的蛋白约66kD，为完整的寡聚1，6葡萄糖苷酶，而HBM0033表达的蛋白质偏小；表达的蛋白质均有寡聚1，6葡萄糖苷酶活性。

摘要:筛选到一株具海因水解活力的微生物，经鉴定后命名为真养产碱杆菌112R4。该菌能水解海因、二氢尿嘧啶和琥珀酰亚胺，且对琥珀酰亚胺活力最高，但不水解5单取代海因和5，5’双取代海因，因而被确定为含有酰亚胺酶。真养产碱杆菌112R4能在以琥珀酰亚胺为唯一碳、氮源的培养基上生长，表明该菌中存在琥珀酰亚胺完整的转化途径。从112R4基因组DNA出发，用鸟枪法克隆了一个6kb的与环酰亚胺水解相关的DNA片段；进一步亚克隆得到了带酰亚胺酶基因的2kb的DNA片段，并进行了序列测定。缺失分析确定了一个876bp的ORF为真养产碱杆菌112R4的酰亚胺酶基因，推测编码一个291个氨基酸的多肽，这是第一次报道微生物酰亚胺酶的核酸和蛋白序列。推测的氨基酸序列在蛋白数据库中进行了比较，结果表明，酰亚胺酶与已知的环酰胺酶没有明显的同源性，也不属于氨酰水解酶蛋白超家族，因而被分类为一种新的环酰胺酶。真养产碱杆菌112R4的酰亚胺酶与芽生杆菌A17p4的酰亚胺酶N端的20个氨基酸有较高的同源性，一致性为60%，与多糖脱乙酰酶保守序列也部分同源，一致性为14%。带有酰亚胺酶基因的重组质粒在大肠杆菌中得到表达，在lac启动子控制下，使用1mmol/L IPTG诱导5h，酰亚胺酶活力达到3200U/L,为供体菌真养产碱杆菌112R４的7倍。

摘要:用PCR扩增的方法从耐盐的枯草杆菌中克隆出一个13kb长的DNA片段，经功能检测，证明正向插入片段与大肠杆菌的脯氨酸营养缺陷特性(proB-)能够营养互补。含有该重组质粒的大肠杆菌DH5α在基本培养基上的耐盐能力从2%提高至4%。通过引物步行法测定了该插入片段的核苷酸序列。利用DNAsis软件进行序列分析发现，该片段第122～1235bp核苷酸编码一个由370个氨基酸组成的蛋白质分子，其上游存在非典型的-10区，典型的-35区和核糖体结合位点，起始密码子处有最佳翻译起始效率的侧翼核苷酸序列。将其与Genebank中的已知基因的序列和编码的氨基酸序列进行同源性比较，结果表明该片段与枯草杆菌168的核苷酸序列、氨基酸序列的同源性分别为81%和90%。证明该基因确实是一个proB基因。通过与三十个不同种属微芽生物proB基因的氨基酸序列比较，发现该蛋白存在有可能与形成酶的活性中心和三维结构有密切关系的几个绝对保守的区域。

摘要:筛选的苏云金芽孢杆菌野生菌株15A3经鉴定属血清H21型科默尔亚种。用PCR及RFLP方法对其cry1类基因分析证明其含有cry1Aa,\%cry1\%Ac,\%cry1\%Ca,\%cry1\%D,\%cry1\%I及cry2六种cry基因，其cry1A基因N末端145kb片段与已发表的序列有差异。表达晶体蛋白质的分子量分别为130，79，70，65，51和45kD。对家蝇致畸实验证明其不含β外毒素。发酵液对棉铃虫，甜菜夜蛾，小菜蛾及美国白蛾均具较高的毒力。证明野生的苏云金芽孢杆菌资源中也有具国外工程菌所特有的高效杀虫晶体蛋白基因组合的优良菌株。

摘要:用化学诱变剂N甲基N′硝基N亚硝基胍进行随机诱变，获得了穿梭启动子探测质粒pPGV5的温度抗性突变型pPGV5(tr65)，序列分析发现质粒上卡那霉素核苷转移酶基因kan的+238位碱基发生了G→T的单点突变。以来自嗜热脂肪芽孢杆菌FDTP3菌株的耐热邻苯二酚2,3双加氧酶基因pheB作为报道基因，构建了转录融合质粒pPGVPB452，用高压电穿孔法将其转化嗜热脂肪芽孢杆菌，通过报道蛋白活性的分析，证明了嗜热脂肪芽孢杆菌T521菌株的6磷酸葡萄糖异构酶同工酶基因pgiB上游含启动子样序列的425bp片段在嗜热脂肪芽孢杆菌中不具有启动子功能。

摘要:研究了黑暗链霉菌的基因转移系统，探索了通过PEG介导的原生质体转化、接合转移向黑暗链霉菌中转入外源DNA的可能性。多次尝试用质粒pIJ702转化黑暗链霉菌9904原生质体均未成功。对原生质体进行“热处理”后转化、利用单链DNA转化等都不能将质粒导入黑暗链霉菌中，表明黑暗链霉菌对外源DNA有很强的限制修饰作用。利用接合转移将具有oriT的大肠杆菌链霉菌穿梭质粒pHZ132转入大肠杆菌ET12567(pUZ8002)中，获得供体菌ET12567(pUZ8002，pHZ132)。将供体菌与预萌发的黑暗链霉菌9904的孢子进行接合转移，成功地将pHZ132转入黑暗链霉菌9904中。质粒pHZ132经黑暗链霉菌自身修饰后也可转入黑暗链霉菌9904菌株的原生质体中，转化率约为103/μg DNA(pHZ132)。

摘要:回文结构序列是最常见的一种DNA序列，它是许多基因表达调控因子的顺式作用元件。本文设计了不同长度的回文结构序列，构建了Cre\|loxP重组系统，通过共转化含有cre基因的质粒和含有loxp位点的质粒，观察共转化菌株质粒图谱的变化，研究了重组系统在细菌中对基因表达的作用，同时研究不同长度回文结构对基因表达的影响，结果发现长度在20bp以下回文序列对下游基因的表达没有影响，而长于34bp的回文结构序列则会抑制下游基因的表达。

摘要:根据GenBank中热带假丝酵母菌株pk233(ATCC 20336)POX4和POX5基因序列，设计了两对引物。通过PCR扩增，用一种简易的方法克隆了1230菌株中这两个基因。对POX4、POX5的测序表明，1230菌株的POX5基因与pk233菌株的POX5基因存在菌株间的差异。这种差异对蛋白功能的影响有待进一步研究。对POX4和POX5编码的蛋白PXP4、PXP5进行Pfam分析和二级结构预测后，推测PXP4和PXP5的N端可能是FAD结合部位。

摘要:应用RTPCR技术克隆了2个水稻黑条矮缩病毒 (rice blackstreaked dwarf virus,RBSDV)中国分离物，即浙江分离物和河北分离物的基因组片段S7，并测定了他们的全序列。结果表明：RBSDV浙江分离物(RBSDVZj)基因组片段S7全长2193nts(EMBL登录号为AJ297427)，RBSDV河北分离物基因组片段S7全长2190nts(EMBL登录号为AJ297428)，二者均含有两个开放阅读框(open reading frame,ORF)，分别编码约41kD和36kD多肽，2个中国分离物核苷酸同源性高达99%，相应的ORF编码的多肽同源性分别为100%和94.4%，与日本RBSDV基因组片段S7核苷酸同源性为93.4%和93.8%，相应ORF编码的多肽同源性分别为98.1%(ORF1)、96.5%和97.8%(ORF2)，与意大利MRDV S6核苷酸同源性为85.1%和85.3%，相应多肽同源性分别为92.3%(ORF1)、85.5%和86.8%(ORF2)。

摘要:测定了4株鹅源新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因5’端1700核苷酸片段的序列，并由此推导了F蛋白氨基酸序列，并对鹅源NDV的基因型分类地位进行探讨。结果表明，4株病毒F基因的同源性大于97%，与DNV标准强毒株F48E8 F基因的同源性为860%～868%，F基因转录起始序列及起始密码子位置与已知NDV完全相同；F蛋白具有和已知NDV相似的各种功能区，F蛋白前体F0裂解位点附近的氨基酸序列为112RRQKRF117，符合NDV强毒株的特征。对F基因第334～1682位核苷酸之间3种限制性内切酶HinfⅠ、BstoⅠ\,\%Rsa\%Ⅰ酶切图谱的分析表明，4株病毒的基因型与文献报道的I～Ⅷ型有明显差异。

摘要:研究了乙内酰脲酶产生菌节杆菌K1108的产酶条件。该菌乙内酰脲酶为诱导酶，存在于细胞内，乙内酰脲水解酶和N氨甲酰氨基酸水解酶是同时被诱导产生。最适诱导物为5苄基乙内酰脲，而5吲哚甲基乙内酰脲和5苯基乙内酰脲等不能诱导其酶的产生。筛选到一种安慰诱导物，诱导活性提高了2倍多。对产酶培养基进行了筛选和优化，在最适条件下，K1108产酶能力可达108U/mL。

摘要:从褐腐真菌中能强烈降解纤维素的代表菌株密粘褶菌(Gloeophyllum trabeum)的胞外酶液中首次分离纯化得到一低分子量的活性多肽组分(称作Gt因子)，此组分能在有O.2和Fe³⁺存在时产生羟基自由基HO·；对纤维素降解的研究表明，Gt因子不同于纤维素酶对纤维素的β1.4糖苷键的水解作用，而以HO·氧化的途径作用于纤维素，导致纤维素中氢键的断裂，降低纤维素的结晶度，使其暴露出更多的末端，从而有利于纤维素的进一步降解。

摘要:应用生物化学方法并结合扫描电镜，研究柠檬醛掺入黄曲霉细胞，并通过损伤线粒体(Mt)，导致抑制其生长的机理。结果表明，在药物致敏浓度时，菌丝体经该醛作用后，胞内Mt呈不规则增多，氧化还原反应系统受到破坏，与对照组相比，柠檬醛组的琥珀酸脱氢酶(Succinate Dehydrogenase,SDH)、苹果酸脱氢酶(Malate Dehydrogenase,MDH)活性分别呈不可逆下降271%和242%，随着药物浓度的升高，SDH、MDH的活性直至消失；以琥珀酸、α酮戊二酸和丙酮酸为底物时，线粒体呼吸速率分别下降24.1%、14.3%和36.1%，提示柠檬醛能使菌丝体DNA、RNA、脂类和蛋白质等生物合成受到抑制，促进细胞死亡。

摘要:本文分析鸟苷产生菌枯草芽孢杆菌(Bacilus subtilis)在50L多参数自控发酵罐上的发酵过程特点，基于多种在线及离线参数的检测，通过相关分析将生理调控的工艺参数和生物合成过程中的代谢流分布相联系，发现了发酵过程中的代谢流向糖酵解和TCA循环的迁移，并初步分析了产生代谢流迁移的原因，在此基础上优化发酵过程使产苷水平稳定在30g/L。

摘要:以4种难溶性磷酸盐为培养基，发现供试菌株溶解这些磷酸盐的特性差异很大，真菌溶磷能力普遍比细菌要高得多。以NO3-为氮源时的溶磷量通常高于以NH4+为氮源时的溶磷量，只有2TCiF2对氟磷灰石及4TCiF6对磷酸铝的溶解能力以NH4+为氮源时较高。大多数菌株较易溶解CaP(氟磷灰石和磷矿粉)，其次为AlP(AlPO4)，而溶解FeP(FePO4·4H2O的能力都比较弱，只有曲霉2TCiF2具有较强的溶解FeP能力，尤其是当供给NO3-时，溶解FeP的活性比供给NH4+时大幅度提高。欧文氏菌4TCRi22和肠杆菌1TCRi15能大量地溶解氟磷灰石，而两株节杆菌对磷矿粉的溶解能力最强。供试菌株的溶磷作用可能是由于分泌的有机酸与金属离子络合或螯合作用所致，欧文氏菌和肠杆菌溶解难溶性磷过程中，非有机酸物质可能在起主要作用。

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