摘要:应用免培养法（Cultureindependent）对云南腾冲热海大滚锅高温热泉中细菌的多样性进行初步的分析。经过克隆筛选，测定了5个克隆的16S rDNA插入片段的近全序列，系统发育分析的结果表明，它们分属于Bacillus、Hydrogenobacter和Pseudomonas，有一个克隆尚难确定其分类地位，它属于Thermodesulfobacteriaceae科，介于Geothermbacterium属和Thermodesulfobacteria属之间。经PCR扩增出上述5个克隆16S rDNA插入序列中及环境样品总DNA中的16S rDNA V8高变区约600bp片段，进行变性梯度电泳（DGGE）。所得电泳图谱和5个序列的系统发育树不仅表明该高温热泉存在着丰富的细菌多样性，还显示了它们是该高温热泉中细菌的优势物种。

摘要:对1996年至2001年间自我国部分养鸡场发病鸡或死亡鸡分离鉴定的8株H9N2亚型禽流感病毒的非结构蛋白基因(NS1)进行了扩增和序列测定，并分析和比较了其核苷酸和氨基酸的同源性。结果表明， NS1基因核苷酸和氨基酸同源性分别为96.5%～99.5% 和94.5～98.6%， 说明NS1基因在遗传进化上高度保守，稳定遗传。与中国香港、韩国、巴基斯坦及人源H9N2分离株相比较，发现中国大陆的鸡源H9N2分离株的NS1基因在其羧基端缺少13个氨基酸。系统进化树分析表明，该8株病毒的NS1基因属于相同的进化分支，而且中国的早年分离株A/chicken/Beijing/1/94位于该进化分支的根部，暗示这些分离株的NS1基因是由A/chicken/Beijing/1/94演化而来；尚未发现NS1基因属于A/quail/Hong Kong/G1/97like分支的分离株。同时，系统进化树也说明了我国的H9N2分离株与韩国、巴基斯坦等地的H9N2分离株隶属于不同的进化分支，H9N2亚型禽流感的发生和流行与地域有一定的相关性。

摘要:H1（Halomonas sp.）是一株耐高盐浓度（18% NaCl, W/V）和降解苯乙酸的菌株，pDT3质粒为pUC19插入甲基对硫磷水解酶基因（mpd基因）构建而成。采用ＨindⅢ酶切，获得含有完整mpd基因片段，克隆到广宿主质粒pKT230和pBBR1MCS2上，构建成质粒pKTMP和pBBRMP。通过三亲杂交，在辅助质粒pRK2013的帮助下，将质粒pKTMP和pBBRMP转移到Ｈ１中，得到的工程菌HpKTMP和HpBBRMP具有耐盐、降解苯乙酸和水解甲基对硫磷的功能，其中HpBBRMP水解酶活性与亲本菌株甲基对硫磷降解菌（Pseudomonas putida）DLLE4相当，而HpKTMP水解酶活性要提高1倍左右。经过传代试验，证明了工程菌的稳定性。

摘要:密码子的偏嗜性是影响基因异源表达的重要参数之一，优化密码子序列能够提高外源基因的表达水平。野生型猪瘟病毒E2基因在毕赤酵母中的表达量较低，为了提高E2基因在毕赤酵母中的表达水平，利用PCR基础上的定点突变技术将E2基因上的毕赤酵母低利用密码子突变为其高利用率的简并密码子。结果表明，替换野生型E2基因上24个酵母低利用密码子后，E2基因在酵母中表达水平有较显著提高，表明通过密码子优化提高E2基因在毕赤酵母中的表达这一策略是成功的。

摘要:把经密码子修饰的马铃薯X病毒（Potato Virus X, PVX）外壳蛋白（Coat Protein, CP）基因和未修饰的野生型外壳蛋白基因与CaMV 35S启动子融合后，构建成相应的植物表达载体，利用农杆菌介导转化烟草。分别对修饰CP和野生CP的转基因烟草进行Western blot和ELISA分析，结果表明经密码子修饰的PVX外壳蛋白的表达量是野生型蛋白表达量的1/3～1/5。Northern blot结果表明修饰和未修饰的外壳蛋白在转录水平上是一致的。以上结果暗示外源基因中稀有密码子的数量可能是限制外源基因表达的一个因素。改变基因中稀有密码子的数量有可能成为控制基因表达的一种有效途径。

摘要:克隆和测定了我国水稻条纹病毒（RSV）22个分离物 RNA4基因间隔区（Intergenic region，IR）序列，序列比较结果表明，我国RSV RNA4 IR在长度上存在634bp、654bp及732bp 3种不同的类型，其中3种不同类型的序列在云南省均有存在，而在其它省份仅存在654bp 类型的序列，云南省还存在不同片段类型序列在同一分离物中混合侵染的现象。序列内部具有两个重要的结构特征，一是具有插入序列；二是有两处反向重复序列，可形成两个明显的发夹结构，其中一个序列比较保守，形成的发夹结构稳定；但另一个发夹结构由于碱基变异导致其稳定性在各个分离物中差异较大。本论文还讨论了插入片段特性、不稳定的发夹结构的形成最低自由能及病毒致病性分化的关系。

摘要:用PCR合成的瑞氏木霉（T.reesei）β-内切葡聚糖酶Ⅰ（EGⅠ）的cDNA, 构建了由酵母醇脱氢酶 （ADH1）启动子和终止子引导表达、β-内切葡聚糖酶自身信号肽序列引导分泌、由酵母rDNA序列引导同源整合的酵母YIP型β-内切葡聚糖酶表达分泌质粒pA15PET。采用pA15PET与酵母YEP型G418抗性表达质粒的共转化，将EGⅠ表达单元整合到已整合有α-乙酰乳酸脱羧酶（α-ALDC）表达单元的啤酒酵母工程菌BE9711的染色体rDNA序列中，获得同时表达胞内α-ALDC和胞外β-内切葡聚糖酶的啤酒酵母工程菌。

摘要:构建了含大肠杆菌磷酸果糖激酶(EC 2.7.1.11)基因pfkA的重组质粒pSDK1，利用大肠杆菌pfk缺陷株筛选含目的基因的重组质粒，通过接合转移的方式将其导入氧化硫硫杆菌TtZ2中，接合转移频率达2.6×10-6。重组质粒在TtZ2中有较好的稳定性，在无选择压力条件下传代50次基本保持稳定(重组质粒保留68%以上)。酶活性测定、SDSPAGE及RTPCR结果表明，pfkA基因在氧化硫硫杆菌中得到表达，但其表达水平低于大肠杆菌。葡萄糖可促进含pSDK1的氧化硫硫杆菌TtZ2的生长，而对照菌株的生长则未受明显影响，说明重组菌可部分利用葡萄糖作为碳源生长。

摘要:通过酶切连接将Burkholderia sp. JT1500的一段DNA片段(4.8kb)亚克隆到表达载体pUC18上，得到重组子pEK123。测序后的pEK123重组子48kb插入片段的序列已经登陆欧洲EMBL基因库，序列接受号为AJ566333。对这一DNA片段的序列分析显示，此DNA片段含有3个阅读框，且在这3个阅读框5′端发现一启动子特异序列。再用酶切连接方法得到仅含一个阅读框的重组子pXK3，其阅读框长度为1158bp，编码386个氨基酸，与已报道的Ralstonia eutropha HF39羟化酶（单加氧酶，bec）氨基酸序列有64%的同源性。pEK123对2萘酸代谢途径中4个关键底物的转化实验结果显示，其基因产物仅对2萘酸发生加氧转化反应，而且2萘酸浓度有明显的降低，证实此基因是2萘酸单加氧酶基因（nmo）。同时发现其基因产物也可以转化苯甲酸钠。该酶对苯甲酸的加氧转化途径正在研究中。 SDSPAGE结果表明，pXK3、pEK123两重组子中2萘酸单加氧酶表达量并没明显区别，但加氧酶酶活却存在显著的差别。推测在启动子后，单加氧酶阅读框前的两个阅读框的基因产物，对单加氧酶活有促进作用。

摘要:以人胎盘脐带组织为材料，提取组织总RNA，用netRTPCR方法合成人血管能抑素cDNA基因，将该cDNA克隆进pSP72载体获得重组质粒pSP72C， DNA序列分析结果与预期序列一致。用BamHⅠ和NdeⅠ双酶切，切下pSP72C上的血管能抑素cDNA，插入pET3c载体的相应位点获得重组表达质粒pETC, 转化E. coli BL21(DE3), SDSPAGE分析显示：在IPTG诱导下，血管能抑素基因获得了高效表达，表达量约占菌体总蛋白的 27.9 %，主要以包涵体形式存在。包涵体经过洗涤、裂解、蛋白复性以及Sephadex G75凝胶过滤层析等步骤后，获得了纯度达91.4 %的人血管能抑素。CAM实验证明10 μg纯化蛋白就能显著抑制鸡胚新生血管生成。

摘要:探讨将基因芯片与限制性显示技术相结合对HPV进行基因检测和分型的方法。分离HPV6，11，16和18型的基因片段作为探针，纯化后应用PixSys 5500点样仪将其打印在氨基包被的玻片上制作HPV基因芯片，对HPV样品进行荧光标记后与芯片杂交，经清洗和干燥后对芯片进行扫描和结果分析。对HPV基因检测芯片的制作与检测的实验条件进行了初步研究，并对应用HPV基因芯片进行分型做了初步探讨。建立的检测芯片实验方法可行，并且显示了在HPV分型中的应用前景。

摘要:研究人巨噬细胞细胞因子在抗结核分枝杆菌感染免疫中的作用。利用表达谱芯片技术研究细菌感染后，宿主巨噬细胞基因表达情况，在全局表达谱分析基础上，重点分析细胞因子及相关基因的表达，并比较无毒株和临床分离有毒株在诱导细胞因子及其调控基因表达方面的差异。结果显示细菌感染影响较多细胞因子及其调控基因的表达，如IFN、TNF、TGF、IL系列及其受体、NFkappa B和TLR受体等；首次报道IL19参与了抗结核分枝杆菌感染免疫。被临床株感染影响的细胞因子较无毒株广泛和丰富。细胞因子及相关基因参与了宿主细胞对感染细菌的免疫应答，有关细胞因子及相关基因在抗结核免疫中的作用有待进一步研究。

摘要:成功建立了水稻白叶枯菌与水稻细菌性条斑病菌快速检测鉴定的实时荧光PCR方法。根据含铁细胞接受子基因设计两菌的通用引物PSRGF/PSRGR（扩增一个152bpDNA片段）和特异性探针（Baiprobe和Tiaoprobe），并对13种细菌和1种植原体进行实时荧光PCR。结果表明，两个特异性探针能分别特异性检测到目标病原菌产生荧光信号而其它参考菌不产生荧光信号。检测的绝对灵敏度是30.6fg/μL质粒DNA和103CFU/mL的菌悬浮液，相当于1个细菌细胞的基因，比常规PCR电泳检测高约100倍，相对灵敏度为105CFU/mL。整个检测过程只需2h，完全闭管，降低了污染的机会，无需PCR后处理。 用这两个特异性探针分别对自然感染白叶枯菌和条斑菌的叶片DNA提取液和种子浸泡液进行实时荧光PCR，结果均可特异性检测到目标菌的存在并完全可将两种病原细菌区分开来,且只需03g叶片和10g种子。

摘要:研究酵母菌中表达的新疆家蚕抗菌肽 (CecropinXJ)的抗菌特性。根据琼脂孔穴扩散法，检测抗菌肽的热稳定性、抑菌效价、对氨苄青霉素抗性菌的抑菌作用，并检测了抗菌肽对酸碱盐、人造胃液的耐受性及其抗菌谱。结果显示新疆家蚕抗菌肽具有很强的热稳定性、能够杀灭氨苄青霉素抗性菌、对酸碱盐、人造胃酸有一定的耐受性，其杀菌活力为：1mg抗菌肽与1200U的氨苄青霉素杀菌活力相当。新疆家蚕抗菌肽能够不同程度地杀灭革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，这一发现将为抗菌肽在农业、医疗卫生、畜牧业等方面的应用奠定基础，同时为深入研究抗菌肽作用机制提供了依据。

摘要:采用高效液相色谱（HPLC）技术对在广州发现的鹅膏菌新种——致命鹅膏(Amanita exitialis)不同组织部位的肽类毒素(鹅膏毒肽和鬼笔毒肽)的含量进行了分析，结果表明，致命鹅膏是一种剧毒蘑菇，其毒素含量相当高，子实体中组织部位不同，毒素含量以及鹅膏毒肽和鬼笔毒肽在其中的分布也不一样，菌盖中的毒素含量最高，达8152.6μg/g干重，菌柄的毒素含量次之，为3742.3μg/g干重，菌托中的毒素含量最低，只有1142.5μg/g干重；在菌盖、菌柄和菌托中都以鹅膏毒肽为主，尤其以αamanitin的相对含量最高，但从菌盖至菌柄到菌托，鬼笔毒肽尤其是Phallacidin的相对含量依次增加。

摘要:利用6 mol/L HCl沉淀枯草芽孢杆菌B2菌株的去细胞培养液，甲醇抽提获得脂肽类抗生素粗提物，过Sephadex LH20层析柱获得粗纯化物，经MALDITOFMS检测表明B2菌株仅含有表面活性素一种脂肽类抗生素。利用HPLC SMART SYSTEM，将粗纯化物过μRPC C2/C18层析柱对表面活性素变异体进行分离后获得纯化物。经MALDITOFPSDMS对纯化物的结构分析表明，B2菌株的表面活性素变异体由13、14和15个碳原子的脂肪酸链以及L-Glu-L-Leu-D-Leu-L-Val-L-Asp-D-Leu-L-Leu七环肽组成。

摘要:通过GC-MS测定出嗜吡啶红球菌R04菌降解联苯的中间代谢物2,3二氢二羟基联苯、2,3二羟基联苯和苯甲酸，并测定了该菌的2,3二羟基联苯双加氧酶、2羟基6酮基6苯基2,3己二烯酸(HOPDA)水解酶和苯甲酸双加氧酶活性。最终确定了R04菌降解联苯的途径为2,3二羟基联苯双加氧酶途径。

摘要:通过初筛、单倍体分离、DES诱变、絮凝基因的克隆表达及杂交等育种技术成功构建了高生物量、耐高糖、强絮凝的优良面包酵母菌株(Saccharomyces cerevisiae) ZLTH58(MATa/α,leu,FLO1)。菌株ZLTH58具有双亲的优良性状，遗传性状稳定。对其生物量、耐高糖能力、絮凝特性进行了检测，结果表明，菌株ZLTH58的生物量是原始亲株BL56的1.21倍；耐高糖能力优于原始亲株BL61；絮凝性能明显优于原始亲株BL56和BL61。对其培养条件进行了优化，在优化的培养条件下，生物量可以达到83.06g/L，为初始培养条件下的1.35倍。

摘要:

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