摘要:运用PCR方法，从野生型钝齿棒杆菌株(Corynebacterium crenatum)AS1542及具有AEC抗性的突变株CD945染色体上分别扩增出天冬氨酸激酶(AK)基因(ask)，构建了重组质粒。核苷酸序列分析表明，C.crenatum AS1542AK基因与C.crenatum CD945相比，第1199位的碱基由T变为C，引起酶蛋白β亚基第80位氨基酸从亮氨酸变成脯氨酸。该氨基酸的突变在蛋白结构上位于ACT结构域内，该区受赖氨酸调控。C.crenatum AS1542的AK基因的编码区核苷酸序列与C.glutamicum\,C.flavum及B.lactofermentum相比，同源性分别为97.23%、97.55%和97.62%，酶蛋白氨基酸序列的同源性分别为99.76%、99.52%和99.76%。但在AK基因的启动子上游序列部分与其它棒杆菌相比有较大差异。

摘要:将编码平颏海蛇磷脂酶A2的基因(PLA29)分别克隆于硫氧环蛋白基因融合表达载体pThioHisC和pTRX的HP\|trxA和trxA基因的3′末端，构建符合读码框的融合表达载体pThioHisC\|PLA2和pTRX\|PLA2。25℃下经IPTG诱导，PLA2融合蛋白在两种原核系统中均能获得较高表达，但PLA2在pTRX系统下的表达量和蛋白溶解性优于pThioHisC系统。将两种系统下的表达产物进行金属螯合亲和层析纯化，Trx\|PLA2融合蛋白的纯度可达85%以上，而HPTrxPLA2不表现出对介质的亲和性，难以得到纯化。由此，将pTRX\|PLA2载体系统确立为进一步大量表达和纯化的载体系统。

摘要:根据嗜盐菌(Halobacterium salinarum)NRC\|34001中硫解酶的基因序列信息，采用PCR技术从菌株Halobacterium sp.ZP\|6中克隆了极端嗜盐硫解酶的基因，并对此酶的氨基组成进行了分析。同非嗜盐硫解酶相比，极端嗜盐硫解酶不但含有较多的负电荷氨基酸，较少的正电荷氨基酸和强疏水氨基酸，而且同类氨基酸中的小氨基酸含量明显增高。这表明极端嗜盐硫解酶的嗜盐特性不单来自形成的分子静电屏蔽网和疏水作用的调节，且与分子表面张力减小密切相关。

摘要:应用RTPCR技术，从人脐静脉内皮细胞中扩增出编码人可溶性血管内皮细胞生长因子 (VEGF)受体Flt1胞外区前四个结构域的基因片段，亚克隆至pUCl8质粒进行测序，将目的基因片段连接至链霉菌表达载体pSGLgpp，获得重组质粒pSGLgppF，将其转化至Streptomyces lividans TK24， 获得基因工程菌株Sreptomyces lividans (pSGLgppF)，对其培养上清液进行SDSPAGE及Western blot分析，结果 显示，在636kD处有特异性条带出现，表明sFLT1在链霉菌中获得了成功表达，受体配基结合实验显示表达产物与VEGF可特异性结合，表明其具有配基结合生物活性。

摘要:利用四环素抗性基因启动子在金色链霉菌中表达透明颤菌血红蛋白基因。在1m3发酵罐中研究了工程菌株的生长代谢特性。在溶解氧充足的条件下，透明颤菌血红蛋白表达，对金色链霉菌生长代谢未产生明显影响，工程菌株与参比菌株的生长代谢特性基本一致，工程菌株和参比菌株金霉素最终浓度分别为22905u/mL、22896u/mL。在低溶解氧条件下，透明颤菌血红蛋白的表达，可促进金色链霉菌菌体生长、菌丝活力保持和金霉素的合成：工程菌菌体浓度比参比菌株高5％～10％，产物合成提高11.4％。

摘要:运用PCR介导的定点突变对米曲霉(Aspergillus　oryzae)来源的木聚糖酶在毕赤酵母中的重组表达进行了研究，获得一表达量远远高于亲本的突变株I156A，对其进行了提纯并研究其酶学特性，除热稳定性外其余与亲本基本一致。突变株I156A所产木聚糖酶XynFl的分子量为35kD，在pH 4～9范围内稳定，最适pH为70，最适温度为45℃，在50℃以下稳定性略高于亲本。

摘要:用化学法合成克鲁维酵母的菊粉酶基因的信号肽序列(INU)，将其嵌入酵母附加型表达质粒pYES2，得到一套新型的分泌表达载体pYES2I，pYES2Ⅱ,pYES2Ⅲ。然后用PCR方法分别扩增大肠杆菌的天冬酰胺酶基因(ASN)和短芽孢杆菌α乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)基因，连接到INU下游，得到重组质粒pASN和pALDC。分别将这两个重组质粒转化酿酒酵母菌株INVScⅠ中表达，胞内和胞外的酶活分析表明ASN和ALDC基因都能在酿酒酵母中分泌表达，表明菊粉酶信号肽序列能很好地将酿酒酵母中的重组蛋白分泌到胞外。稳定性分析表明，重组酵母菌株在没有选择压力的条件下连续接种培养100h，未发现重组质粒的不稳定性。

摘要:通过PCR方法克隆了从哈尔滨分离的一株鸡贫血病毒(CAV)的全基因，并对其进行了测序，该病毒基因组为环状，全长2298bp,含有三个互相重叠的开放读码框和一个调控区。将克隆的基因与GenBank收录的CAV基因比较，同源性至少为97%，未发现与本次克隆的CAV基因完全一致的分离株。与德国分离株Cuxla、26p4和马来西亚分离株分别有42、42和72个核苷酸不同，同源性分别为98.2%、98.2%和96.9%。与德国分离株Cux1b相比，除在调控区内少一个类似增强子的重复序列外，尚有39处核苷酸不同。它与分离于欧洲的几株CAV的亲源性要比来自亚洲的马来西亚株近。对CAV哈尔滨分离株、26p4、Cux1b、Cux1a和马来西亚株的VP1、VP2和VP3蛋白比较，VP2的保守性最高。

摘要:以RTPCR法扩增获得H9亚型禽流感病毒(AIV)分离株(A/Chicken/China/F/1998)的血凝素(HA)基因，将其定向插入鸡痘病毒转移载体1175的痘苗病毒启动子P75的下游，得到重组转移载体1175HA。以脂质体转染法将1175HA转染至已感染鸡痘病毒282E4疫苗株(wtFPV)的鸡胚成纤维细胞(CEF)中，通过在含Xgal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化rFPVHA。以间接免疫荧光法证实感染rFPVHA的CEF表达了HA。rFPVHA在免疫7日龄SPF鸡7天后即能诱生可检出的血凝抑制(HI)抗体，14天后诱生的HI抗体到达高峰，且诱生的HI抗体保持较高水平达55天。在7日龄SPF鸡及含抗FPV母源抗体的商品鸡上进行的免疫效力试验表明，rFPVＨＶ能显著抑制静脉攻毒后免疫鸡从泄殖腔的排毒，效果与AIV全病毒灭活苗相当。

摘要:利用一对特异性引物，用PCR的方法从禾谷缢管蚜体内扩增出了病毒结合蛋白基因，序列测定结果表明其长度 为1647 bp，编码548个氨基酸，与GenBank中的禾谷缢管蚜美国生物型Buchnera groELNT核苷酸序列同源性为97%，氨基酸同源性为97.4%。构建了2个原核表达载体并进行表达得到了69kD融合蛋白和63kD的非融合蛋白。

摘要:用番茄花叶病毒(ToMV)免疫的BAL B/c鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合，经筛选克隆，获得4株能稳定传代并分泌抗ToMV单克隆抗体(Mab)的杂交瘤细胞，其中2株能同时检测ToMV和烟草花叶病毒(TMV)，各单克隆抗体腹水ELLSA效价在1∶32 000～1∶1 024 000之间。经TASELISA测定，4株单克隆抗体检测病汁液的稀释度均能达到1∶2 000倍以上。4株单克隆抗体与其他病毒无交叉反应。Westernblot分析表明，其中两株与ToMV176kD的外壳蛋白亚基有特异反应，而另两株无反应，推测它们是针对构象决定簇的抗体。

摘要:通过目标基因内部缺失片段的获得以及DNA重组交换等技术的有效运用，在氨基酸工业重要生产菌谷氨酸棒杆菌中，成功地定点构建了两个目标研究基因的单基因缺失菌株和双基因缺失菌株，并通过了PCR和测序等方法的分析验证。

摘要:本文研究软腐欧氏杆菌分泌致病蛋白的Ⅲ型分泌系统的组分是否能识别梨火疫欧氏杆菌存在于mRNA上的分泌识别信号。用PCR的方法，将带有上游75bp可以在其mRNA的5′端形成一个典型的作为Ⅲ型分泌识别信号的茎环结构的梨火疫欧氏杆菌的诱导植物过敏反应的harpin的基因hrpN，从带有hrp基因簇的质粒pCPP430上克隆到pGEM\|T载体上，获得重组质粒pWGF1，经化学法转化到hrpN基因的转座突变体DH5α(pCPP430hrpN-)中，同时将pWGF1电击转化到胡萝卜软腐欧氏杆菌Se9R中，转化子的无细胞抽提物(CFEP)经Western\|blot检测到harpin蛋白已被表达；带有双重质粒的DH5α(pCPP430hrpN-/pWGF1)在番茄植物上可以引起过敏反应，Se9R(pWGF1)在大白菜上的致病力明显低于Se9R,初步表明一种植物病菌的harpin蛋白可被另外一种病菌的Ⅲ型分泌系统所识别、分泌并保持生物活性。

摘要:探讨了液体发酵嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophile)产生的内切β葡聚糖酶的分离纯化及特性。粗酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE\|Sepharose Fast Flow阴离子层析、Pheny1\|Sepharose疏水层析、Sephacry1 S\|100分子筛层析等步骤便可获得凝胶电泳均一的内切β\|葡聚糖酶。经125%SDS\|PAGE和凝胶过滤层析法分别测得所分离纯化酶蛋白的分子量约为67.8kD和69.8kD。该酶反应的最适温度和pH分别为60℃和40～45在pH50条件下，该酶在60℃下稳定；70℃保温1h后，仍保留30%的活性；在80℃的半衰期为25min。金属离子对内切β\|葡聚糖酶的活性影响较大，其中Na+对酶有激活作用；Fe2+、Ag+、Cu2+、Ba2+、Zn2+等对酶有抑制作用。该酶对结晶纤维素没有水解能力。

摘要:采用一系列的现代分子生物学技术，避开传统的分离培养过程，探讨自然界中微生物种群的基因多样性。经过直接从土壤中抽提总DNA，并对总DNA中16S rDNA V3可变区序列作PCR扩增、变性梯度凝胶电泳等，对农田土壤微生物种类分布进行初步的研究，发现不同的农田土壤间的菌种差异相当显著，同时对部分农田微生物的系统分类作了初步尝试，为农田土壤微生态和高效菌肥的研究提供了新的实验依据。

摘要:研究了固定化啤酒酵母细胞催化三甲基硅乙酮不对称还原反应，系统探讨了振荡速度、底物浓度、固定化细胞浓度、pH值和反应温度对反应速度、产率和产物光学纯度的影响。结果表明，上述因素对固定化啤酒酵母细胞催化三甲基硅乙酮不对称还原反应均有较显著的影响。振荡速度以150r/min为宜，底物浓度和固定化细胞浓度分别为14mmol/L和0.15g/mL较佳，适宜的pH值为7.3，最佳反应温度为25℃～30℃。在该优化反应条件下，反应最大产率和产物的光学纯度分别高达84.9%和90.2%ee。

摘要:从农药污染土样中分离出的一株细菌具有彻底降解甲基对硫磷的能力。该菌经生理生化特性分析和16S rDNA序列同源性分析，鉴定为假单胞菌属，命名为Pseudomonas sp.WBC\|3。该菌在pH7～8、温度23℃～30℃范围内均生长良好，对甲基对硫磷的耐受浓度在单纯无机盐培养基中可达到800mg/L,在含有01%葡萄糖的培养基中可达到2000mg/L。该菌能够以甲基对硫磷作为唯一碳源、氮源，将其彻底降解作为生长基质，对于300mg/L甲基对硫磷的降解速度达15mg/L\5h,于22h后达到其稳定生长期。该菌对于多种有机磷农药及部分芳烃类化合物具有生化代谢能力。从该菌的细胞周质组分中纯化出的有机磷水解酶在SDSPAGE胶上显示为分子量约为33.5×103的条带。

摘要:

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