摘要:本文鉴定了一株可完全降解直链烷基苯磺酸盐（Linear Alkylbenzene Sulphonate，简称LAS）的菌株GZ6。革兰氏染色阴性，细胞为杆状或短杆状，大小为0.5μm～0.8 μm×1.0μm～2.0 μm，其生长pH范围为pH6.0～10.0，最适生长pH为7.0，生长温度范围为4℃～40℃，最适生长温度为30℃。生化特征测定除过氧化氢酶、尿酶、精氨酸脱羧酶反应为阳性，其它均为阴性。可利用Chloridazon、安替比林（antipyrin）以及LAS等为碳源。不能利用大多数糖醇。醌组分以泛醌Q10为主。菌体脂肪酸主要为C18∶1、C16∶0及C16∶1。DNA中G+C mol％含量为7010。16S rRNA 序列分析表明菌株GZ6 与其亲缘关系最近的菌株Phenylobacterium immobile DSM1986T序列相似值为9749％，DNADNA杂交率为40%。菌株GZ6具极生鞭毛，可运动，两者在细胞形态有很大差异。故将菌株GZ6定为苯基杆菌属的新种可动苯基杆菌（Phenylobaterium mobile） GZ6。

摘要:对杆状病毒BactoBac表达系统的转座质粒pFastbac1进行改造，即在其多角体蛋白启动子下游插入谷胱苷肽S转移酶（glutathioneStransferase, GST）基因，构建GST融合表达转座质粒pFGST。通过转座和转染Sf9细胞，证实该系统能高水平表达GST。采用PCR方法从pMTgp51质粒中扩增截去N端信号肽序列的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）YA株ORF5基因，并将截短的ORF5基因片段克隆到pFGST中，使之与GST融合，构建的重组转座质粒pFGST53转染DH10Bac，提取大分子Bacmid DNA，转染Sf9细胞，获得能表达融合蛋白的高滴度重组病毒rvGST53。rvGST53感染Sf9细胞，SDSPAGE和Western印迹分析表明：与GST融合的ORF5基因在Sf9细胞中获得高效表达，表达产物分子量为45kD，能与抗PRRSV E蛋白单克隆抗体发生特异性反应。将表达产物免疫小白鼠，经间接免疫荧光检测，免疫血清能使PRRSV YA株感染的MARC145细胞呈较强的荧光着色，证实表达的融合蛋白具有良好的免疫原性。

摘要:在构建了含伪狂犬病病毒（Pseudorabies Virus，PRV）上海株gI基因和gE基因克隆鉴定的基础上，采用酶切的方法构建了载体pgEI。然后用限制性内切酶BamHI和BstpI缺失掉gE基因5'端363bp，同时把绿色荧光蛋白（GFP）基因表达盒插入到缺失部分，并在下游引入一个多克隆位点，构建了缺失转移载体pgEIGFP。用DOTAP转染试剂盒将pgEIGFP转染了感染PRVSH的BHK21细胞，待出现80%病变后收获病毒，并以蚀斑法得到纯化的缺失了gE/gI重组病毒株。小鼠试验证实了缺失株的毒力有所下降。

摘要:通过对文山松毛虫质型多角体病毒(Dendrolimus punctatus Wenshanensis cytoplasmic polyhedrosis virus, DpwCPV)的增殖、纯化，获得一株单一类型的质型多角体病毒。提纯的病毒粒子经SDS热酚法抽提得到基因组dSRNA，使用低熔点琼脂糖凝胶电泳分离并回收纯化第九片段S9。S9 RNA双链经高温变性，逆转录合成cDNA双链。根据DpwCPV与BmCPV1的同源性设计引物，将S9进行PCR扩增后，克隆到PMD18T载体上。最终获得一个977bp的序列，其中包含一个963bp的开放阅读框(ORF)。推测DpwCPV S9基因编码一个320个氨基酸的蛋白，分子量约为35560。

摘要:采用离子交换层析和凝胶层析方法，从杏鲍菇干样中分离得到多个蛋白组分，经枯斑寄主检测，发现多个蛋白组分都有抗烟草花叶病毒(TMV)的活性，对TMV的抑制率均在70%以上，高者可达99%。其中xb68Ab已得到了纯化，分子量约为23.7kD，在心叶烟和苋色藜上它对TMV侵染的抑制率分别达到99.43%和98.9%。

摘要:在大肠杆菌中表达的一段戊型肝炎病毒（HEV）结构蛋白NE2，纯化后以弗氏佐剂，按0d，10d，30d的方案10μg/针的剂量免疫3只恒河猴，在第2周抗体阳转，第6周时1只滴度达1∶100 000，另2只滴度1∶20 000，此时以106 PCR滴度的HEV病毒粪悬液攻击。对照组3只均出现血清转氨酶（ALT）升高，抗体阳转，粪便持续排毒1月以上；疫苗组无一发病，未检出非疫苗来源的抗体，其中1只始终未检出粪便排毒，另2只仅出现短暂排毒。以一份NE2免疫后猴血清（滴度1∶20 000）与103 PCR滴度的病毒混匀后感染2只恒河猴，结果对照组2只均持续排毒3周以上，抗体阳转，1只ALT明显升高；而抗体中和组2只猴始终未检出粪便排毒，抗NE2抗体缓慢下降，ALT正常。这些结果表明NE2具有良好的免疫原性和免疫保护性，有可能成为有效的戊肝疫苗。

摘要:用聚合酶链反应扩增出猪源大肠杆菌编码ST前体（proST）和LT的B亚单位(LTB)成熟多肽的序列，再通过套式PCR将proST编码序列3′端和LTB编码序列5′端融合，并置于同一阅读框内，得到ST和LTB的融合基因，将此序列克隆到pGEMT质粒中，序列分析后，亚克隆到表达载体pQE30中，在大肠杆菌细胞中得到表达，表达的融合蛋白同时具有ST和LTB的抗原性，且无ST和LT的生物毒性。

摘要:以天蓝色链霉菌的whiB基因为探针，从圈卷产色链霉菌7100的总DNA部分文库中克隆了含有whiB同源序列的28kb DNA片段，并对其中的14kb片段进行了序列测定。序列分析表明，该片段含有一个完整的开放阅读框—sawE。预测的蛋白质结构及同源性分析显示，sawE与天蓝色链霉菌孢子形成早期的关键基因whiB高度同源，编码产物为一个调控蛋白。sawE的破坏使圈卷产色链霉菌7100的分化终止在气生菌丝阶段，在延长培养时间的情况下仍保持白色的表型，菌丝不能分隔，不能形成成熟的灰色孢子，结果表明sawE基因是一个与圈卷产色链霉菌分化有关的重要基因。

摘要:乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl CoA Carboxylase EC 6.4.1.2, ACC)催化依赖于ATP的乙酰辅酶A羧化形成丙二酸单酰辅酶A，该反应是脂肪酸生物合成途径中的第一步，也是受到调控的关键一步。根据结核分枝杆菌(M. tuberculosis)和天蓝色链霉菌(S. coelicolor)中ACC-α亚基的氨基酸保守序列和地中海拟无枝菌酸菌U32对氨基酸密码子的使用偏好，设计简并引物以U32基因组DNA为模板扩增出一条约250bp的片段，并以此片段作探针成功地从U32基因组cosmid文库中克隆到相应的ACC-α亚基的编码基因accA。该基因对应的ORF长1797bp，编码一个598个氨基酸的蛋白，推算出的分子量是63,714Da；基因G+C mol%含量为70.1%，符合U32基因结构特征，距起始密码子GTG上游6个碱基处有链霉菌典型的RBS序列AGGAGG，并有生物素羧化酶特征的ATP结合区。利用pET28(b)系统构建表达载体，在E. coli BL21(DE3)中实现了accA的诱导表达，产物大部分以可溶形式存在，并通过Western Blot证明该蛋白上确有共价结合的生物素。Northern Blot分析了各种氮源对accA基因转录水平的不同影响。

摘要:利用RTPCR方法分析了生长于冷杉木片上的黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶基因lipＡ２（GLG3）、lipＣ1(GLG2)、lipＣ2(GLG5)、lipＤ２(GLG1)、lipE（LP0811）的表达。结果发现在不同的培养时间里仅有特定的基因表达，在第２周时仅有lipＡ2(GLG3)基因表达，在第４周时未检测到任何基因的表达，在第６周时lipＤ2(GLG1)和lipＣ1(GLG2)基因表达，在第８周时仅有lipＡ2(GLG3)基因表达。这些结果说明，在冷杉木片上培养的黄孢原毛平革菌的lip基因表达具有明显的时间特异性，并且与限定培养基中得到的结果明显不同。

摘要:采用硫酸铵盐析、DEAE纤维素柱层析、Phenyl SepharoseTM6 Fast Flow疏水柱层析等方法，得到电泳纯的漆酶同工酶Lac1,纯化倍数为318.4，活力回收率为18.6％。用SDSPAGE测得该酶分子量为60.3kD，而经质谱分析为55.94kD。最适反应温度为65℃，最适反应pH值为2.2～2.8，酶的等电点pI（室温）为4.02，其N末端序列为AIGPVTDL，用硫酸酚法测得其含糖量为49.2％。25℃条件下，以ABTS(2,2'azinobis(3ethylbenzthiazoline6sulphonate)为底物的Km为17.5μmol/L。该酶在45℃，pH3.0～9.5较稳定。Cu^2＋对酶活有明显的促进作用，Fe^2＋完全抑制酶的活性，Mn^2＋和Ag^＋对酶活无明显影响。DTT（Dithiothreitol,二硫苏糖醇）和NaN3完全抑制酶的活性。Koshland试剂对漆酶的活力影响比较大，色氨酸可能是酶活力的必需基团。

摘要:为了从大量的候选菌株中快速筛选头孢菌素酰化酶产生菌，设计并合成了一系列头孢菌素酰化酶的底物类似物。这些酰胺类的底物类似物由二部分组成，一部分为与头孢菌素相同或相似的侧链，另外一部分为发色基团或便于检测的基团。它们被酰化酶水解酰胺键以后可以方便快速的检测，因此用于对大量菌株进行快速筛选。采用这些化合物筛选到6株酰化酶阳性菌株。其中菌株ZH0650能够同时水解GL7ACA和多个底物类似物。进一步研究表明，该菌至少产生3种酰化酶，ADNABA酰化酶，青霉素G酰化酶和头孢菌素C酰化酶。我们初步纯化了ADNABA酰化酶和青霉素G酰化酶，并对头孢菌素C酰化酶的活力进行了鉴定。这是首次报道的可以产生青霉素G酰化酶和头孢菌素酰化酶等多种酰化酶的菌株，具有良好的应用前景。

摘要:在一株具有环酰亚胺转化活性的真养产碱杆菌112R4中发现了一种特异性的二羧酸单酰胺酰胺水解酶（半酰胺酶），它催化环酰亚胺代谢的第二步反应，将二羧酸单酰胺水解为二羧酸和氨。该酶的底物仅限于此代谢途径的第一个酶——酰亚胺酶的产物二羧酸单酰胺，而对其它的酰胺类化合物没有明显水解活性。真养产碱杆菌112R4中的半酰胺酶和酰亚胺酶在表达上具有相关性，环酰亚胺（如琥珀酰亚胺）和二羧酸单酰胺（如琥珀酰胺酸）对它们有正调控作用，游离氨离子显示出负调控作用，琥珀酸则在酶合成和活性两方面均表现出影响作用。对重组大肠杆菌中表达的半酰胺酶粗酶的部分性质进行了研究。钴离子对半酰胺酶的活性表现出促进作用，比活力提高到3.37倍，表明半酰胺酶可能是一种金属结合酶。

摘要:从某污水处理站高温高盐外排水中分离出一株严格自养的特殊亚硝化单胞菌。它为革兰氏染色阴性，不产芽孢，细胞椭球形或短杆状，呈单个排列或排列成圆形、直线形，细胞大小为（0.7～0.9)μm×（1.2～1.8)μm。在扫描电镜下发现单个或多个菌体被绒毛状不明物质包裹。该菌株能将氨氮氧化成亚硝酸盐，导致体系中的总氮减少，但是氨氮的减少与亚硝酸盐的增加并不能形成对应，而体系中几乎检测不到硝酸盐氮。在分离菌株50℃培养12 d时，约有10％的NH＋4N转变为NO-2N，15％的NH＋4N未发生转变，剩下的75％的NH＋4N被去除，包括挥发掉的17％的NH＋4N。气相色谱分析表明，菌株培养过程产生气体中氮气含量较对照气体（室内空气）增加了3.5％。

摘要:通过初筛、单倍体分离、诱变及原生质体融合技术选育到一株谷胱甘肽产量明显提高的融合菌株ZJF71，其谷胱甘肽产量分别为亲株的1.59和1.42倍。并对其培养条件进行了研究，结果表明碳源、装液量和培养时间对融合菌株ZJF71生产谷胱甘肽的影响较为显著。在优化的培养条件下，发酵液中谷胱甘肽总量达到185.3mg/L，为初始培养条件下的2.8倍。经遗传稳定性分析，证明融合菌株ZJF-71是遗传稳定的。

摘要:在海藻糖生产菌的筛选过程中，微生物胞内酶转化淀粉生成的产物复杂，将产物逐一纯化是非常烦琐的，但又必须确证产物中是否含有海藻糖。本文将薄层层析、高效液相电喷雾电离质谱联用及核磁共振等分析手段综合应用于海藻糖生产菌株的筛选，在酶反应产物不必被纯化的前提下，准确、快捷地鉴定了酶反应产物中的未知糖组分，最终证明食尼古丁节杆菌（Arthrobacter nicotinovorus）D97利用淀粉或麦芽寡糖的酶反应产物中含有海藻糖。该方法在筛选海藻糖及其它功能性葡二糖生产菌株时较为严密。

摘要:研究了植物激素对破囊壶菌(Thraustochytrium roseum) MF2产DHA的影响作用。实验结果表明：植物激素对T.roseum MF2的生长和产DHA有很大影响；赤霉素(GA)能促进DHA的合成，6苄基腺嘌呤(BA)能显著促进T.roseum　MF2的生长，二者的配合使用能明显增加DHA的产量；培养基中适宜的添加量为2mg/L GA和3mg/L BA，可使DHA产量达到982mg/L。

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