摘要:采用改进的CAS检测平板从东湖中筛选得到了一株高产铁载体细菌sp-f，并用CAS检测液定量检测其分泌铁载体量，发现其As/Ar仅0.09(OD680)，Su（Siderophore Unit）为90％，达到产铁载体菌最高级。用BIOLOG检测板，结合细菌生理生化反应、形态观察和16S rDNA序列比对分析等分类鉴定方法，确定sp-f为一株荧光假单胞菌。P. fluorescens sp-f生长过程中胞外铁载体的量在对数生长前期累积达到最高后有所减少，至稳定期时菌液中铁载体量达到稳定。在已知铁载体特异吸收峰波长下，用反向高效液相色谱检测无铁环境和高铁环境下培养液上清，比较发现sp-f上清含有3种含儿茶酚胺类基团铁载体，其中包括荧光和非荧光性的脓菌素，200 μmol/L Fe²⁺可完全抑制荧光性质脓菌素的分泌，但非荧光脓菌素的分泌不受抑制，并且对非脓菌素的儿茶酚胺类铁载体的合成分泌反而具有一定的诱导作用。

摘要:从青海盐碱土壤样品中分离到一株兼性嗜碱放线菌YIM 90022, 该菌株的发酵产物具有很强的体外抗胃癌、肺癌、乳腺癌、皮肤癌、肾癌和子宫癌肿瘤细胞株活性。基于16S rRNA基因序列的系统发育分析表明，菌株YIM 90022属于拟诺卡氏属（Nocardiopsis）的成员，与该属的4个有效发表种N.exhalans DSM 44407T ，N.prasina DSM 43845T ，N.metallicus DSM 44598T和N.listeri DSM 40297T系统发育关系最密切，与其分别以98.8%,98.5%,98.4% 和97.8% 的16S rRNA基因核苷酸序列相似性聚为一簇。但菌株YIM 90022不与这4个有效种中任何一个单独相聚，形成了一个独立亚分枝。结合形态特征、生理生化特性、细胞化学分类特征，以及repPCR基因指纹分析等方面的研究结果，菌株YIM 90022可能为拟诺卡氏菌属的一个潜在新种。菌株YIM 90022在大多数培养基上生长良好，气生菌丝和基内菌丝丰富, 在酵母膏麦芽膏琼脂、燕麦片琼脂等培养基中产生可溶性色素。生长pH 范围6.0～12.0, 最适pH 8.5; 能在含0～15% NaCl (W/V) 的培养基上生长。

摘要:采用鸟枪法破译大肠杆菌O23 标准株的O抗原基因簇序列，并用生物信息学的方法进行了基因注释和分析；采用基因缺失和互补的方法鉴定了O23的UDPGlcNAc C4异构酶(Gne)；用同源建模的方法构建了O23 Gne的高级结构并对其活性位点进行了分析；分析了不同血清型大肠杆菌O抗原基因簇中gne基因的多样性；根据O23 O抗原基因簇中的特异基因筛选出了可用于大肠杆菌O23快速检测的特异DNA 序列。

摘要:通过菌落原位杂交和Southern 杂交，从假单胞菌M18基因组文库中克隆了rpoS基因及相邻序列。为了深入研究影响rpoS基因表达的调控因素，运用同源重组技术，将无启动子β半乳糖苷酶基因（′lacZ）插入并融合于rpoS基因中，构建了假单胞菌M18 rpoS基因突变株M18SZ。 Miller法测定显示，突变株M18SZ的β-半乳糖苷酶可高达480U，而野生株检测不到β半乳糖苷酶活性。表明，突变株中的rpoS基因与无启动子β-半乳糖苷酶基因已融合并且表达。在KMB培养基中生长量测定（OD600）的结果表明，突变株与野生株生长存在显著差异。

摘要:利用大肠杆菌质粒pSP72和枯草杆菌质粒pUB18共整合得到双功能克隆载体pSB。在pSB多克隆位点依次引入枯草杆菌果聚糖蔗糖酶基因启动子信号肽序列sacB p.s.、地衣芽孢杆菌淀粉酶基因终止子序列αamy T和短小芽孢杆菌增强子基因degQ，最终构建了双功能枯草杆菌诱导型高效表达分泌载体pSBPTQ。将Vasostatin Ⅰ基因作为靶基因检测sacB p.s.、αamy T和degQ在pSBPTQ进行外源基因表达时的功能，结果表明，在蔗糖诱导下，sacB启动子有效启动了Vasostatin I基因的表达和分泌，αamy T提高了Vasostatin Ⅰ基因的转录效率，而degQ明显增强了Vasostatin Ⅰ基因的表达水平。Vasostatin Ⅰ基因在蔗糖诱导下成功表达并分泌到枯草杆菌细胞外，蛋白质分泌效率达到90%左右。质粒稳定性试验结果表明，经过40个世代之后，质粒pSBPTQ在枯草杆菌DB1342中仍旧保持在83%以上。

摘要:从发病长毛兔中分离鉴定了兔病毒性出血症病毒WHNRH株。参考GenBank中已登录的RHDV毒株序列对RHDV WHNRH分离株进行了全基因组序列测定与分析。设计5对扩增区段相互重叠的RHDV特异性引物，扩增除5′和3′末端以外的序列，采用设计锚引物的5′RACE方法以及针对RHDV 3′末端的polyA结构设计引物获得了RHDV WHNRH株的5′和3′末端序列。胶回收各PCR 产物，连接pMD 18T克隆载体，测得RHDV WHNRH分离株的基因组全长为7437nt（不包括polyA），与GenBank公布的全部共6株RHDV全基因序列进行同源性比较分析，同源性在89.0%～97.1%之间，ORF1同源性为89.0%～97.1%，编码氨基酸序列的同源性为95.2%～98.7%；ORF2的核酸苷序列同源性为92.1%～97.7%，编码氨基酸序列的同源性为94.1%～96.6%。

摘要:海栖热袍菌内切葡聚糖酶Cel12B是极耐热胞外酶，氨基酸序列分析表明不含有纤维素结合结构域（CBD），对结晶纤维素无活性，但同样菌种来源的木聚糖酶XynA有催化结构域和纤维素结合结构城。用同样极耐热酶CBD区域和Cel12B融合构建重组质粒pET20bCel12BCBD，经诱导表达后，对结晶纤维素有活性，酶学特性研究表明：最适反应温度为100℃、最适pH为5.8、在pH4.5～7.0时酶活力稳定，90℃保温2h仍有87％的酶活。

摘要:根据GenBank猪链球菌2型（SS2）报道序列，对江苏分离株SS2H部分测序，发现位于已知毒力基因orf2与mrp之间存在两个新的开放阅读框序列。选取可能含有抗原决定簇肽段对应的核酸序列，该阅读框（2738～3694）编码319个氨基酸残基，分子量为335kDa，与已知任何基因无同源性。通过InterPro、PHD、DNAstar分析阅读框，并定向克隆至pET32α(+)载体中，转化至大肠杆菌BL21，表达出分子量为48kDa的融合蛋白，蛋白免疫转印可被SS2的抗血清识别，具有免疫原性；并且含有IMP dehydrogenase结构域，催化IMP生成XMP；流式细胞仪检测该蛋白可明显影响 Hep2细胞周期。

摘要:考察了蓝光对黑曲霉产糖化酶的影响并采用扫描电镜观察蓝光下黑曲霉形态发育过程，结果表明，与黑暗对照组相比，蓝光处理使菌丝粗壮，孢囊增大，分生孢子发育提前，黑曲霉糖化酶活力增加，孢子发育和产糖化酶的进程有一定的对应性。黑曲霉在黑暗下生长至36h时，经蓝光诱导糖化酶产量提高更为明显，提示了黑曲霉存在一个对蓝光反应产生最适光感应的发育阶段，对于光调节黑曲霉产糖化酶来说，蓝光诱导的光强由弱到强，比持续蓝光培养或采用较高光强诱导效果更好，表明黑曲霉产糖化酶存在一种光适应机制，能够感应和适应光强度变化，调节其自身代谢。从抑制性扣除杂交实验和蓝光光强变化对差异基因表达的分析来看，糖化酶基因以及呼吸链中部分氧化还原酶基因在蓝光诱导下表达皆有增强，蓝光信号转导影响了核基因编码的线粒体呼吸链相关酶基因表达水平，交替氧化酶可能参与了蓝光信号途径，影响了黑曲霉产糖化酶和孢子发育。研究结果可为在现有水平上应用蓝光调节提高糖化酶产量找到新的技术突破口和提供新思路。

摘要:为了解革兰氏阳性中度嗜盐菌适应低渗冲击的机制，采用双向凝胶电泳技术，研究达坂喜盐芽孢杆菌（Halobacillus dabanensis）D-8T在低渗冲击下的差异蛋白表达谱。利用ImagemasterTM 2D Platinum 软件分析到大约650个蛋白点，大多数蛋白分子量分布在17.5～66kDa，等电点为4.0～5.9，偏酸性。在20％盐浓度中生长的D-8菌株受到0％盐浓度的低渗冲击5min及50min后34个蛋白点的表达发生改变，包括20个表达上调的点和14个点表达下调。用MALDITOF/MS及MASCOT软件鉴定了4个与低渗胁迫有关的蛋白，分别为热激蛋白DanK、柱状决定蛋白、青霉素结合蛋白和5莽草酸烯醇式丙酮酸3磷酸合成酶。其中，热激蛋白适应低渗胁迫时表达上调为首次报道。

摘要:利用噬菌体随机十二肽库和金属亲和层析对重金属Ni2+进行结合肽筛选。经4轮生物淘洗、噬菌体扩增和DNA测序，获得一组多肽序列。GenBank Blast分析未发现同源序列，Clustal W多重序列比对也未找到Ni2+金属结合肽结合基序，但可能含有多聚组氨酸（His）2－5。噬菌体单克隆金属离子螯合树脂的亲和力测定和反筛、抑菌解毒试验表明:展示有金属结合肽的噬菌体不仅对Ni2+具有高亲和力，而且对其它金属离子也有作用，Cu2+、Ni2+、Co2+、Zn2+等金属离子对金属结合肽的亲和力显著高于Cd2＋和Cr2＋，展示金属结合肽的噬菌体对重金属Ni2+具有一定的耐受和解毒作用。显微形态学观察也显示金属结合肽与金属螯合树脂的作用。对于了解重金属与多肽的相互作用机理以及环境重金属修复等均具有重要意义和价值。

摘要:以制备的重组志贺毒素B亚单位（StxB）为靶标，利用噬菌体展示亲和淘选技术，经4轮筛选，从随机十二肽库中筛选到与StxB结合的一批噬菌体克隆，对特异结合活性较高的27个噬菌体克隆的表面展示肽进行序列测定，其中A6序列出现16次，A9和A3序列分别出现2次和3次。为评价筛选克隆中和毒素毒性的能力，将展示肽出现频率最高的A6噬菌体克隆，体外与志贺毒素孵育进行动物试验，动物存活率达333%，表明毒素的毒性得到部分抑制，A6短肽可能发展成为志贺毒素的拮抗剂。

摘要:分别以苯、甲苯为碳源，从厦门污水处理厂活性污泥中富集筛选获得了2株苯降解菌B1、B2和2株甲苯降解菌J2、J6。16S rRNA基因鉴定结果表明B1、J2属于假单胞菌属(Pseudomonas sp.)，B2、J6属于不动杆菌属(Acinetobacter sp.)。研究表明，这些菌在pH7～10的碱性范围内能很好生长。在以0.1%(V/V)苯或甲苯为唯一碳源的无机盐培养基中， B1、B2菌在72小时内对苯的降解率分别为67.7%、94.2%， J2、J6菌对甲苯的降解率分别为92.4%、84.8%。简并PCR扩增、序列分析表明，这些菌含有相同的苯双加氧酶基因，表明苯降解基因在这些降解菌中可能存在水平转移。此外，J2，J6两株菌还含有甲苯双加氧酶基因，而且J2能在甲苯浓度为70%(V/V)的LB培养基中生长。这些降解菌在苯、甲苯污染的生物治理中有应用前景。

摘要:从某化工厂排水沟底泥中取样，经2个月的富集驯化得到六氯苯好氧降解菌群。通过测定该微生物菌群在降解六氯苯过程中累积耗氧量、微生物生长曲线及Cl-浓度的变化，证明在好氧条件下该微生物菌群能够以六氯苯为唯一碳源和能源生长。当培养温度为30℃，pH为7.0时，该菌群能在18d内将无机盐培养基中浓度为4.5mg/L的六氯苯降解55%以上，降解速率达到137.5μg/(L·d)。对降解菌群提取总DNA，选择性扩增细菌16S rDNA片段，建立克隆文库。通过限制性内切酶（限制性内切酶HaeⅢ和RsaⅠ）分析，得到9种不同的谱型，其中3种谱型是主要谱型。对主要谱型的克隆子测序，结果表明，它们分别与Alcaligenes 和Azospirillum 菌属相似性最高。该菌群在去除环境中难降解的有机氯污染物方面具有应用前景。

摘要:三唑磷水解酶基因为研究发现的一个新的广谱有机磷水解酶基因，通过PCR从有机磷降解菌株Ochrobactrum sp. Mp4总DNA扩增了tpd，将tpd定向克隆到pBBRMCS5载体上，构建重组质粒pTPD，在辅助质粒pRK2013 的帮助下，通过三亲接合将pTPD转移到模式菌株Pseudomonas putida KT2440中，获得的工程菌Pseudomonas putida KT2440DOP可以降解多种有机磷农药及芳香烃化合物；KT2440DOP的有机磷水解酶活较出发菌株MP4提高了一倍左右,且遗传性状稳定。

摘要:苜蓿是高蛋白的饲料作物，青贮是保存青草过冬的主要手段，但苜蓿是难青贮的作物，添加乳酸菌制剂是解决苜蓿青贮难的有效措施。本研究室通过连续的限制性培养筛选到苜蓿青贮用乳酸菌复合系Al2，用变性梯度凝胶电泳（DGGE）、平板分离及建立16S rDNA 克隆文库3种手段相结合分析Al2的组成多样性，确认Al2复合菌系由7株菌组成，全部属于 Lactobacillus。其中3株菌Al21i，Al22i，Al23i通过平板分离得到，分别属于L. Plantarum（99.9％）、L. kimchii(99.4％) 、L. farciminis(100%)。在Al2复合菌系的16S rDNA克隆文库中，上述7种菌的组成比例分别为55.21%、19.79%、14.58%、3.13%、3.13%、3.13%、1.03%。

摘要:从藏东南原始森林、高山草甸、沼泽、粮田与保护地等不同植被、从2970～4590m不同海拔高度采集土样50份，用多种培养基分离中、低温放线菌，并对放线菌的数量、组成、生理生化特性以及它们的拮抗性等进行了研究。按放线菌的形态学特征进行了鉴定。结果表明：①从藏东南各种土壤中放线菌分离到9个属，其中束丝菌属在国内未见报道。以粮田中放线菌的数量和种类最多。②原始森林中拮抗性放线菌数量最多，提供了从原始森林土壤中可以筛选到更多拮抗性放线菌的重要信息。③抗革兰氏阳性细菌的放线菌菌株数较抗革兰氏阴性细菌的多，拮抗真菌的放线菌菌株数比拮抗细菌的多。④藏东南土壤链霉菌具有许多酶活性。

摘要:以四川采集的芍药和北京采集的三叶草的叶片为材料，经表面消毒程序后，分离出内生放线菌15株。通过表观特征比较和BOXPCR基因指纹图谱分析的方法，将分离出的放线菌归并于12个不同的基因型，其中6个来自芍药，6个来自三叶草。结合16S rRNA基因序列分析可知，分离菌株除C4、C5属于假诺卡氏菌外，其余的13株都是链霉菌；菌株C12与最近模式种的16S rRNA 基因序列相似性较低，为96.6%。对分离菌株的抗菌活性实验表明，有11株在一个或一个以上的测试中呈阳性；其中6株对植物致病菌立枯丝核菌有明显抗性，占阳性菌株的55％。

摘要:提取纯化造纸废水纸浆沉淀物的宏基因组DNA并构建16S rDNA文库，系统发育分析显示该环境中存在大量的未培养细菌且具有种类的多样性。以柯斯质粒为载体构建了1个含10000个克隆的宏基因组文库，文库容量为353×108bp。筛选文库得到2个表达内切葡聚糖酶活性的克隆、3个表达外切葡聚糖酶活性的克隆和2个表达β葡萄糖苷酶活性的克隆。从表达不同活性的克隆中分别挑选活性最强的进行鉴定，得到3个新的纤维素酶基因umcel5L、umcel5M和umbgl3D。umcel5L、umcel5M和umbgl3D分别编码产生内切葡聚糖酶、纤维糊精酶和β葡萄糖苷酶，其编码产物与已报道的纤维素酶一致性最高的分别为43%、48%和46%。这是第一次采用未培养方法对造纸废水纸浆沉淀物中的细菌多样性进行分析并从中克隆纤维素酶基因的报道。

摘要:猪源鼠伤寒沙门氏菌临床分离株17Y，检测其对19种抗生素的耐药性，结果耐14种抗生素。用高温及高浓度SDS处理后，获得对11种抗生素的敏感性，该菌株命名为17S1。PCR检测证明，大部分耐药基因存在于质粒上，包括I型整合子携带耐药基因，且随着质粒的消除而被消除。所鉴定的耐药基因有blaTEM、blaOXA1、cat1、tet(B)、aacC2、aadA8b、dhfrXⅡ和sul1等。喹诺酮类药物的靶基因gyrA与parC位于染色体上。GyrA在耐药决定区第87位氨基酸突变（N78D），导致了喹诺酮类药物的耐药性逆转。敏感菌中扩增不到质粒毒力基因spv与rck。耐药性消除后的菌株17S1对小鼠的毒力降低(LD50增加10倍)，在小鼠体内的增长与 散速度也显著降低 （P<0.05）。以上证据表明，鼠伤寒沙门氏菌的多重耐药性主要由质粒决定，研究开发新型质粒消除剂将对克服鼠伤寒沙门氏菌多重耐药性具有重要意义。

摘要:构建克隆有O型口蹄疫病毒China99株VP1基因的植物双元表达载体pBin438/VP1。通过农杆菌介导法转化番茄子叶，经卡那霉素抗性筛选，获得60株抗性植株。对抗性植株分别做PCR、RTPCR检测目的基因的整合与转录，ELISA筛选约40%的卡那抗性植株阳性，分别提取两株ELISA和Western blot检测阳性的转基因番茄叶片蛋白与弗氏佐剂乳化，于0、15、30d经肌肉途径免疫豚鼠，第三次免疫后28d用100ID50的同源强毒攻击，根据豚鼠抗体水平的消长动态和免疫豚鼠抗强毒攻击的保护率进行转基因植物疫苗免疫原性的评估。结果表明，双元表达载体pBin438/VP1构建正确，PCR、RTPCR结果证实口蹄疫病毒VP1基因已整合到番茄基因组并在转录水平表达，ELISA和Western blot检测重组蛋白能够与FMDV阳性血清反应。转基因番茄第三次免疫豚鼠后21d血清效价最高可达 1∶64，攻毒后两组免疫豚鼠保护率分别达80%和40%，证明转基因番茄表达的VP1蛋白具有良好的免疫原性。

摘要:丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus, HCV）非结构蛋白NS4B的功能仍不很清楚。本实验旨在研究NS4B对干扰素介导的抗病毒反应的影响。建立稳定表达NS4B的细胞系后，用空斑实验研究NS4B在不同浓度的IFN_α下对水泡口炎病毒(VSV)的影响，利用代表2308个信号传导相关的基因的微点阵研究其对细胞基因表达的影响，和流式细胞仪分析IFNGR1的荧光强度。结果显示HCV_NS4B能微弱地抑制IFN_α介导的抗病毒反应，可能原因是HCV_NS4B抑制一些与免疫反应相关的基因的表达，特别是与IFN_γ信号传导有关的基因。因此，NS4B对HCV耐受干扰素治疗起一定的作用。

摘要:为探讨解脲脲原体（Uu）的脂质相关膜蛋白（LAMPs）诱导小鼠巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶（iNOS）的分子机制，从解脲脲原体提取的脂质相关膜蛋白，刺激小鼠巨噬细胞，以RT_PCR、Western blot等方法分析iNOS的表达及NO的产生；用细胞免疫化学、间接免疫荧光及Western blot等方法检测核因子κB（NF_κB）的激活，另外检测了NF_κB的特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）和蛋白酶抑制剂放线菌酮(CHX)对iNOS的表达及NF_κB激活的影响。结果表明，解脲脲原体的 LAMPs通过激活NF_κB诱导小鼠巨噬细胞表达iNOS的mRNA和蛋白，且能以时间和剂量依赖方式刺激小鼠巨噬细胞产生NO，NF_κB的抑制剂PDTC或蛋白酶抑制剂放线菌酮(CHX)，可抑制NF_κB的激活及iNOS的表达。由于解脲脲原体的脂质相关膜蛋白通过激活NF_κB诱导小鼠巨噬细胞表达iNOS和产生NO，因而可能是一个重要的致病因素。

摘要:从SPF鸡血清中分离纯化C3，用戊二醛将其与大肠杆菌抗原连接，免疫注射SPF鸡；对照组鸡免疫注射弗氏完全佐剂大肠杆菌疫苗。分别在免疫后的第2、3、4、5、6、7、8、9周采血，用ELISA方法测定血清中的抗体含量，同时测定血清中总补体活性。结果表明，免疫后3周，弗氏佐剂大肠杆菌疫苗诱导鸡体产生的抗体效价高于C3佐剂疫苗组，但至第4周，弗氏佐剂疫苗组的抗体水平达到高峰（OD值=0.270±0.004），然后迅速下降，到第9周降至0.200±0.005，而C3疫苗组鸡免疫后的抗体水平持续上升，从免疫后第2周的0.098±0.003上升到第8周的0.275±0.002。证明C3能够促进免疫记忆细胞的产生，并能够使细菌抗原给予免疫细胞持续稳定的刺激，从而使鸡体维持高水平抗体的时间延长。研究结果为研制有效的家禽细菌性疫苗提供了理论依据。

摘要:离子注入技术是20世纪80年代兴起的一种综合诱变技术，其应用于生物工程已取得了丰硕成果，但在霉酚酸产生菌的诱变育种中的应用还未见报道。短密青霉菌（Penicillium brevicompactum） M_51是从土壤中分离得到的MPA产生菌F_663经过紫外线、微波等诱变处理得到的。为获得霉酚酸的高产工业菌株，进一步对该菌株进行了离子注入诱变处理。用15keV氮离子分5个剂量进行处理，结果显示，随离子注入剂量增加，存活率呈现较明显的下降_上升_下降的“马鞍型”变化趋势。在剂量为140×2.6×10 13ions／cm2时，菌株变异率及正变率均最高，分别达到88.9％和63.4%。用HPLC定量测定发酵液中霉酚酸的含量，筛选到产霉酚酸能力提高30.1%的突变株M_163。经过连续传代试验，其遗传性状稳定。对发酵条件的优化结果显示最佳种龄为24h；用正交试验方法对发酵培养基中的碳、氮源进行优化，得到较优配方。突变株M_163在最优发酵条件下，霉酚酸摇瓶发酵单位可达2819μg/mL。野生菌株F_663的MPA产量为133μg/mL，经过5代诱变育种及发酵条件优化，产量提高了20.2倍。

摘要:从健康人口腔中分离的寡发酵链球菌(Streptococcus oligofermentans)能够产生大量的过氧化氢，可能具有抑制致病菌的潜力。为了研究该细菌产过氧化氢的特性，检测了其在不同生长时期和从不同底物产过氧化氢的能力。结果表明，寡发酵链球菌从对数生长早期就开始产过氧化氢，在对数生长后期及稳定期过氧化氢产量达到最高，随后下降。在PYG培养基中，寡发酵链球菌所产的过氧化氢主要来源于大豆蛋白胨和酵母提取物；而代谢终产物乳酸也可作为过氧化氢产生的底物。对3种可能与过氧化氢生成有关的氧化酶的酶活测定表明，寡发酵链球菌具有乳酸氧化酶(LOX)及NADH氧化酶(NOX)的活性，说明其过氧化氢的产生主要依赖于这两种酶的活力。

摘要:从嗜水气单胞菌DN322中分离纯化出能够对三苯基甲烷类染料结晶紫、碱性品红、灿烂绿及孔雀绿进行高效脱色的脱色酶，命名为TpmD。在测定TpmD分子量、等电点及对不同三苯基甲烷染料脱色的动力学参数、脱色过程对分子氧及NADH/NADPH具有依赖性的基础上，又进一步从黄素FAD／FMN对酶活力的影响、酶抑制剂、酶蛋白N末端测序及酶溶液的特征吸收光谱等方面对TpmD的酶学本质进行了分析。结果表明，TpmD不含核黄素，其脱色活性也不因加入FAD或FMN而提高。TpmD的N末端氨基酸序列与多种氧化还原酶具有同源性。甲吡酮及维生素C (Vc) 对TpmD的脱色活性具有明显的抑制作用。TpmD酶蛋白的溶液在408nm处有一特征吸收峰，但在连二亚硫酸钠的还原条件下通入CO气体后，该酶却不具有P450酶在450nm处的特征吸收峰。上述结果显示脱色酶TpmD是一种新的氧化酶。

摘要:对地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)高温α淀粉酶 (amyE) 基因进行改造获得的基因突变体(amyEM)，通过PCR 扩增, 将此基因分别克隆至大肠杆菌表达载体pBV220和毕赤酵母表达载体pPIC9K上,并分别转化大肠杆菌DH5α和毕赤酵母GS115感受态细胞，获得重组大肠杆菌和重组毕赤酵母。 通过表达产物的酶活性检测和SDSPAGE分析，证明突变α淀粉酶(AmyEM)在大肠杆菌、毕赤酵母中获得有效表达。对重组大肠杆菌产生的α淀粉酶的粗酶性质分析表明，此酶分子量约为55kDa。其最适反应温度为80℃～90℃，与野生型基因相比，其最适pH均为6.0，但不同的是突变体在pH 5.0～5.5时表现出较高的酶活力；在毕赤酵母细胞的表达产物可分泌至胞外。由于酵母可对蛋白进行糖基化，酶分子量增加到60kDa，最适pH 也改变为5.5。此高温α淀粉酶突变体所具有的在微酸性环境具有较高酶活力的性质，具有重要的潜在工业应用价值。

摘要:以梅毒螺旋体（Treponema pallidum subsppallidum）Nichols菌株基因组DNA为模板，通过PCR扩增梅毒螺旋体47kDa、17kDa 和15kDa 3个膜抗原基因，克隆进毕赤酵母表达载体pPICZ B，构建重组表达载体pTP47、pTP17、pTP15，转化酵母菌株GS115，甲醇诱导表达。表达菌体裂解后通过镍离子亲和层析获得3个抗原与6xHis tag 的融合蛋白，重组蛋白的获得量分别为HisTP15:4.mg/L；HisTP 17:66mg/L；HisTP47:25mg/L，经SDSPAGE鉴定纯度都在96%以上，ELISA 鉴定均具有很好的抗原性。从而首次在毕赤酵母中表达出梅毒螺旋体膜抗原，为梅毒血清学检测方法开辟了新的抗原制备途径。

摘要:在大肠杆菌中高效表达结核分枝杆菌Rv3369蛋白，获得纯化的重组蛋白rRv3369。通过聚合酶链反应 (Polymerase chain reaction，PCR) 扩增Rv3369 基因；以质粒pET28a为表达载体，构建重组质粒，转化大肠杆菌BL21 (DE3)；以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG) 诱导表达目的蛋白，通过SDSPAGE鉴定rRv3369在大肠杆菌中的表达，确定rRv3369在大肠杆菌中的表达形式；采用NiNTA His·Bind Resin来纯化重组蛋白。重组质粒pET28aRv3369中目的基因测序结果与报道序列相同。分子量约19.5kDa，表达量约占菌体总蛋白的18%，纯化后的重组蛋白样品经SDSPAGE和激光密度扫描分析表明其纯度为90%以上，每100mL培养菌可获得1.56mg左右的重组蛋白。用亲和层析法纯化的重组蛋白纯度较好。

摘要:了解伤寒沙门菌野生型与粗糙型菌株的菌体蛋白质组成特点，探讨伤寒沙门菌粗糙型变异的遗传学基础。分离提取伤寒沙门菌野生型与粗糙型菌株的菌体蛋白质，聚丙烯酰胺凝胶双向电泳（2DPAGE）和考马斯亮蓝染色，计算机分析与比较两菌株的蛋白质组成特点及其相关性。伤寒沙门菌野生型与粗糙型具有相似的蛋白质电泳图谱，相似系数为78%。多数蛋白质斑点分布于pH 3.0～6.4之间，并且分子量小于30kDa。两菌株的蛋白质电泳图谱之间的主要差异共计36处，多数差异蛋白质的分子量小于20kDa。伤寒沙门菌粗糙型与野生型菌体蛋白质组成的差异显示，粗糙型变异绝不仅仅是O抗原多糖的缺失，也可发生菌体蛋白质组成的改变与缺失。伤寒沙门菌粗糙型保留了同其亲代野生型菌株一致的绝大多数菌体蛋白质组成，在2DPAGE中形成伤寒沙门菌特征性的基本蛋白质图谱，有助于对粗糙型菌株进行蛋白质分子同源性与变异性的分析与鉴别。

摘要:利用特异性引物从组织病料中提取的鸡传染性贫血病毒核酸经PCR扩增得到VP2基因，BamHⅠ和SalⅠ双酶切处理，纯化后，克隆至BamHⅠ和SalⅠ双酶切处理的表达载体pET28a中，构建了原核表达质粒 pET28VP2。将pET28VP2 转化至感受态E.coli BL21（DE3）中，经IPTG 诱导和SDSPAGE 分析，可见约31kDa的目的蛋白以可溶性形式表达于上清中。Western blot 分析发现，表达产物与鸡传染性贫血的阳性血清发生特异性反应。纯化蛋白免疫小鼠后制得的多抗可以与全病毒发生反应，证明其具有免疫原性，为进一步研究VP2 蛋白的功能及开展CIAV疫苗及诊断试剂的研制奠定了基础。

摘要:硝化作用是自然界氮素循环的一个重要环节。除了传统上的自养硝化细菌以外，至今为止已发现许多异养微生物可以进行硝化作用。异养硝化已成为环境领域的热点问题。简要的介绍了自然界中的异养硝化微生物的分布以及针对其生物多样性而建立的探测和分离方法。着重从异养硝化的关键酶，相关基因，电子传递及代谢途径这几个方面综述了异养硝化机理的研究进展。最后总结了目前在研究异养硝化机理过程中存在的问题，并对其今后进一步的研究方向做出了展望。

摘要:红树林土壤生境的独特性决定了其中微生物的多样性及其资源的珍稀性，对于红树林土壤微生物的研究正在成为热点。然而由于传统研究方法等因素的限制， 至今人们对红树林土壤微生物的系统了解仍较为有限。近年来，基于16S rRNA, 18S rRNA基因的各种分子微生物学技术的迅速发展，红树林土壤微生物的研究亦面临着崭新的局面。文中主要从红树林土壤微生物物种的多样性、生理生化类型的多样性及其在治理污染环境、生物修复作用中的可能性、有效性等方面阐述了红树林土壤微生物的研究进展，并以更合理、有效地开发利用红树林土壤微生物资源为目标，展望了21世纪，以新理念、新技术、新方法进行红树林土壤微生物研究及资源开发的巨大前景。

摘要:无论是免疫细胞对病原体的主动吞噬，还是病原体诱导非吞噬细胞的被动吞噬，均是不同细胞膜受体介导的细胞肌动蛋白骨架重排过程，受到单体G蛋白和肌动蛋白骨架相关蛋白的精密调控。细胞内重要信号蛋白，磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D（PLD）的活性变化与细胞肌动蛋白骨架重排密切相关，其参与调节了由抗体受体（FcγR）及补体受体（CR3）介导的免疫细胞的主动吞噬，而细胞肌动蛋白骨架解聚蛋白cofilin被磷酸化后可与PLD结合并激活PLD，进而调节肌动蛋白骨架重排。另一方面，cofilin磷酸化状态严格调控李斯特菌感染细胞过程中的肌动蛋白骨架重排。因此，阐明PLD是否在李斯特菌感染细胞过程中被激活并参与调节肌动蛋白骨架重排，将有助于揭示PLD激活对感染发生的调控作用，对透彻理解细菌感染宿主细胞的分子机制具有重要意义。

摘要:布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的一种重要的人兽共患病。布氏杆菌具有宿主广泛、传染性强以及感染后根治困难等特点，对畜牧业和人类健康均构成严重威胁，疫苗免疫是预防和控制布氏杆菌病的主要措施。迄今国内外已有多个弱毒活疫苗在使用，但均存在一定的缺陷，因此研究更理想的疫苗一直是控制布氏杆菌病的重点。目前除了常规诱变筛选新的弱毒株外，人们正通过基因工程技术构建重组弱毒疫苗、DNA疫苗以及亚单位疫苗。本文简述了布氏杆菌病疫苗的应用及新型疫苗的研究现状。