摘要:从内蒙古锡林浩特地区3个不同的盐湖中共分离到165株古菌, 通过ARDRA分析后得到不同的类群，从各个类群中随机选取1～2个代表菌株进行16S rDNA序列测定和系统发育的分析。结果表明分离的菌株分布在Halorubrum，Natronococcus，Natronorubrum，Haloterrigena，Ｈalorhabdus，Halobiforma，Haloarcula，Haloferax 8个属和另外两个分支中，表现了锡林浩特地区嗜盐古菌的多样性。部分菌株的16S rDNA序列同源性低于97％，可能是潜在的新属或新种，代表了该地区嗜盐古菌的独特类型。

摘要:从堆肥中分离到一株对植物病原菌尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）具有强烈抗菌活性并具有较广抗菌谱的细菌Q12菌株。通过形态观察、生理生化实验、16S rDNA同源性序列分析以及部分特异性基因序列分析，鉴定该菌为解淀粉芽孢杆菌。该菌的最适培养基组成为：葡萄糖5g/L，NH4Cl 1g/L，牛肉膏 0.8g/L，氯化镁 5g/L。最适培养温度为33℃, 最适培养pH 为6.0, 最适培养时间为40h。

摘要:鸭疫里默氏菌感染是危害养鸭业的主要疾病，用表型指标鉴定鸭疫里默氏菌存在不足，因此有必要建立检测该菌的种特异性PCR法。利用已登录的鸭疫里默氏菌、大肠杆菌、沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌的16S rDNA基因序列，设计了一对鸭疫里默氏菌16S rDNA基因的特异性引物190f和843r，分别以基因组DNA和菌落提取液为模板，从1～19型鸭疫里默氏菌参考菌株和代表亚型、变异株和可能新型的国内分离株共26株细菌中均扩增出大小为654bp的特异性片段，而扩增鸭大肠杆菌、鸭沙门氏菌和禽多杀性巴氏杆菌等感染鸭的常见细菌的结果均呈阴性。分别将鸭疫里默氏菌基因组DNA和菌落提取液进行10倍梯度稀释，基因组DNA的最小检出量为50pg，菌落最小检出量为15CFU/mL。结果说明，该PCR法具有较好的特异性和敏感性，可用于快速鉴定鸭疫里默氏菌。

摘要:从Mu转座突变子文库中经过表型筛选，得到12株泳动（Swimming motility）能力缺陷的突变子，经Mu转座子插入位点的确认、基因克隆及测序分析发现其中10个突变子中Mu转座子分别插入到10个不同的与鞭毛运动和功能相关的基因中，2个突变子中Mu转座子插入到功能未知的新基因（PA2950和PA5022）中，电镜观察结果表明这2个突变株均具有完整的鞭毛，初步推测这2个基因可能是参与鞭毛泳动的能量代谢、趋化作用或信息传递的新基因。

摘要:CcpA蛋白是介导枯草芽孢杆菌碳分解代谢物阻遏（CCR）的全局调控因子，由ccpA基因编码。CCR效应的存在影响B. subtilis对葡萄糖的利用，降低B. subtilis生产发酵产品的效率。采用基因重组技术敲除了核黄素发酵菌株B. subtilis24/pMX45的 ccpA基因，构建了CcpA缺陷株B. subtilis24A1/pMX45。发酵结果显示：B. subtilis24A1/pMX45能够在70h内基本耗尽10%的葡萄糖，生物量达到1.5×10.9个细胞/mL，溢流代谢产物积累量减少，在8%和10%葡萄糖浓度下，B. subtilis24A1/pMX45核黄素产量分别比B. subtilis24/pMX45提高了62%和95%。CcpA的缺陷，可以缓解葡萄糖引起的CCR效应，显著提高菌株的核黄素产量。

摘要:利用SEFAPCR技术从中度嗜盐菌Halomonas sp. BYS1总DNA中克隆了四氢嘧啶合成基因ectABC及其上游序列（GenBank accession number DQ017757）；OMIGA软件分析结果显示ectA、ectB、ectC位于同一个操纵子上，大小分别为573bp、1251bp和387bp，预测编码的DAT（L二氨基丁酸转氨酶）、DAA（L二氨基丁酸乙酰转移酶）和ES（四氢嘧啶合酶）大小分别为21.1kDa(191 amino acid)、45.7kDa (417 amino acid)和145kDa（129 amino acid）；将包含ectABC基因及其上游1000bp序列的片段克隆到pUC19中并转化E.coli DH5α，转化子E.coli(pUC19ECT)能够在盐激条件下合成四氢嘧啶，但其耐盐能力没有得到显著改善。 〖HTH〗关键词：〖HTSS〗

摘要:天蓝色链霉菌的开放阅读框SCO5433编码一个含有TPR ( Tetratricopeptide repeat ) 结构域的调控蛋白。该基因的阻断突变株表现出孢子颜色加深和色素产量增加的表型变化。孢子颜色的加深在以葡萄糖或甘露醇为碳源的MM培养基上表现明显； 色素产量的增加在以甘露醇为碳源的MM培养基和MS培养基上表现最为明显；插片培养结合光学显微镜观察并没有发现突变株在形态分化上有显著变化；这些发现预示着可能存在一个SCO5433参与的调控途径，在一定条件下，这一途径对天蓝色链霉菌次级代谢可能起着负调控作用，而与形态分化无关。

摘要:二氧化硫在啤酒中具有抗氧化的重要功能，而在其形成过程中APS激酶（MET14编码）起着非常重要的作用。以二氧化硫产量较高的青岛啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）YSF5的总DNA为模板，用PCR方法克隆得到MET14基因。为使目的基因在酿酒酵母中表达，以大肠杆菌酿酒酵母穿梭质粒YEp352为载体， 以PGK1强启动子为调控元件，构建了重组表达质粒pPM, 并转化酿酒酵母YS58。转化子在YNB添加亮氨酸、组氨酸和色氨酸的选择性培养基上筛选鉴定，盐酸副玫瑰苯胺法测得转化子的SO2产量是受体菌的2倍左右。在重组表达质粒pPM的基础上添加铜抗性标记基因构建了重组表达质粒pCPM, 并转化青岛啤酒工业酵母菌株YSF38，转化子在YEPD+4mmol/L CuSO4的选择性培养基上筛选鉴定，实验室条件下培养后，测得转化子YSF38(pCPM)的SO2产量是受体菌的3.2倍。用该转化子在青岛啤酒厂进行小型发酵实验，结果表明在发酵结束时，YSF38(pCPM) 转化子的SO2产量是受体菌的1.4倍。因此，MET14基因的有效表达可以提高啤酒工业酵母的SO2 产量。

摘要:核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）arom基因已经被克隆、测序。该基因编码的AROM蛋白是芳香族氨基酸合成途径中催化第二步到第六步的五功能多肽。为了对扩增的核盘菌arom基因进行功能验证和探索大量获得AROM蛋白的成熟方法，克隆了arom基因的编码框序列，并将其与载体pYES2连接，构建了酵母表达载体pYES2arom。用LiAc/SSDNA/PEG方法将该表达载体转入酿酒酵母H158（Saccharomyces cerevisiae H158）中。酶活测定、RTPCR和Northern杂交结果显示，核盘菌arom基因在酿酒酵母胞内获得了表达，转化子具有AROM蛋白结构域之一5烯醇丙酮酰莽草酸3磷酸合酶的催化活性。不同培养时间取样样品的酶活检测结果表明，当转化子在30℃的条件下，在SCU酵母尿嘧啶营养缺陷型选择培养基中以180r/min被振荡培养时，其外源AROM蛋白的5烯醇丙酮酰莽草酸3磷酸合酶酶活在培养72h达到最高。

摘要:利用反向遗传技术，通过基因重排方法，产生两个表面基因来自A/Chicken/Guangdong/SS/94（H9N2）禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)株和其余基因来自A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)AIV株的3株H9N2亚型重排AIV，动物传播性试验发现A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株、A/Chicken/Guangdong/SS/94（H9N2）AIV株和3株H9N2亚型重排AIV都可以经直接接触途径传播；在粪便接触途径下，3株重排AIV都不经粪便接触传播；只有A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株和重排AIV RF7/SSHA能经过气溶胶途径传播。HI试验结果进一步证明了以上的结果。实验结果表明H9N2亚型AIV的NA基因与H9N2亚型AIV气溶胶传播途径有重要的关系，即1998年中国大陆H9N2亚型AIV大流行可能是因为病毒获得气溶胶传播途径的特性，推测病毒的NA基因发挥了重要作用。

摘要:选择鸡胚高产的鸭源H5N1亚型禽流感病毒A/Duck/Shandong/093/2004株作为骨架病毒，在完成了全基因组序列测定基础上，设计合成的11对引物对病毒的8个基因分11段进行扩增。通过与转录载体PHW2000连接，构建A/SD/04的8个基因的拯救载体，经测序获得序列准确的拯救质粒： 241、242、243、244、245、246、247 和248。A/SD/04的8质粒与PR8（H1N1）进行不同组合的拯救，获得8个均含A/SD/04 HA基因的H5重组流感病毒。鸡胚尿囊液中重组病毒的血凝效价在28～2 10，EID50在10-8.5～10-9之间，MDT 在34～46h之间，均与野生A/SD/04（wt A/SD/04）相似。重组病毒对6周龄的SPF鸡的静脉接种指数（IVPI）与wt A/SD/04却有明显的差异，说明不同组合的内部基因影响病毒对鸡的致病力，但不影响病毒的鸡胚致死能力、对鸡胚的感染能力和病毒在鸡胚中的繁殖能力。构建的A/SD/04的8个质粒拯救系统，为H5N1的基因功能研究和新型疫苗开发奠定基础。

摘要:对棉铃虫Helicoverpa armigera核型多角体病毒HearSNPV的ORF33基因(ha33)进行克隆和原核表达，hass在E.coli中表达不完全，表达产物的大小为17kDa，小于预测的分子量284kDa。用纯化的原核表达产物免疫家兔，制备了多克隆抗体，应用多克隆抗体检测了HearSNPV感染的宿主细胞(HzAMI)中ORF33基因的表达，表达产物的分子量为31kDa。并通过共聚焦荧光显微镜方法，用多克隆抗体检测编码的蛋白在宿主细胞(HzAM1)中的亚细胞定位，发现ha33编码的蛋白存在于宿主细胞的细胞质中，并持续到感染后期。

摘要:现有微生物羟基化烟酸采用的是静息细胞转化工艺。但研究揭示，恶臭假单胞菌NA1（Pseudomonas putida NA1）在培养过程中不降解发酵液中由诱导剂烟酸转化形成的6-羟基烟酸，这是由于烟酸的存在抑制了羟基烟酸降解酶的作用，而不是因为细胞停止生长不利用羟基烟酸的缘故。因而尝试利用菌体诱导培养过程进行烟酸转化生产，建立了一种新的生产工艺，即菌体培养转化和静息细胞转化联合工艺。该工艺在恶臭假单胞菌NA1培养过程中持续补充烟酸以维持1%(W/V)浓度，使烟酸被生长细胞转化为羟基化烟酸并在发酵液中线性积累，而不被进一步降解；培养转化结束后，发酵液中的静息细胞依然拥有很高的羟基化酶活力，能够再次用于转化反应。该联合转化工艺与传统的静息细胞转化工艺相比，不仅节约了诱导剂烟酸，而且6-羟基烟酸的产量提高了65%。

摘要:以植物乳杆菌ATCC8014为试材，研究超高压对其能量代谢的影响。建立了用氯化碘硝基四唑紫测定ATCC8014的INT代谢还原活性的比色法。用比色法测定了超高压对ATCC8014 的INT代谢还原活性与葡萄糖利用的影响。试验结果表明，150～250MPa作用15min在MRS琼脂培养基上随着压力的增大菌落数显著降低，INT代谢还原活性降低显著，葡萄糖的利用变化不明显；超过300MPa后，葡萄糖的利用才显著降低；400MPa处理15min，尽管在MRS琼脂培养基上菌落数低于检测限，INT代谢还原活性为0％，而葡萄糖的利用能力仍为对照组的561％，超高压作用下ATCC8014的灭活与INT代谢还原活性的降低的相关性较好。说明ATCC8014的细胞膜上参与葡萄糖的吸收和运输的酶、糖酵解的酶与调节系统比三羧酸循环的酶与调节系统较耐压。三羧酸循环比糖酵解对超高压敏感，三羧酸循环的抑制是超高压灭活其的重要原因，这为了探讨超高压杀灭植物乳杆菌的机制提供了一定的理论依据。

摘要:根据真菌Δ6-脂肪酸脱氢酶基因保守的组氨酸Ⅱ区和Ⅲ区附近保守序列设计兼并引物进行RTPCR，得到雅致枝霉（Thamnidium elegans） As32806Δ6-脂肪酸脱氢酶基因459bp部分cDNA序列，然后通过快速扩增cDNA末端技术（RACE）向两端延伸得到1504bp的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因全长cDNA序列。序列分析表明有一个1377bp、编码459个氨基酸的开放阅读框TED6。推测的氨基酸序列与已知其他真菌的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的氨基酸序列比对，具有3个组氨酸保守区、2个疏水区及N末端细胞色素b5融合区。将此编码区序列亚克隆到酿酒酵母缺陷型菌株INVSc1的表达载体pYES2.0中,构建表达载体 pYTED6，并在酿酒酵母INVSc1中异源表达。通过气相色谱（GC）和气相色谱/质谱（GCMS）分析表明，该序列在酿酒酵母中获得表达，产生γ亚麻酸（GLA）的含量占酵母总脂肪酸的7.5%。证明此序列编码的蛋白能将外加的亚油酸转化为γ亚麻酸，是一个新的有功能的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因（GenBank,AY941161）。

摘要:从恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）200的基因组出发，用PCR方法克隆到两个独立作用的丙氨酸消旋酶基因，称之为dadX和alr。DadX编码357个氨基酸长的多肽，计算分子量为38.82kDa，alr编码409个氨基酸长的多肽，计算分子量为44182kDa。序列分析显示，DadX的氨基酸序列与Pseudomonas putida KT2440，铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa），鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）和大肠杆菌（Escherichia coli）的DadX比较，相似性分别为96.64%、71.99%、44.88%和47.37%。Alr的氨基酸序列与Pseudomonas putida KT2440比较，同源性为94.38%，而与铜绿假单胞菌（P. aeruginosa）、鼠伤寒沙门氏菌（S. typhimurium）和大肠杆菌（E. coli）的Alr比较, 同源性均较低，分别为22.89%、25.72%和26.44 %。在P. putida 200的DadX和Alr氨基酸序列中部发现有对于酶活性至关重要的保守区域，如磷酸吡哆醛（PLP）结合位点。DadX和 alr在大肠杆菌中得到表达，DadX丙氨酸消旋酶只对丙氨酸有消旋作用，而 Alr丙氨酸消旋酶可以作用于丙氨酸和丝氨酸两种底物，且对丝氨酸特异性更高。Alr的表达不依赖于外源启动子，说明在其结构基因上游存在启动子结构。

摘要:为检测苏云金杆菌辅助蛋白P20对Vip3A表达和杀虫活性的影响，将p20基因与vip3A基因相连构建了重组质粒pHVP20，然后电激转化至Bt中进行了共表达，以仅携带vip3A基因的质粒pHPT3作为对照质粒。Western blot结果显示，当vip3A基因和p20基因在Bt无晶体缺陷株CryB中共表达时，Vip3A蛋白的最大表达量约是其在CryB(pHPT3)菌株中单独表达的15倍。生物测定结果表明，CryB(pHVP20)和 CryB(pHPT3)菌株对初孵斜纹夜蛾幼虫的LC50值分别为 48.79μg/mL和 78.00μg/mL，这说明P20蛋白可以促进vip3A基因在Bt中的表达，但对提高Vip3A蛋白的杀虫毒力没有显著性帮助

摘要:以钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)野生株AS 1.542及产精氨酸突变株9711的基因组为模板，用PCR方法扩增出N-乙酰谷氨酸激酶基因(argB)片段。核酸序列分析结果表明，该片段全长1505bp，包含一个ORF，推测此ORF区编码一条317个氨基酸的多肽，分子量为33.6kDa。C. crenatum野生株AS 1.542与突变株971.1的argB基因序列比较，发现只在结构区有一个核苷酸的差别但没有引起氨基酸变化。野生株AS 1.542 argB基因的编码区核苷酸序列与C. glutamicum ATCC 13032、Corynebacterium efficiens YS314和Escherichia coli k12的同源性分别是99.89%、76.62%和37.94%，而氨基酸同源性分别是100%、78.55%和25.25%。在C. crenatum argB基因上游存在启动子区域。经IPTG诱导该基因在棒杆菌中得到有效表达，野生株AS1.542为宿主的重组子酶活明显提高。突变株971.1为宿主的重组菌酶活提高一倍，精氨酸积累提高约25％。

摘要:研究大肠杆菌表达重组蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin，Ecs)融合蛋白的发酵和纯化工艺。将Ecs基因插入表达载体pTXB1，转化E.coli BL21(DE3)构建工程菌。对工程菌进行补料分批培养并诱导表达，研究培养基、培养和诱导时间对工程菌生长和目的蛋白表达的影响，几丁质亲和层析纯化Ecs融合蛋白，经DTT裂解后，检测Ecs活性。发酵后菌体湿重可达75g/L，融合蛋白表达量约占总蛋白的35%，重组质粒在BL21宿主菌中传代稳定。亲和层析纯化后，得到Ecs单体，得率为28mg/L发酵液。生物学活性分析显示，重组Ecs能有效抑制血小板的聚集，其活性与天然Ecs相似。优化了Ecs融合基因工程菌的发酵和纯化条件，为规模化生产奠定基础。

摘要:根据Thermomyces lanuginosus热稳定几丁质酶Chit的N端氨基酸序列和同源保守序列设计简并引物，通过RTPCR及快速扩增cDNA末端（RACE）的方法，克隆了该几丁质酶的编码基因chit，全长cDNA为1500bp，包含一个由442个氨基酸组成的开放阅读框。该基因已在GenBank中注册，登录号为DQ092332。将成熟肽几丁质酶Chit阅读框与酵母表达载体pPIC9K连接，构建重组质粒pPIC9K/chit，转化毕赤酵母GS115，在甲醇的诱导下，成功地分泌出具生物活性的几丁质酶，诱导6d后酶活性达2.261U/mL，酶蛋白表达量为0.6mg/mL。该酶的最适反应温度和pH 值分别为60℃和5.5，该酶在50℃以下稳定；65℃的半衰期为40min。

摘要:从含硫土壤中分离筛选出一株专一性脱硫菌Fds1，经生理生化指标和16S rRNA序列分析鉴定其属于枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。用Gibb's试剂显色和气相色谱质谱联用分析表明，该菌株通过“4S"途径脱除有机硫。实验发现Fds1的最佳脱硫活性在30℃，在此温度下72h内能脱除约0.5mmol/L DBT中的有机硫。Fds1菌株对有机硫化合物的利用情况和柴油脱硫前后烃组分比较都进一步证明该菌株适合于柴油生物脱硫。利用休止细胞对不同组分柴油的脱硫研究表明，脱硫菌株Fds1对精制柴油中的DBT类化合物的降解能力强。因此，该菌株对精制低硫柴油的深度脱硫具有应用意义。

摘要:为了构建更为安全有效地抵抗高致病性H5亚型禽流感病毒的基因工程疫苗，将H5亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因定向插入鸡痘病毒转移载体p11S中，H5A和NA基因的启动子分别为PS和PE/L，获得用不同的启动子启动不同的外源基因且两基因盒方向为背向串联的重组转移载体p11SH5ANA。将p11SH5ANA转染至已感染鸡痘病毒282E4疫苗株(wtFPV)的鸡胚成纤维细胞(CEF)中。p11SH5ANA与wtFPV基因组DNA之间的同源重组产生了重组鸡痘病毒rFPV11SH5ANA。通过在含XGal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑，获得纯化的重组病毒。经传代证实该重组病毒具有良好的遗传稳定性。用10.5PFU的rFPV11SH5NA免疫无特定病原体(SPF)鸡，能激发机体产生有效的血凝抑制(HI)抗体。初步的动物试验表明，该重组病毒能使经肌肉注射攻毒的SPF鸡抵抗H5亚型AIV的致死性攻击，保护率为100%，显示出一定的应用前景。

摘要:为了获得具有天然抗病毒活性的重组酵母鸡γ干扰素,以Con A(刀豆素A) 诱导培养4～10h 的鸡全血中提取的淋巴细胞总RNA为模板，通过RTPCR的方法扩增出鸡γ干扰素成熟蛋白基因。通过EcoRⅠ和XbaⅠ两个酶切位点把鸡γ干扰素成熟蛋白基因插入到酵母表达载体pPICZaA上，得到了重组酵母鸡γ干扰素表达载体pPICZaACHIFNγ，经Bstx Ⅰ线性化后的重组载体被转入酵母菌株X33中，通过PCR的方法来筛选重组酵母菌,在甲醇诱导表达后，SDSPAGE结果显示有两株重组菌在诱导72h后其表达上清中有大小为16kDa的目的条带。干扰素生物活性测定经典实验(微量病变抑制实验)和临床初步应用结果皆说明重组酵母鸡γ干扰素具有较强的抗病毒的生物活性和较好的临床使用前景。

摘要:以戊型肝炎病毒（HEV）ORF2重组蛋白p166Us为免疫原制备单克隆抗体（McAbs），采用间接ELISA和免疫印迹法，检测McAbs与不同基因型和亚型HEV重组蛋白p166Bur（Ⅰa型）、p166Pak（Ⅰb型）、p166Mor（Ⅰc型）、p166Mex（Ⅱ型）、p166Us（Ⅲ型）、p166Nz（猪HEV，Ⅲ型）和p166Chn（Ⅳ型）的反应性，采用抗原或抗体竞争ELISA分析p166蛋白与天然HEV颗粒之间抗原表位的关系。结果获得4D3、2E3、11E11、12H5、3A3和1F1 6株稳定分泌McAbs的杂交瘤细胞株。4D3分泌的McAb与7种p166均发生反应，其与免疫原p166Us的结合可被Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ型天然HEV颗粒或病人血清竞争抑制。2E3、11E 11和12H5分泌的McAbs只与p166Us、p166Nz和p166Chn发生反应，它们与p166Us的结合仅能被Ⅲ和IV型病毒或血清所抑制。3A3分泌的McAb只与p166Us及p166Nz结合，1F1分泌的McAb只与p166Us结合，两者均能被Ⅲ型美国株竞争抑制，而Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型不能抑制它们与p166Us的结合。由此可见，不同基因型和亚型HEV ORF2编码蛋白p166上存在多种类型抗原表位，其中包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ基因型共同的，Ⅲ、Ⅳ基因型共有的和第Ⅲ基因型特异的等，这些表位与天然HEV颗粒上的抗原表位具有相同的免疫学特征。

摘要:利用16S rRNA基因RFLP、16S rRNA基因序列分析以及16S23S rRNA IGS PCR RFLP技术对分离自我国南北大豆产区的慢生大豆根瘤菌进行了群体遗传多样性和系统发育研究。16S rRNA 基因PCR RFLP分析以及16S rRNA基因序列分析结果表明：所有供试慢生大豆根瘤菌可分为B. japonicum和B. elkanii两个类群，其中属于B. japonicum的为优势种群，占供试菌株的91%，属于B. elkanii的仅占9%，多样性水平较低。16S23S rRNA IGS PCR RFLP研究结果表明：属于B. japonicum的慢生根瘤菌具有较丰富的遗传多样性，在69%的相似性水平上可分为群Ⅰ和群Ⅱ两大类群。群I的菌株以分离自黑龙江和河北等北部区域的菌株为代表，群Ⅱ的菌株以分离自广西和江苏等南部地域的菌株为代表，反映出明显的地域特征。两群菌株在系统发育上均与USDA6、USDA110和USDA122等B. japonicum的模式或代表菌株有差异。

摘要:在前期数值分类工作的基础上，对7株与Rhizobium关系较密切的分离自西藏部分地区豆科植物Trigonella spp.和Astragalus spp.的根瘤菌所形成的独立表观群，通过DNA同源性测定及16S rDNA全序列分析进行了分类地位的进一步确定。结果表明：该独立表观群菌株的(G+C)mol%为59.5%～63.3%，群内菌株间DNA同源性在74.3%～92.3%之间，中心菌株XZ2.3与相关Rhizobium种之间的DNA同源性在0%～47.4%之间，是不同于Rhizobium内各种的新DNA同源群。另外，16S rDNA全序列分析结果也表明，中心菌株XZ2.3占居Rhizobium系统发育分支中的一个独立亚分支,其与临近R. leguminosarum USDA2370T和R. etli CFN42T之间的序列相似性分别为96.55%和96.62%。根据国际系统细菌学委员会提出的细菌种属分类标准，该独立表观群构成了一个不同于Rhizobium内各种的新种群。该研究结果丰富了现有根瘤菌分类系统，将为国际上现有Rhizobium的14个种中再增添一个新的分类单元。

摘要:以设计合成的A型肉毒毒素表位模拟肽为亲和靶标，对噬菌体随机肽库进行筛选，寻找能与A型肉毒毒素表位模拟肽特异结合并能拮抗毒素毒性效应的分子,通过ELISA鉴定阳性克隆，并对鉴定的阳性克隆进行特异性分析及DNA测序。氨基酸序列同源性分析发现，针对P4、P5表位模拟肽获得了两条特异的结合序列，并通过动物保护实验在噬菌体展示肽水平对特异结合分子的毒素毒性拮抗效应进行了初步研究，初步证明结合肽对A型肉毒毒素有一定的保护作用。

摘要:从弗氏柠檬酸杆菌（Citrobacter freundii）中分离纯化了一种植酸酶并进行了酶学性质研究, 其反应最适pH为4.0～4.5, 最适温度为40℃, 在37℃下以植酸钠为底物的Km值为0.85nmol/L, Vmax为0.53IU/(mg·min), 具有较好的抗胰蛋白酶的能力。酶蛋白的分子量大小约为45kDa, 成熟酶蛋白N端序列为QCAPEGYQLQQVLMM。

摘要:研究液体发酵嗜热毛壳菌（Chaetomium thermophilum）产生的一种外切葡聚糖纤维二糖水解酶的分离纯化及特性。粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAESepharose Fast Flow阴离子层析、Sephacryl S100分子筛层析、Q Sepharose Fast Flow强阴离子层析等步骤后获得凝胶电泳均一的外切葡聚糖纤维二糖水解酶。经12.5% SDSPAGE和凝胶过滤层析方法测得该酶的分子量大小约为66.3kDa和67.1kDa。该酶反应的最适温度和pH值分别为65℃和5.0。在60℃以下酶比较稳定，在70℃酶的半衰期为1h，在80℃下保温20min仍具有20%的活性, 该酶的热稳定性较中温真菌的同类酶高，与国外报道的嗜热真菌的同类酶热稳定性接近。以pNPC为底物的Km值为0.956mmol/L。

摘要:应用PCR定点突变技术把质粒pESOD中人铜锌超氧化物歧化酶基因(hCu,ZnSOD)的Cys111密码子突变为Ala111密码子，再构建重组子，通过随机同源重组将突变后的hCu,ZnSOD整合入聚球藻Synechococcus sp.PCC7942，并实现表达。表达产物用SDSPAGE、Western blot、酶活等方法测定均为阳性反应；热稳定性测定显示，hCu,ZnSOD在80℃保温30min后仍具有95％的活力，耐热能力比天然hCu,ZnSOD有了较大的提高。蛋白扫描结果显示目的蛋白占可溶性蛋白的3.61％。

摘要:用PCR/DGGE技术跟踪一窝5头新生腹泻仔猪自然康复、补饲、断奶过程中粪样细菌区系的演变，构建3头仔猪42日龄粪样的16S rDNA克隆库，分析匹配于DGGE优势谱带23个克隆的16S rDNA序列。结果表明，DGGE图谱由简单（2日龄）到复杂（10日龄），再回复简单（16日龄）到复杂（断奶），最后趋于稳定。２、16日龄DGGE图谱最简单、相似，最优势谱带为大肠杆菌；10日龄（补饲后3天）图谱复杂，大肠杆菌存在但不是最优势谱带，补饲前后图谱的相似性低，补饲导致了粪样细菌区系结构的显著变化；断奶前（27日龄）和后（35、42日龄）图谱复杂，优势谱带、图谱相似性均趋向稳定。序列分析表明，23个克隆中除5个与未知细菌最相似外，其余最相似菌分属于肠球菌（Enterococcus），链球菌（Streptococcus），梭菌（Clostridium），消化链球菌（Peptostreptococcus）和乳酸杆菌（Lactobacillus）。

摘要:研究了外源甜菜碱对恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)DLL1耐盐性的影响并对其渗透保护机制进行了初步的探讨；结果表明培养基中添加甜菜碱可以改善DLL1细胞在高盐培养基中的生长情况，添加150mg/L的甜菜碱可以使DLL1在1.2mol/L NaCl的基础盐培养基中生长，添加10mg/L的甜菜碱就足以显著缩短渗透胁迫条件下DLL1细胞的延滞期和代时，增加生长量；和不添加对照相比，延滞期由24h缩短到6h，代时由60min缩短到35.7min，最大生长量OD610由1.29增长到1.57。在渗透胁迫条件下，细胞从外界快速吸收外源甜菜碱来代替自身相容性溶质的合成。

摘要:猪Ⅱ型圆环病毒（PCV2）是当前严重危害养猪业的重要病原之一。目前，世界上还没有有效疫苗用于该病毒的免疫预防。该研究利用PCR方法，将PCV2的ORF2基因替换猪Ⅰ型圆环病毒（PCV1）的ORF2基因，构建了以PCV1基因组为骨架的嵌合病毒（PCV12）分子克隆(pSK2PCV12)。将该分子克隆转染PK15细胞并连续盲传5代，用RTPCR方法可以在转染后盲传的细胞中检测到PCV1的ORF1 mRNA和PCV2的ORF2 mRNA，但检测不到PCV1的ORF2 mRNA和PCV2 的ORF1 mRNA。间接免疫荧光检测显示在盲传第5代的细胞中有PCV2 ORF2蛋白的表达，表达蛋白主要分布于细胞核。该研究初步证实构建的PCV1.2分子克隆转染细胞后可以形成具有感染性的嵌合病毒，从而为更深入研究嵌合病毒生物学特性奠定了基础。

摘要:采用化学裂解和酶解相结合的方法，选择加入PVPP的高盐缓冲液作为细胞裂解的反应体系，并以PEG8000进行DNA沉淀，从高有机含量的堆肥样品中进行微生物总DNA的提取。结果表明，从4种性质不同的堆肥中均获得了高质量的微生物总DNA，所得的DNA分子片段在23kb左右；每克干重堆肥的总DNA提取量为63.54±12.08μg～106.50±28.36μg，A260/A280大于1.6，A260/A230大于1.8，不用经过纯化可以直接进行PCR扩增和限制性酶切；以该DNA为模板进行微生物区系的DGGE分析，显示了丰富的微生物多样性。该方法减少了通常环境样品DNA提取过程中的纯化步骤，减少了DNA的损失，为从事微生物分子生态学，尤其是那些针对高有机含量以及获取极为不易的环境样品的研究而言是十分有益的。

摘要:瘤胃中栖息着大量的微生物，由于这些微生物组成复杂且有些细菌在体外无法培养，目前对这些微生物的了解仍然很少。现代分子生物学技术的发展为研究瘤胃微生物提供了有效的方法，利用核酸探针、基因序列分析、遗传指纹技术、全细胞杂交和实时定量PCR等技术可以对瘤胃微生物的分类及进化关系、区系结构图、重要酶的表达以及目的微生物的准确定量进行更为深入和透彻的研究。发展和利用这些技术不仅可以研究微生物之间的关系以及微生物与饲料颗粒之间时间与空间的关系，还能直接在细菌自然生长的环境中对其各种特征进行研究。