• 2004年第44卷第6期文章目次
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    • SARS动物模型的研究

      2004, 44(6).

      摘要 (929) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2039) 评论 (0) 收藏

      摘要:利用分离的SARSCoV毒株BJ01,经滴鼻等途径感染大鼠、豚鼠、黑线仓鼠、白化仓鼠和雏鸡等5个种属的动物,筛选对SARS易感的小动物。在此基础上,选择食蟹猴和恒河猴进行SARS的人工感染实验,评价其作为SARS动物模型的可能性。结果表明,大鼠、豚鼠、黑线仓鼠、白化仓鼠和雏鸡等动物对SARS均不易感,感染后未观察到任何的临床及病理学改变,不过从感染2周后的大鼠和豚鼠的肺和咽等组织样本中检测到了的特异的核酸,提示SARSCoV能够在这两种动物的体内复制。从感染猴子的分泌物和脏器中分离出了病毒,证明SARSCoV也能够在猴子体内复制。临床和病理组织学检查结果显示,SARS病毒接种食蟹猴和恒河猴后,可以引起所有实验猴发生间质性肺炎,其病理学改变与人类感染SARS病毒后肺部病变近似,但病变的严重程度比较人类的轻得多,除此之外无任何其它的明显的临床表现及组织病理学改变,按照动物模型的指标判断食蟹猴和恒河猴并不是SARS的理想动物模型,不过在目前尚没有更理想的动物模型情况下,以间质性肺炎为病理学检查指标,恒河猴和食蟹猴可以作为评价抗SARS药物和疫苗的模型动物。

    • 国内首次自患者标本中同时分离的登革2型和3型病毒的鉴定

      2004, 44(6).

      摘要 (1161) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1435) 评论 (0) 收藏

      摘要:采用间接免疫荧光方法,检测患者血清标本中的抗登革病毒IgM和IgG抗体;同时将病人急性期血清接种C6/36细胞进行病毒分离。从分离的病毒悬液中提取RNA,进行RTPCR扩增和序列测定。结果显示,该患者血清中存在抗登革病毒的IgM和IgG抗体。从病人血清中分离的病毒,经RTPCR和序列测定证实为登革2型和3型病毒的特异序列。表明该患者为登革2型和3型病毒混合感染。

    • 一个产木质素酶的嗜碱细菌新种

      2004, 44(6).

      摘要 (1180) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2613) 评论 (0) 收藏

      摘要:从内蒙古盐碱湖分离到一株产木质素酶的嗜盐碱菌F10。其形态为杆状或短杆状,革兰氏染色阳性,最适生长pH为9.5, 最适生长温度为37℃。通过生理生化特征、胞壁氨基酸成分、基于16S rDNA序列的系统发育学分析和DNADNA杂交同源性比较发现菌株F10是双芽孢杆菌(Amphibacillus)属中一个与其它成员不同的新种,命名为好纪双芽孢杆菌Amphibacillus haojiensissp. Nov.。

    • 高效产氢细菌新种——Ethanologenbacterium sp. X-1的分离鉴定及其产氢效能

      2004, 44(6).

      摘要 (1013) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2575) 评论 (0) 收藏

      摘要:为获得高效产氢发酵细菌,采用改进的厌氧Hungate培养技术,从生物制氢反应器CSTR中分离一株产氢细菌X1。对该株细菌进行了形态学特征、生理生化指标、16S rDNA和16S23S rDNA 间隔区序列分析等研究。结果表明与最相近的种属Clostridium cellulosiAcetanaerobacterium elongatum等的16S rRNA基因序列同源性为94%以下。16S23S rRNA 间隔区基因序列比对分析显示保守区域仅为tRNAAla和tRNAIle序列,其它可变部位没有同源性区域,鉴定为新属Ethanologenbacterium sp.。该株细菌为专性厌氧杆菌,代谢特征为乙醇发酵,葡萄糖发酵产物主要为乙醇、乙酸、H2和CO2。在pH4.0和36℃条件下最大产氢速率是28.3mmol H2/(g dry cell·h)。经鉴定和产氢效能分析表明该菌株是一新属的高效产氢细菌。

    • 一株能在大豆上结瘤的苜蓿中华根瘤菌

      2004, 44(6).

      摘要 (940) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2209) 评论 (0) 收藏

      摘要:苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)XJ96077分离自新疆的苜蓿根瘤中,其原宿主为紫花苜蓿(Medicago sativa)。交叉结瘤试验发现,它既可在苜蓿上又能在大豆上结瘤固氮。DNA (G+C) mol%分析表明,XJ96077的DNA (G+C) mol%为619%,与已报道的根瘤菌属的DNA (G+C) mol%范围(59%~64%)相符。DNA同源性分析表明, XJ96077与苜蓿中华根瘤菌USDA1002T和042BM的同源性分别达到93%和80%,说明XJ96077归属于苜蓿中华根瘤菌。应用绿色荧光蛋白基因标记XJ96077,得到重组菌株XJ96077(G)。将其接种普通紫花苜蓿,通过激光共聚焦荧光显微镜可以检测到标记基因的表达。接种北引1号大豆上,同样可以清楚地观察到标记基因在根瘤中的表达,从而确证了XJ96077能同时在苜蓿和大豆上结瘤。通过不同品种大豆的结瘤试验,发现XJ96077对大豆品种的结瘤能力不同。

    • 青海高寒草甸土壤放线菌区系研究

      2004, 44(6).

      摘要 (966) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2690) 评论 (0) 收藏

      摘要:2001~2002年从海北高寒草甸生态系统采集土样,用不同方法从中分离放线菌300余株,根据其形态和分类特征,分别归入小单孢菌属(Micromonospora)、诺卡氏菌属(Nocardia)、糖多孢菌属(Saccharopolyspora)、原小单孢菌属(Promicromonospora)和链霉菌属(Streptomyces),并将链霉菌归入7个类群。同时对230株中温菌和110株低温菌的部分酶活性及其对真菌和细菌的拮抗性进行了测定,发现链霉菌不仅具有许多酶活性,而且对真菌和细菌有拮抗性。

    • 猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的原核表达、纯化与结构分析

      2004, 44(6).

      摘要 (505) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1623) 评论 (0) 收藏

      摘要:将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)BJ4毒株N基因克隆至原核表达载体pET28a中,得到重组表达载体pET28N,转化Escherichia coli BL21(DE3)细胞,获得可溶性表达,表达量占菌体蛋白的28%。经Proband Ni2+亲和层析获得重组蛋白P28N,圆二色谱(CD)测定结果表明, P28N重组蛋白螺旋占26.1%,折叠占23.7%,转角19.8%,卷曲占30.3%。并进一步绘制出PRRSV N蛋白的二级结构图。

    • 栉孔扇贝感染急性病毒性坏死症病毒的组织病理学与免疫荧光检测

      2004, 44(6).

      摘要 (713) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1619) 评论 (0) 收藏

      摘要:应用组织学和单克隆抗体免疫荧光技术(Immunofluorescence assay, IFA)对夏季养殖中后期大规模死亡(“急性病毒性坏死症" Acute virus necrobiotic disease,AVND)高峰期的患病栉孔扇贝(Chlamys farreri)进行了检测。组织学检测结果显示,患病扇贝的大多数器官(外套膜、鳃、胃、肾等)的上皮组织细胞可见显著的细胞肿胀、嗜碱性增强、排列紊乱、部分脱落以至完全坏死脱落等显著的组织病理学变化。作为对照,利用针对AVND病毒的特异性单克隆抗体所建立的免疫荧光原位检测技术对患病扇贝进行检测发现,上皮组织的病理变化与病毒感染之间具有一致的对应关系。这一结果表明,AVND病毒的感染可以对栉孔扇贝造成严重的病理性破坏。此为解释该病毒导致栉孔扇贝大规模死亡的机制提供了直接的组织病理学依据。

    • 烟草曲茎病毒复制蛋白基因的原核表达和免疫定位

      2004, 44(6).

      摘要 (699) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1457) 评论 (0) 收藏

      摘要:利用PCR方法从烟草曲茎病毒(TbCSV)Y35分离物的病株中获得复制蛋白(Rep)基因,将其克隆到原核表达载体pGEX4T1上获得重组质粒pGEXY35Rep。重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)pLys S中,IPTG诱导表达后发现部分Rep融合蛋白以可溶性形式表达。利用GSTSepharose 4B亲和层析柱纯化了Rep的融合蛋白,免疫家兔获得Rep蛋白的抗体。对TbCSV侵染烟草中Rep蛋白的亚细胞分布研究发现,Rep蛋白主要分布于含有细胞核的组份中。利用免疫胶体金技术对感病烟草中Rep蛋白进行了定位,发现Rep蛋白存在于细胞核内。

    • 重组炭疽致死因子的表达及生物活性分析

      2004, 44(6).

      摘要 (1236) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2307) 评论 (0) 收藏

      摘要:使用分泌型表达质粒,实现了重组炭疽致死因子(rLF)在大肠杆菌周质腔中的分泌表达。表达量约占菌体总蛋白的4%。经过离子交换和凝胶过滤纯化,每升诱导培养物可获得约3mg电泳纯的rLF。蛋白N端测序表明,rLF序列与天然炭疽LF一致。体外细胞毒性试验亦显示rLF具有很好的生物活性。rLF的成功表达为今后研究LF的作用机理、发展新型炭疽疫苗、筛选针对炭疽致死毒素的抑制剂打下基础。

    • 李斯特菌溶血素基因的原核表达及其生物学特性

      2004, 44(6).

      摘要 (1192) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3240) 评论 (0) 收藏

      摘要:李斯特菌溶血素(LLO)是产单核细胞李斯特菌的主要毒力因子,利用PCR技术从血清型4b的产单核细胞李斯特菌菌株中扩增出编码LLO的hly基因,经克隆筛选和测序鉴定后,构建成该基因的原核表达质粒pGEX6P1hly,SDSPAGE结果表明:LLO与谷胱甘肽在大肠杆菌中已融合表达,融合蛋白的分子量为82kD;溶血实验证明融合蛋白具有较强的裂解真核细胞膜的作用,表明表达产物LLO具有生物活性,其溶血效价达2.26×101.4 HU/mg,这为进一步研究其致病与免疫机理、单抗研制和疫苗设计提供了条件。

    • 大肠杆菌O138 O-抗原基因簇的破译及Gne的生物信息学鉴定

      2004, 44(6).

      摘要 (948) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1336) 评论 (0) 收藏

      摘要:利用鸟枪法对大肠杆菌E.coli O138 O抗原基因簇进行测序,序列全长14139bp,用生物信息学的方法进行序列分析,共发现11个基因,分别为鼠李糖合成酶基因(rmlB, rmlD, rmlA, rmlC)、UDPGalNAcA合成酶基因(gne, gna)、糖基转移酶基因(3个)、O抗原转运酶基因(wzx)和O抗原聚合酶基因(wzy)。发现一种稀有单糖UDPGalNAcA的合成途径,对合成该糖的第一种酶Gne进行了生物信息学鉴定,另外用PCR方法筛选出了针对大肠杆菌O138的特异基因。

    • 假单胞菌gacA插入突变对藤黄绿脓菌素和吩嗪-1-羧酸合成代谢的差异性调控

      2004, 44(6).

      摘要 (991) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2020) 评论 (0) 收藏

      摘要:假单胞菌株M18分泌藤黄绿脓菌素(Pyoluteorin,Plt )和吩嗪1羧酸(Phenazine1carboxylic acid, PCA)并抑制多种植物病菌的生长。 从M18中克隆双基因调控系统gacS/gacA的组成基因gacA,并构建了该基因抗性插入突变株M18G。在KMB培养基中,M18G合成Plt的能力受到完全抑制,而PCA的积累约比野生型提高31倍左右。Plt合成基因簇突变株M18T和在M18G基础上构建的PCA合成基因簇突变株M18GA的Plt和PCA合成的动力学变化表明,在M18G菌株中,Plt合成的抑制并不引起PCA的过量积累,PCA的过量积累也不引起Plt合成的抑制。由此推测,gacA在基因表达的水平上全局性地执行着调控功能。

    • 黑曲霉pepB基因缺失菌株的构建及其功能分析

      2004, 44(6).

      摘要 (760) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2265) 评论 (0) 收藏

      摘要:以黑曲霉(Aspergillus niger)GICC2773基因组DNA为模板,用PCR方法分别扩增pepB基因中的上游约14kb和下游约13kb两段DNA序列,将此两段序列按同一方向分别插入质粒pMW1中潮霉素抗性基因(hph)表达单元的5′和3′端,构建成重组质粒pMW1pepB,用于通过同源重组靶向破坏基因组中的pepB基因。同源重组则采用原生质体PEG方法,将酶切pMW1pepB得到的线性片段转化A.niger GICC2773菌株,通过潮霉素选择平板得到62个Hgy抗性转化子,然后采用PCR方法从这些抗性转化子中筛选到1个由于同源重组产生的pepB基因缺失突变菌株pepB29。功能分析显示该突变株的酸性蛋白酶活性有明显下降,外源蛋白漆酶的分泌表达有所提高。

    • 乙内酰脲水解酶基因在大肠杆菌中的克隆表达

      2004, 44(6).

      摘要 (928) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1716) 评论 (0) 收藏

      摘要:节杆菌BT801的乙内酰脲酶系能够水解5苄基乙内酰脲生成L苯丙氨酸,其中乙内酰脲水解酶负责乙内酰脲的水解开环。乙内酰脲水解酶的表达对于乙内酰脲酶的催化机制研究及氨基酸的生物不对称合成都具有重要意义。通过PCR技术扩增得到乙内酰脲水解酶基因(hyuH),置于表达载体pT221的T7启动子下游,将构建的重组质粒引入大肠杆菌BL21(DE3)。SDSPAGE分析在相对分子量50kD处有一较强的表达带,经薄层扫描分析目的蛋白占全菌蛋白的40%,主要以可溶性形式存在,活性分析表明表达产物具有天然的酶活性。

    • 金针菇漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达研究

      2004, 44(6).

      摘要 (1039) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2442) 评论 (0) 收藏

      摘要:综合运用cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE )和基因组步行等技术克隆到一个金针菇(Flammulina velutipes)的漆酶结构基因和其对应的全长cDNA,经测序和BLAST比对分析表明该基因属于多铜氧化酶基因家族,与已发表的漆酶基因(AF176230) 的同源性最高,在氨基酸水平为72%。该结构基因命名为glccFv,cDNA命名为lccFv,其序列提交GenBank,登录号分别为AY485826和AY450406。将lccFv的开放阅读框克隆到毕赤酵母表达载体pHBM906,转化毕赤酵母GS115且实现了分泌表达。将重组毕赤酵母GS115 (pHBM565)诱导产酶,在培养温度20℃、甲醇流加量为1.0%(V/V)的情况下,其分泌表达的LCCFv的最高酶活为0.1070 U/mL,最适反应温度为45℃,最适反应pH值为3.9,在最适反应条件下其热稳定性和pH值稳定性均较好。

    • Qβ RNA 复制酶中亚基的共表达对β亚基溶解性的影响

      2004, 44(6).

      摘要 (900) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1377) 评论 (0) 收藏

      摘要:在体外RNA和蛋白质合成及自复制系统的研究中,Qβ RNA复制酶作为以RNA为模板的RNA聚合酶,是比较重要的应用酶种之一。该酶由4个亚基组成,其中只有 β亚基是由病毒基因编码,而其他3个亚基都是宿主蛋白。利用普通表达载体合成Qβ复制酶时,得到的β亚基几乎都是不溶性蛋白,从而影响了Qβ复制酶的活性和产率。为尝试提高β亚基的溶解性,构建含有β亚基基因的表达质粒pBAD 33rep,同时利用pET21a(+)为表达载体表达其他3个亚基进行共表达研究。不同亚基组合的共表达结果通过SDSPAGE分析表明,当β亚基与EFTuTs亚基共表达时,溶解度有一定的提高,而且可溶性部分也具有复制酶活性。通过调节共表达诱导物浓度,相对增强可溶性β亚基的表达,可溶性Qβ复制酶酶量得到相应的提高。

    • 毛壳霉内切菊粉酶的纯化与性质

      2004, 44(6).

      摘要 (875) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1697) 评论 (0) 收藏

      摘要:毛壳霉(Chaetomium sp.)C34发酵液经硫酸铵分级沉淀、DEAE纤维素11离子交换层析、QSepharose Fast Flow离子交换层析、Sephacryl S200 凝胶过滤、Phenol SepharoseTM HP疏水层析,得到电泳纯的内切菊粉酶组分,纯化倍数为30.8倍,活力回收率为7.7%。用SDSPAGE测得该酶亚基的分子量为66kD。菊粉酶的最适pH为6.0,最适温度为50~55℃。菊粉酶在50℃以下,pH50~8.0时较稳定。Cu2+完全抑制酶的活性,Mn2+、Zn2+、Fe2+、EDTA以及NBS(Nbromosuccinimide, N溴代丁二酰亚胺)对该酶有很强的抑制作用。该酶对菊粉有较强底物专一性,产物主要为低聚果糖,也可作用于蔗糖,I/S值为20。以菊粉为底物时,Km为0.199mmol/L,Vmax为115μmol/(mg·min)。

    • Bohaisea-9145海洋低温碱性脂肪酶研究

      2004, 44(6).

      摘要 (1384) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2427) 评论 (0) 收藏

      摘要:从2000多份渤海海区海水海泥样品中分离获得一株新型脂肪酶高产菌株BohaiSea9145,经鉴定为适冷性海洋酵母(Yarrowia lipolytica)。 菌株在以豆饼粉、棉籽饼粉和花生粕作为碳氮源并添加05%花生油的培养基中能较好地生长产酶,最适产酶温度26±1℃,产酶周期为23h。所得脂肪酶的最适反应温度为35℃,最适pH 8.5,pH4.0~9.0范围内稳定,热稳定性差。该酶与常见金属离子和化学试剂的配伍性较好,受表面活性剂SDS的激活,且具有良好的耐盐及抗氧化特性,是一种新型的海洋低温碱性脂肪酶,在洗涤剂行业特别是冷洗行业中具有良好的应用前景。

    • 32种抗菌药物对临床分离猪源链球菌的体外抗菌活性

      2004, 44(6).

      摘要 (608) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2044) 评论 (0) 收藏

      摘要:采用微量稀释法测定了32种药物对临床分离猪源链球菌的体外最小抑菌浓度(MIC),以美国临床检验标准委员会(NCCLS)的临界浓度做为判断标准,判定了猪源链球菌对32种药物的耐药性。结果表明,临床分离的菌株以耐药菌为主,且96.6%的菌株呈多重耐药,41%菌株为链霉素高耐药菌株(MIC≥2mg/mL);对磺胺类药物(92.3%~98.3%)、氨基糖甙类药物(70.8%~78.5%)、四环素类(72.3%)、林可胺类(66.2%~64.6%)、大环内酯类(53.8%~67.7%)耐药性最为严重,对青霉素类(18.5%~53.8%)、头孢菌素类(18.5%~56.9%)、泰妙灵(21.5%)和喹诺酮类药物(36.9%~78.5%)耐药性次之,而所选菌株对氯霉素类药物氟苯尼考均敏感;检测了所有耐β内酰胺类抗生素菌株是否产β内酰胺酶,结果均为阴性。

    • 降低光滑球拟酵母电子传递链活性加速丙酮酸合成

      2004, 44(6).

      摘要 (799) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2084) 评论 (0) 收藏

      摘要:光滑球拟酵母CCTCC M202019经溴化乙锭诱变,挑选假阳性呼吸缺陷型菌株共40株。对其中7株丙酮酸产量提高的突变株进行发酵性底物(葡萄糖)和非发酵性底物(甘油、乙酸)的利用能力测试,鉴定得到3株呼吸缺陷型突变株RD16、RD17和RD18。相对于出发菌株,呼吸缺陷型突变株生长速率下降,最终菌体浓度降低21%~29%,胞内ATP含量下降15%~21%,但单位细胞耗葡萄糖能力和单位细胞产丙酮酸能力分别提高了20.7%~30.7%和30.7%~555%。进一步研究发现,呼吸缺陷型突变株线粒体复合体Ⅰ、Ⅰ+Ⅲ、Ⅱ+Ⅲ和Ⅳ的活性分别下降了34%~41%、38.6%~52.6%、21%~25%、150%~630%,表明线粒体电子传递链氧化NADH的功能受到抑制。为使酵解产生的NADH正常氧化,在RD18菌株的对数生长期流加2.1mmol/L外源电子受体乙醛。发现细胞合成丙酮酸能力提高21.6%,且葡萄糖消耗速度明显加快,发酵周期缩短14h。结果表明适当削弱能量代谢能够提高真核微生物中心代谢途径的速度。

    • 两种PCR方法对木耳属菌株的遗传多样性评价

      2004, 44(6).

      摘要 (746) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1523) 评论 (0) 收藏

      摘要:应用ERIC和RAPD两种PCR方法对木耳属3种29个菌株进行遗传鉴别,其中ERIC方法是首次运用于食用菌的研究领域。 在相似系数75%的水平上, ERIC和RAPD分别将供试菌株分为9组和6组。 由ERIC所得的聚类图可将黑木耳和毛木耳两个种区分开, 而RAPD则不能完全区分两个种,但两种方法得到了一个相似的结果, 即琥珀木耳与黑木耳的亲缘关系极其相近。 Southern杂交实验进一步证明了ERIC所得到的29个菌株的同源性关系。 分析表明, RAPD方法主要在种的水平上进行鉴别, 而ERIC则可以在菌株水平上进行鉴别, 结果与菌株栽培性状更为一致。研究结果表明ERICPCR是一种比RAPD更快捷可靠的分子标记方法, 可以替代RAPD应用于木耳属的遗传多样性及遗传分类的研究。

    • 涅斯捷连科氏菌属菌株的分离及系统学研究

      2004, 44(6).

      摘要 (1316) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2155) 评论 (0) 收藏

      摘要:从我国新疆及埃及东部高盐环境中分离到4株形态上类似于涅斯捷连科氏菌属的革兰氏阳性菌株。以该属的2个典型菌株(Nesterenkonia halobia DSM 20541T 和Nesterenkonia lacusekhoensis DSM 12544T)为对照,对4个分离菌株进行了包括形态学,生长pH范围,温度范围,耐NaCl,KCl,MgCl2·6H2O,CaCl2实验及酶学特性以及细胞化学组份、(G+C)mol%含量测定,16S rDNA分析及DNADNA杂交在内的多相分类研究。结果显示,4个分离菌株属于涅斯捷连科氏菌属,但与涅斯捷连科氏菌属的2个有效发表种有显著差异,因此4个分离菌株均为该属的新种。

    • 浓缩苹果汁生产过程中脂环酸芽孢杆菌的分离及初步鉴定

      2004, 44(6).

      摘要 (1070) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3196) 评论 (0) 收藏

      摘要:本文对浓缩苹果汁生产过程中的嗜酸耐热菌进行了分离,得到45株纯的嗜酸耐热芽孢杆菌。根据脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus)嗜酸的特点,用LB平板进行筛选,结果表明所有的菌株都嗜酸。用抗热性试验研究了这些菌株产生芽孢的培养时间,结果表明,所有考察的菌株中,33株与DSM 3922的生长周期一致,48 h内产生芽孢;3株菌生长速度较快,培养17 h就能产生芽孢;还有3株菌生长速度较慢,需培养48 h后才能产生芽孢。在采用16S rDNA PCR_RFLP法对筛选得到的脂环酸芽孢杆菌进行快速鉴定的基础上,选取7株可能是新种的未知菌株与5株已知的参比菌株的19个表型特征进行了试验研究和聚类分析,结果进一步证实了这7株菌都是与已知参比菌株不同的菌株。

    • 腾冲热海眼镜泉粉红色菌藻席的细菌组成分析

      2004, 44(6).

      摘要 (937) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1867) 评论 (0) 收藏

      摘要:应用免培养法系统研究眼镜泉粉红色菌藻席的细菌组成。经过克隆筛选,测定了23个克隆的16S rDNA插入片段的近全序列。与GenBank的序列进行比对和相似性分析,结果表明,组成该菌藻席的细菌分属于Proteobacteria、Firmicutes、Bacteroidetes、Actinobacter、Deinococcus_thermus、Aquificals 6个类群(phylum),表现出了高度的细菌多样性。结合分析温度相近的5个热泉:Octopus spring、Haegindi and Fluidir spring、Olkelduhals、Grendalur spring中的菌藻席细菌组成,表明生态位相近的不同环境中,其物种组成相近。Aquificales是中性或弱碱性高温热泉菌藻席群落的优势物种。

    • 苏云金芽孢杆菌酪氨酸酶基因的克隆表达及应用初探

      2004, 44(6).

      摘要 (729) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1740) 评论 (0) 收藏

      摘要:酪氨酸酶基因编码的酪氨酸酶是生物体合成黑色素的关键酶。采用比较酪氨酸酶的同源保守结构域氨基酸序列的方法设计引物,从苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis) 4D11中通过PCR扩增得到了包含酪氨酸酶基因的DNA片段。将该片段亚克隆到载体pGEM_7zf上并转入大肠杆菌DH5α,所得到的转化子在添加了L_酪氨酸的LB培养基中能合成可溶性的黑色素。测定该菌株黑色素的产量和在紫外光照射后的菌体活力,结果表明该基因产生的黑色素能在一定程度上保护菌体免受紫外辐射。

    • 芒果炭疽病菌β-微管蛋白基因的克隆及其与多菌灵抗药性发生的关系

      2004, 44(6).

      摘要 (700) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1553) 评论 (0) 收藏

      摘要:参照豆科合萌属(Aeschynomene)作物炭疽病菌的tub1和tub2基因序列设计了2对引物,分别从芒果(Mangifera)炭疽病菌对多菌灵(MBC)田间抗药性(MBCR)和敏感(MBCS)的菌株中扩增β_微管蛋白基因。结果只有以tub2为参照设计的引物扩增到了特异片段。进一步对全基因进行了克隆和测序。该基因序列全长1344bp,编码447aa,其核苷酸和氨基酸序列与豆科合萌属炭疽病菌的tub2基因高度同源。对芒果炭疽病菌抗、感菌株β_微管蛋白氨基酸序列进行比较分析,发现第181、237和363位氨基酸发生了突变,而其它位置(如第198位或200位)均不变。

    • 鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的克隆及其在耻垢分枝杆菌中的表达

      2004, 44(6).

      摘要 (831) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1686) 评论 (0) 收藏

      摘要:以ILTV基因组为模板,利用PCR特异扩增出gB基因,定向克隆到中间质粒载体pY_α,构建了中间质粒pY_α_gB。然后以中间质粒pY_α_gB为模板,扩增出含有人结核分枝杆菌启动子hsp70基因和堪萨斯分枝杆菌α信号肽基因的hsp_α_gB片段,回收补平后与穿梭表达载体pRR3平端连接,从而构建大肠杆菌_分枝杆菌穿梭表达质粒pR_α_gB。再将其电转化至耻垢分枝杆菌M.smegmatis mc2 155,ELISA检测表明重组菌株M.smegmatis mc2155(pR_α_gB)的表达产物具有很好的反应原性。Western blot检测说明gB基因在分枝杆菌中获得了表达并具有良好的免疫原性。鸡胚中和试验结果表明该重组菌株可以中和1个剂量EID50的ILTV强毒,能够保护SPF鸡胚抵抗强毒攻击。

    • 人热休克蛋白gp96基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达与纯化

      2004, 44(6).

      摘要 (1165) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1922) 评论 (0) 收藏

      摘要:热休克蛋白gp96是热休克蛋白90家族成员,能够引起非特异性和特异性免疫反应。得到大量高纯度的蛋白质是研究开发gp96的关键。然而重组的gp96容易在E.coli中降解,并在一定条件下形成多聚体。实验先将人gp96基因克隆到pET30a载体上并在E.coli Blstar中表达,再经过亲和层析、阴离子交换、分子筛分别纯化gp96。最终去掉了大部分的降解片段和多聚体,得到一定量的可溶性gp96,为进一步研究其结构和功能打下一定的基础。

    • 关于好氧反硝化菌筛选方法的研究

      2004, 44(6).

      摘要 (1491) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3612) 评论 (0) 收藏

      摘要:采用污泥驯化手段富集好氧反硝化细菌,将得到的驯化污泥分离纯化,共得到105株菌。用测TN的方法对所筛菌株进行初筛,得到25株对TN去除率达到50%以上的菌株。用氮元素轨迹跟踪测定法复筛,证实这25株菌都可以在好氧条件下进行硝酸盐呼吸,其中24株菌的反硝化过程为:NO3-N→NO2-N→N2,研究中还发现在反硝化过程中硝酸盐和亚硝酸盐不存在明显竞争被利用的作用。同时还提出了可能实现短程同步硝化反硝化以及在反馈作用的调节下,加快硝化反应速度的观点。

    • Ⅲ型分泌系统分子伴侣研究进展

      2004, 44(6).

      摘要 (1065) HTML (0) PDF 0.00 Byte (1683) 评论 (0) 收藏

      摘要:Ⅲ型分泌系统广泛存在于革兰氏阴性致病菌中。通过Ⅲ型分泌系统,耶尔森氏菌属、沙门氏菌属、福氏志贺氏菌等革兰氏阴性致病菌注射毒力因子到宿主细胞中,被注入的细菌毒力蛋白在宿主细胞中刺激或干扰宿主细胞的代谢过程,支配细菌与宿主细胞的相互作用,从而引起诸如鼠疫、伤寒、痢疾等许多疾病。Ⅲ型分泌系统分子伴侣在帮助毒力蛋白分泌的过程中起到重要作用。尽管发现Ⅲ型分泌系统分子伴侣至今已近十年,但其具体的功能仍不清楚。从分类、功能、与相应底物作用的特点等方面对Ⅲ型分泌系统分子伴侣的研究进展作一简单介绍。

    • DGGE/TGGE技术及其在微生物分子生态学中的应用

      2004, 44(6).

      摘要 (1937) HTML (0) PDF 0.00 Byte (4330) 评论 (0) 收藏

      摘要:变性梯度凝胶电泳(DGGE)和温度梯度凝胶电泳(TGGE)是近些年微生物分子生态学研究中的热点技术之一。由于DGGE/TGGE技术具有可靠性强、重现性高、方便快捷等优点,被广泛地应用于微生物群落多样性和动态性分析。文章对DGGE/TGGE技术原理与关键环节、局限性和应用前景进行了综述。

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