摘要:对黄芪根瘤菌两个新类群中心菌株CA8561和JL84进行了16S rDNA全序列测定，并进行了系统发育学分析。结果表明，CA8561位于Rhizobium分支中，JL84位于Sinorhizobium分支中。

摘要:从制药废水生物处理系统的活性污泥中经富集分离到一株能以茶碱作为唯一碳、氮源生长的茶碱降解菌Tcn3，该菌株可以利用茶碱的最高浓度为3 000 mg/L。当茶碱浓度为1000 mg/L时被彻底降解的时间仅需48 h。Tcn3菌株降解茶碱的最适pH为80。K＋是该菌株降解茶碱的必需元素。采用16S rDNA序列分析法及传统的生理生化特征鉴定法对该菌株进行鉴定，结果表明，Tcn3的16S rDNA的核苷酸序列与善变副球菌(Paracoccus versutus) ATCC 25364的同源性为997%，在细菌系统发育分类学上属于变形菌α亚类，Rhodobacter组：副球菌属，善变副球菌。

摘要:利用aveD基因的缺失载体pCZ8(pKC1139∷△aveD)对阿维菌素(Avermectin)产生菌阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)76\|9的aveD基因进行缺失获得aveD缺失突变株。经摇瓶发酵和HPLC检测，发现该突变株只产生阿维菌素B组分。说明将阿维链霉菌的aveD基因缺失，并不影响下游aveF的表达。缺失突变株的阿维菌素的总产量与出发菌株的总产量基本相同，突变株中B1的产量略有提高，阿维菌素B2的含量显著提高。

摘要:将口蹄疫病毒(Foot\|and\|Mouth Disease Virus,FMDV)的3A基因克隆到线形化的原核表达载体pProEX\|HTb中，转化大肠杆菌BL21和DH5α，经氨苄抗性筛选得到阳性克隆，IPTG诱导表达。SDSPAGE和West bolt结果证实大肠杆菌菌体不可溶性蛋白中富含3A蛋白，说明3A蛋白在表达产物中以包涵体的形式存在，所表达的蛋白含量占菌体蛋白的29.2%。

摘要:伪狂犬病病毒gE蛋白是一种重要的诊断抗原，可用于伪狂犬病根除计划中的鉴别诊断。为了获得大量的抗原，将编码gE主要抗原区域的基因片段插入毕赤酵母表达载体中，得到的重组表达载体转化GS115酵母，通过G418抗性筛选得到一株多拷贝的重组酵母，经甲醇诱导表达了截短的gE蛋白，并分泌到胞外。Western blotting分析显示表达的蛋白大小为33kD。ELISA结果表明表达蛋白具有良好的抗原性，重组酵母的诱导培养上清不需纯化可直接作为抗原检测gE的抗体，这为研制质优价廉的鉴别诊断试剂盒奠定了基础。

摘要:利用葡萄扇叶病毒法国分离物F13(Grapenive fanleaf virus, GFLVF13)移动蛋白抗体对杭州分离物(GFLVH)移动蛋白进行Western blot，分析表明移动蛋白在接种GFLVH 3d后的苋色藜(Chenopodium amaranticolor)系统叶中就可检测到，随着时间推移，其积累量逐渐升高，接种16d后达到最高值。接种32d后的病叶已经枯黄，但移动蛋白积累量并没有减少。超薄切片电镜观察发现，在感染GFLVH的昆诺藜(C.quinoa)和苋色藜的叶肉组织薄壁细胞中，病毒粒子呈纵列整齐地排列在小管状结构中，在胞间连丝中也发现有管状结构。免疫金标记显示胶体金能定位在细胞质、细胞壁和胞间连丝上，在管状结构也发现有少量的金粒子。这些结果进一步说明了GFLV是通过管状结构实现细胞间移动的。

摘要:苏云金芽孢杆菌在有帮助蛋白存在的情况下杀虫晶体蛋白获得了超量表达。通过透射电镜观察了Cry1Ac超量表达工程菌伴孢晶体的形态发生以及不同芽孢发育时期的晶体形态变化。结果表明，该工程菌的伴孢晶体在细胞不对称分裂的隔膜形成前就已出现，而且晶体发生的部位与芽孢无关。但晶体在形成初期往往靠近母细胞膜。观察结果还表明，大量表达的晶体蛋白不能马上参与到晶体合成，晶体形成的最佳时期是芽孢皮层形成期。母细胞大量液泡的产生与消失可能与晶体形成有关。此外，在超量表达工程菌中，Cry1Ac蛋白能在一个细胞内形成多个伴孢晶体，这在天然菌株中是罕见的。

摘要:对苏云金芽孢杆菌C002菌株cry2Ab基因阳性克隆pHT3152Ab进行亚克隆和序列测定，在CenBank注册后经国际Bt杀虫蛋白基因委员会正式命名为cry2Ab3。序列分析表明该基因含有芽孢杆菌特异的RBS序列，但没有功能性启动子，为沉默基因。根据大肠杆菌T7表达载体pET21b克隆位点和cry2Ab3开放阅读框架(ORF)两端序列，设计合成一对特异引物L2ab5和L2ab3，高保真PCR扩增获得cry2Ab3完整ORF，经酶切、连接构建了重组表达质粒pET2Ab3。表达质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导后，SDSPAGE电泳证实了cry2Ab3的表达。生物测定显示诱导培养物对棉铃虫初孵幼虫和小菜蛾二龄幼虫具有杀虫活性，能明显抑制二化螟二龄幼虫生长，但对甜菜夜蛾和玉米螟没有明显活性。进一步提取Cry2Ab3蛋白，生测结果表明其对棉铃虫LC50为32.55μg/g。

摘要:根据已知序列设计一对PCR引物(ORF5S,ORF3N)，可从cry2Aa或cry2Ac操纵子中扩增出包含串联分子伴侣基因p19p29的DNA片段，预期大小分别为16kb和20kb。对150株苏云金芽孢杆菌菌株进行PCR检测，从26株中获得了大小为16kb的扩增片段，但未获得20kb的片段。这表明cry2Aa型操纵子p19p29基因存在较广泛，而cry2Ac型较罕见。将来自Y2菌株的16kb片段回收，通过一系列亚克隆，最终构建成一个含有p19p29串联基因的Bt表达载体，为进一步研究p19p29串联基因的功能奠定了基础。

摘要:霍乱弧菌的霍乱毒素基因ctxAB由其溶原性噬菌体CTXΦ编码，由此携带毒素基因在产毒株与非产毒株间水平转移。从无ctxAB的El Tor型菌株中，发现不同时间、地点来源的部分菌株仍带有CTXΦ基因组的其它基因，在研究菌株染色体上呈双拷贝串联排列。克隆后测序发现基因组全长5708bp，其抑制基因rstR却与古典型菌株来源CTXΦ的相同，因此从E1 Tor菌株中发现整合有古典型来源的这类噬菌体。其它各基因与CTXΦ序列基本一致，但nctCTXΦ的zot基因末端及下游间隔区与CTXΦ的相差很大，进一步的序列测定与比较表明nctCTXΦ中无ctxAB应是其固有结构，而不是ctxAB丢失所形成的。将这种独特的前噬菌体命名为nctCTXclassΦ。研究菌株染色体上nctCTXΦ基因组上下游也各存在TLC因子和RTX毒力基因簇的同源序列，揭示它们与nctCTXΦ基因组有与CTXΦ相同的联系。从序列分析上认为nctCTXΦ与CTXΦ在遗传分化上有不同，可能是CTXΦ的前体形式，这对CTXΦ的来源、分化以及新病原产生的研究具有重要意义。

摘要:汉森酵母(H.polymorpha)是一类能以甲醇为唯一碳源和能源的甲基营养酵母，具有高表达外源基因、易于高密度发酵和产业化的特点。应用PCR技术扩增汉森酵母甲醇氧化酶(Methanol oxidase MOX)基因启动子和转录终止序列，并与汉森酵母Leu基因(Hpleu2)和人血管生成抑制素基因一起重组进大肠杆菌质粒pSP72，构建了整合型表达载体pSMA17，采用LiAc法将pSMA17转入汉森酵母A16(leu)，筛选出阳性转化子H.polymorpha A16(pSMA17)。转化子在YPGE培养基中培养至对数生长后期，用甲醇进行诱导表达。ELISA和SDSPAGE分析结果证明人血管生成抑制素已获表达，表达产物分泌至培养基中。Western blot结果显示重组的人血管生成抑制素能与抗人纤溶酶原抗血清特异结合，具有免疫原性。

摘要:圈卷产色链霉菌硝基烷类氧化酶基因naoA在大肠杆菌中获得了成功表达，从含有重组质粒pNA101(pET23b∷naoA)的工程菌株BL21(DE3)中分离纯化了硝基烷类氧化酶，SDSPAGE检测为均一。对纯酶进行了酶学性质及动力学研究。底物为1硝基丙烷、2硝基丙烷和硝基乙烷时，在04mol/L的磷酸缓冲液中，酶的最适反应pH值为7～8，最适反应温度为48℃～56℃。室温保存6d后，酶的活性保持了43.3%，但对60℃以上的高温敏感。硫醇化合物如巯基乙醇、还原型谷胱甘肽不同程度地抑制酶活性，特别是NADH，其浓度为1mmol/L时，酶活性几乎全部丧失。以1硝基丙烷为底物时，NaoA的Km为357mmol/L，Vmax为0199μmol/(μg.min)。

摘要:从甲基弯菌(Methylosinus trichosporium)IMV3011(简称M3011)的膜中分离纯化出颗粒性甲烷单加氧酶(Particulate Methane monooxygenase,简称pMMO)和NADH脱氢酶。Cu2+、不同外源电子给体、EDTA等对pMMO活性的都有影响；测定了pMMO分子量，以及其活性中心金属离子含量。对于M3011，培养基中Cu2+浓度对pMMO的生成和活性没有影响；但在分离纯化过程中对pMMO稳定性有明显影响。电镜结果显示，Cu2+浓度对pMMO的数量有较明显的影响。对于纯化的pMMO，对苯二酚仍是有效的电子供体，而NADH却是无效的电子供体。纯化过程中采用对苯二酚作为pMMO活性分析时的电子供体，排除了共纯化NADH脱氢酶的必要，有利于对pMMO活性中心进行深入研究。

摘要:对一株从土壤中分离的纤溶酶产生菌链霉菌C-3662的形态、培养、生理生化和化学分类特征进行了研究，发现其与泛温链霉菌(Streptomyces eurythermus Corbaz et al. 1968)的特征很相符。通过对链霉菌C-3662的16S rDNA序列进行测定与比对，发现它与泛温链霉菌的16S rDNA序列也有高达98.19%的同源性。根据多相分类原则，认为链霉菌C-3662属于泛温链霉菌。对链霉菌C-3662的发酵培养基组成等的研究表明，合适的发酵培养基中应含有氮源黄豆饼粉2.0%、碳源淀粉1.0%和葡萄糖2.5%以及少量的无机盐类如硫酸镁。链霉菌C3662的发酵过程研究表明，纤溶酶是在菌丝体生长停止之后才大量产生。

摘要:采用摇瓶微需氧培养技术，模拟发酵条件，探讨不同因素（pH、转速、种子菌接种量）对幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori，Hp）生长的影响，优化工艺参数，并级联放大到10L发酵罐发酵，经多次实验，建立了稳定的Hp发酵工艺，24h发酵细菌的最大吸光度A600达3.89，收获菌体湿重达5.2g／L。

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