摘要:从土壤微生物中筛选得到一株产神经节苷脂内切糖苷酶的菌株YW2112， 该酶能特异性水解神经节苷脂中连接神经酰胺和寡糖链之间的糖苷键，是研究神经节苷脂结构与功能的重要工具酶。对分离菌株YW2112进行了形态、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析。菌株YW2112为细菌，革兰氏染色阴性，直杆状， 鞭毛周生，菌体大小为(0.6μm～1μm)×(1μm～3μm)，V-P实验阳性，甲基红阴性，利用葡萄糖产酸产气。以16S rDNA同源性为基础构建了包括11株相关种属细菌在内的系统发育树，在系统发育树中，分离菌株YW2112 与Enterobacter cloacae 在同一分支，二者的序列相似性为98.6% ，结合形态和生理生化鉴定，将其鉴定为阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）。

摘要:从大棚土壤中分离到一株异养型硝化细菌，命名为菌株HN，分离菌株为革兰氏染色阳性，球状或杆状。菌落颜色为橙红色。该菌株能以乙酰胺为唯一碳源和氮源进行氨化作用和硝化作用并产生亚硝酸。以硝酸钠为氮源时能进行反硝化作用。部分长度的16S rDNA 序列分析表明，分离菌株HN与Rhodococcus ruber 具有99％相似性。并用PHYLIPS程序将该菌株与报道的相关硝化细菌进行系统发育进化分析。本文首次报道Rhodococcus sp.HN为异养型亚硝化细菌。

摘要:从南京地区黄棕壤中分离的一株好氧、革兰氏阴性、产芽孢的硅酸盐细菌NBT菌株，能产生丰厚的荚膜，具有鞭毛，能水解淀粉、产生吲哚、液化明胶，全细胞脂肪酸为硬脂酸C16∶0、软脂酸C18∶1(Δ9)和anteisoC15，DNA的G+C mol%为537%。16S rRNA基因测序和系统发育学分析的结果表明，该菌株与胶质芽孢杆菌B7519（Bacillus mucilaginosus）、土壤芽孢杆菌B7517（B. edaphicus）亲缘关系最近。该菌株与B. edaphicus B7517的总DNA杂交率为69%，在形态、生理生化特征上有差异，故可把NBT菌株定为Bacillus edaphicus的一个亚种。

摘要:鉴定分离到的微需氧菌为螺旋杆菌，并对该菌进行分型。小鼠皮下或肌肉注射地塞米松使其免疫抑制，取小鼠肠内容物培养，对分离到的细菌，经油镜、电镜观察。然后提取细菌DNA，用根据螺旋杆菌（Helicobacter sp．）rRNA保守区设计的引物P7/P8进行扩增，并对扩增产物分别用MboI、HhaI、XspI内切酶酶切,酶切产物用10%PAGE分析。再用根据螺旋杆菌胆型（H. bilis）rRNA设计特异引物P7/Pb扩增，将扩增产物测序分析。最后，将该细菌在Scid小鼠上作动物感染。细菌在油镜下呈鸟翼状，电镜下观察到双极鞭毛，无周质纤毛。引物P7/P8扩增出374bp的特异带，此片段能分别被MboI、HhaI、Xsp内切酶酶切。引物P7/Pb扩增出364bp的条带，测得的DNA序列中存在MboI、HhaI、XspI的内切位点，与文献中H.bilis序列比较，同源性为97.5%。动物感染试验符合Koch准则。分离到的细菌确为胆型螺旋杆菌。

摘要:番茄环斑病毒（ToRSV）是我国对外检疫一类有害生物，目前国内尚无存在的报道。PCR技术是一种快速灵敏的植物病毒检测方法，但核酸内的聚合酶抑制物会导致漏检现象，而只通过凝胶电泳进行结果判定会出现假阳性，这两方面限制了PCR技术在对外检疫中的应用。利用共价结合在PCR管壁上的引物特异性杂交诱捕核酸粗提液中的靶标核酸，洗掉杂质及抑制物质，在同一管内作RTPCR，凝胶电泳检测液相产物的同时对固相产物进行杂交检测，提高了结果的可靠性及灵敏度。利用所建立的HCRTPCRELISA成功地从法国进口葡萄苗中检出ToRSV。本方法还可用于其他植物病毒及转基因产品的检测。

摘要:用硫酸二乙酯(DES)诱变水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzae，简称Xoo)和条斑病细菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzicola, 简称Xooc)，分别得到5株和13株黄色素缺失突变体，其中来自Xooc的M6和M12 还丧失了对水稻的致病性和在烟草上激发过敏反应的能力。以Xooc黄色素缺失突变体M51为受体菌交叉互补从Xoo JXOIII基因文库中筛选出一个黄色素合成相关的基因克隆pA341，以Xoo黄色素缺失突变体M1071为受体菌，从Xooc RS105基因文库中获得了一个黄色素合成相关的基因克隆pA270。功能互补显示，18株黄色素缺失突变体中的10株能分别被pA341和 pA270互补后正常产生黄色素，但这两个克隆不能同时互补同一株黄色素缺失突变体。能被pA341互补的黄色素缺失突变体M6没有恢复对水稻的致病性和在烟草上激发过敏反应，表明黄色素合成相关基因与hrp基因间不存在相关性。斑点杂交结果表明，pA270与pA341之间没有同源性。pA270亚克隆结果显示，与黄色素合成相关的基因约11.6kb大小，以基因簇的形式存在，不仅决定了黄色素的产生，还影响黄色素合成的数量和质量（吸收峰）。在紫外光条件下，黄色素能够提高菌体的存活率，提示黄色素对病原细菌有保护作用。

摘要:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)LCB1（Long chain base）基因被克隆到酵母诱导表达载体pYES2中，并转入到FY2中，用半乳糖诱导表达。与对照相比，质粒所含LCB1基因的表达，使酵母细胞干重略有下降，而神经酰胺的含量提高为对照的1.9倍。

摘要:应用βGlucuronidase基因(gusA)作为报告基因，通过定点突变方法分别缺失nisZ编码区上游两个启动子结构(promoter1和promoter2)中的一个，发现只有靠近编码区的promoter2是nisZ启动子诱导表达所必需。将promoter2中10区及其上游的一个碱基突变为乳酸菌中典型的组成型启动子的10区结构，该改变使nisZ启动子诱导功能下降；将promoter2的10区和35区的间隔区由20个碱基缺失突变为17个碱基，则nisZ启动子失去诱导功能。据此认为该间隔区的结构与nisZ启动子的诱导表达密切相关。

摘要:为了研究肌苷和鸟苷生产菌中与产苷有关的嘌呤核苷合成途径的遗传背景，选择了pur操纵子的启动子序列、编码SAMP合成酶的purA基因和编码GMP合成酶的guaA基因，设计合适的引物，分别从野生菌、一株肌苷低产菌和肌苷鸟苷高产菌中扩增出相应片段，经克隆和测序后，对它们进行比较和分析。分析结果表明两株生产菌的purA基因发生了1个碱基缺失，导致阅读框发生移码突变；而鸟苷高产菌在pur操纵子的启动子部分和操纵子抑制蛋白结合区域发生了近10％的突变，可能影响整个操纵子的表达调控。

摘要:丙氨酸脱氢酶(EC1411)可逆催化丙氨酸脱氨生成丙酮酸和NADH。它是生物体内的氨基酸代谢和氨同化途径的关键酶。在地中海拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis mediterranei)U32中，丙氨酸脱氢酶的活力与力复霉素的生物合成有负相关现象，其活力受KNO3全局效应的调控。根据结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)和天蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor)的丙氨酸脱氢酶氨基酸的保守序列和地中海拟无枝菌酸菌U32对氨基酸密码子的使用偏好，设计一对简并PCR引物。以此引物从地中海拟无枝菌酸菌U32中扩增到一555bp的片段，并以此片段为探针从地中海拟无枝菌酸菌U32 基因组cosmid文库中成功的克隆到了丙氨酸脱氢酶结构基因(ald)。它编码了一个371个氨基酸的蛋白质，基因的GC含量为72.5％，符合链霉菌的基因结构特征。在起始密码子的上游6个碱基处，有一典型的链霉菌核糖体结合位点(RBS)：AGGAGG，第75位的氨基酸为赖氨酸，是丙酮酸结合位点。以pET28b为载体，在E.coli BL21(DE3)中高效表达了ald基因。用IPTG在22℃时诱导得到的丙氨酸脱氢酶活力最高。用HisTag柱纯化了表达的丙氨酸脱氢酶。酶学性质研究表明该酶专一性以LAla和NAD(H)为底物。

摘要:以钝齿棒杆菌（Corynebacterium crenatum）突变株CD945的基因组为模板，运用PCR方法，扩增出丙酮酸羧化酶的基因片段。核苷酸序列分析结果表明，该片段全长3657bp，以GTG为起始密码子，编码一个ORF。该ORF的核酸序列与Corynebacterium glutamicum,Mycobacterium smegmatis以及Saccharomyces cerevisiae的丙酮酸羧化酶结构基因相比，相似性分别为98.22%、62.41%和49.61%。由ORF推导出的氨基酸序列与上述属种的丙酮酸羧化酶相比，同源性分别是99.30%、64.65%和44.04%。经证实对于酶的催化活性至关重要的一些保守区域，如ATP和生物素的结合位点等，在该氨基酸序列中都存在。将该基因片段转化钝齿棒杆菌（C. crenatum） CD945，利用CTAB处理细胞和苹果酸脱氢酶偶联测定相结合的方法，进行酶活力的分析，结果表明，重组子与供体菌相比，丙酮酸羧化酶的活力提高5倍。

摘要:从高山被孢霉ATCC16266总DNA中扩增出大小为1374bp和1947bp的两条特异片段，序列分析表明后者在细胞色素b5和组氨酸Ⅰ之间含有一大小为573bp的内含子和两条分别为197bp和828bp的外显子。推导的氨基酸二级结构分析表明，该基因有两个长的跨膜疏水区和3个组氨酸保守区。分别根据D6D内含子及组氨酸Ⅱ区、Ⅲ区的序列设计引物，制备不同的探针与高山被孢霉的基因组杂交，证明在其基因组中确实存在两个Δ6脂肪酸脱氢酶基因，其中一个基因含有内含子。把不含有内含子的核基因MAGL61克隆到的酿酒酵母表达载体pYES20中，转化到酿酒酵母INVSc1中。对筛选得到的酵母工程菌株进行脂肪酸GC分析，检测到了γ亚麻酸，说明克隆的D6D基因MAGL61能在酿酒酵母中进行功能性表达。

摘要:用5L发酵罐研究了E.coli TG1/pBVA2和E.coli TG1/pBVK13的高密度培养工艺，确定了诱导及补料策略，在不降低外源基因表达量的前提下，工程菌TG1/pBVA2高密度发酵菌体干重为16.8g/L，hAGN(K1-4)的表达量为菌体总蛋白的24.1%，相当于1.39 g/L；同样的方法, 工程菌TG1/pBVK13菌体干重可达16g/L, hAGN(K1-3)占菌体总蛋白25.8%，相当于1.45 g/L。

摘要:在本研究工作中分别从42℃的恒化富集培养物和30℃的分批富集培养物中分离到4株产肌氨酸氧化酶（SOX）的节杆菌。对所产SOX的特性分析表明，从42℃恒化培养物中分离得到的菌株42-1所产的酶比分批培养法分离得到菌株的酶具有高的热稳定性和低的Km值。对菌株42-1产酶发酵条件的研究表明，SOX可以被诱导物如肌氨酸、肌酸、肌酐和氯化胆碱诱导产生。在发酵过程中适当减少通气量对SOX的产生有显著的促进作用。葡萄糖等容易利用的碳源的存在对SOX的合成不产生降解代谢产物抑制作用，而尿素的存在则对SOX的生成有强的抑制作用。因而菌株42-1分解肌酸的主要作用是为细胞提供生长所需的氮源。

摘要:反向旋转酶是一种I型拓扑异构酶，它可以利用ATP水解的能量向DNA分子中引入正超螺旋。通过阴离子交换层析、亲和层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）从芝田硫化叶菌（Sulfolobus shibatae）中分离得到一种反向旋转酶。SDSPAGE 显示，该酶分子量约为126 kD，N末端序列测定结果表明，该酶为芝田硫化叶菌中一种新的反向旋转酶。

摘要:Trametessp. AH282在液体培养条件下经邻甲苯胺诱导能有效合成漆酶同工酶A。以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂进行了漆酶A的固定化研究，确定酶固定化适宜条件为：0.1g壳聚糖与15 mL 5%戊二醛交联8 h后，加入30.0U酶固定12h。在此条件下获得的固定化漆酶催化能力为176.4U/g载体，酶活回收率58.5%。与游离酶相比，固定化漆酶与作用底物愈创木酚的亲和力降低，但固定化酶的稳定性有明显改善。固定化漆酶的最适温度为55℃，比游离酶提高5℃；70℃条件下保温8 h，固定化酶保留酶活56.5%，而在相同条件下游离酶酶活明显下降。使用固定化漆酶反应装置进行酚类化合物转化实验，连续进行12批次操作，固定化酶酶活仍保持60%以上，漆酶使用效率明显提高。

摘要:对一株产胞外多糖（Exopolysaccharide，简称EPS）的乳酸菌Z222菌株的培养条件进行了优化, 其发酵液通过浓缩、除蛋白、脱色、乙醇沉淀、透析、CM纤维素柱、DEAESephadex 离子交换柱和Sephadex G100凝胶柱层析，冷冻干燥后得到一种纤维状白色固体产品EPSⅠ。将该产品对荷肉瘤S180小鼠进行机体免疫功能影响的初步试验，统计学处理结果表明，它对迟发型超敏反应、免疫器官重量和脾细胞抗体形成均有较为明显的影响。EPSⅠ有希望作为一种新的免疫调节剂。

摘要:基于金属元素在生物体功能发挥中的作用以及它们参与光合细菌光合放氢的重要性，着重进行了铁和镍对沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonas palustris）Z菌株和一株红杆菌（Rhodobactersp.）细胞生长、光合放氢和光合色素合成影响的研究。结果表明，高浓度Fe3+可显著提高两菌株光放氢能力和生物合成能力，最适浓度的Fe3+可使其产氢能力分别达对照组的1.32倍和2.8倍，产氢得率分别为360.6mL/g和385.9 mL/g，生物量分别为对照组的1.42倍和1.54倍。9μmol/L Ni2+的添加可使两菌株产氢能力分别达对照组的1.48倍和1.96倍，产氢得率分别为429.7mL/g和456.3 mL/g。而当Ni2+浓度为12μmol/L时，两菌株的产氢活性受到不同程度的抑制，产氢得率分别降低46.7%和19.4%。在铁浓度相同时，添加6μmol/L Ni2+能明显促进两菌株的生长。而当Ni2+浓度大于6μmol/L时，细胞生长受到抑制。Fe3+和Ni2+对Rhodobactersp.菌株类胡萝卜色素有显著影响。研究结果显示， 426nm色素峰随铁浓度的增加和镍的添加而消失，同时，产氢活性提高。

摘要:用ERICPCR （Enterobacterial Repetitive Intergenic ConsensusPCR）、苯酚羟化酶大亚基基因(LmPHs)扩增和群落结构探针分子杂交检测技术对LB、dCGY、MP和FWM 4种培养基从焦化废水处理厂2个曝气池活性污泥中分离优势功能菌群的能力进行了比较研究。LmPHs扩增显示7种回收菌群中均有以多亚基苯酚羟化酶为代谢途径的苯酚降解菌存在。用代表苯酚降解高峰期活性污泥优势菌组成的总DNA的ERICPCR产物经地高辛标记作为群落结构的混合探针M1和M8，对8种回收菌群的ERICPCR指纹图谱进行杂交检测，不同培养基回收优势菌的能力不同，以废水为基础的FWM培养基从活性污泥中回收到的优势菌种群最多(30.8%～42.9%)。本文建立了用微生物群落结构探针杂交技术对不同培养基回收分离优势菌能力进行评价的方法。

摘要:本研究用16S23S rDNA间的ITS 序列通用引物L1（5′AGTCGTAACAAGGTAGCCGT3′）和L2 （5′ GTGCCAAGGCATCCACC3）扩增甜菜银叶病菌（Curtobacterium flaccumfaciens pv. betae，Cfb）和其它相近细菌的基因组DNA；并对其PCR产物进行回收、克隆和测序，将所获序列和其它已报道的细菌内源转录间隔区(Internally Transcribed Spacer,ITS)序列进行多重比较后设计出Cfb的特异性引物B1（5′GGCCTCGTGTTGTCCCTTATC3′）和B2 （5′GTCACCAATCAACAACCCGAG3′）。此引物可以从Cfb中扩增出387bp 的特异性片段，而其余参试的21个细菌PCR反应结果均为阴性。该方法可以应用于病害防治工作中的Cfb快速、可靠的检测。

摘要:本文建立了从土壤中提取总DNA的方法，并通过改进使适合于对革兰氏阳性菌的提取。用9种性质不同的土壤进行验证，均提取到了DNA，每克干土的DNA提取量从3.30μg～13.41μg，通过透析袋回收进行纯化，纯化回收率达到65.34%，纯化后的土壤DNA可以直接扩增出16S rDNA。9种土壤的提取率从60.51%～93.45%，可以从每g干土添加362个菌体的土壤中扩增到目的条带。

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