摘要:

摘要:摘要：铜是生物体中必需的微量元素之一，作为多种氧化酶的辅助因子参与不同的生物反应，对于维持生命活动起到重要的作用。但在过量的情况下，无论是一价铜离子还是二价铜离子对于生物体都具有很强的细胞毒性，因此铜的代谢是受细胞严格调控的。以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)为模式生物对铜代谢的研究已取得了很大进展,对其它高等生物体内铜代谢及其重要生理功能提供了重要信息。本文对酿酒酵母中铜离子的吸收、转运以及在细胞内的代谢调控的新进展进行了归纳，并结合自己的研究综述了真菌铜代谢调节的共性与差异。

摘要:摘要：副溶血弧菌是一种嗜盐性革兰氏阴性短杆菌，主要引起食物中毒性肠胃炎，还可引起水生动物疾病。除了耐热直接溶血毒素和耐热直接溶血相关毒素外，近年发现的副溶血弧菌两套Ⅲ型分泌系统也与该菌的致病性密切相关。Ⅲ型分泌系统1位于染色体1上，主要贡献对宿主细胞的细胞毒性，介导宿主细胞的自体吞噬作用，最后导致细胞死亡。Ⅲ型分泌系统2位于位于染色体2的毒力岛上，具有肠毒性。本文扼要介绍副溶血弧菌Ⅲ型分泌系统的组成、功能及相关转录调控机制。

摘要:摘要: 群体感应是指微生物群体某些基因的表达受到与群体密度相关的信号分子调控的现象。微生物以酰基高丝氨酸内酯化合物，某些短肽分子，呋喃酮类化合物，以及一些小分子物质为信号分子,介导不同的群体感应系统。各群体感应系统之间以平行协同或层次串连的方式组织起来调控微生物各种基因。众多病原菌致病基因的表达与群体感应密切相关，主要表现在：群体感应帮助微生物对宿主的侵袭和定殖；调控毒力因子的产生和作用于宿主；以及介导病原菌对宿主的免疫能力和药物抗性。进行群体感应对微生物致病过程调控的研究，将有利于从群体感应入手进行病原菌防控新策略的探索。

摘要:摘要：【目的】本文旨在尝试改进分离培养方法从大连海域繁茂膜海绵中筛选稀有放线菌，并对其多样性进行研究。【方法】根据繁茂膜海绵元素组成配制微量元素溶液，加入到放线菌分离培养基中，同时将部分培养基稀释成寡营养培养基，结合富集培养法，对繁茂膜海绵中放线菌进行分离培养。采用16S rDNA的限制性片断长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism, RFLP)分析和序列分析，揭示其多样性。【结果】共获得可培养放线菌59株，通过形态、颜色观察，将其归为27个类群。RFLP分析表现为15种不同的图谱类型。16S rDNA序列分析表明：它们分别属于放线菌的10个属，其中布劳氏菌属（Prauseria）和糖单胞菌属（Saccharomonospora）是首次报道从海绵中分离培养。【结论】改进的分离培养基适合于繁茂膜海绵中稀有放线菌的分离培养，进一步揭示了该海绵中丰富的稀有放线菌，同样的方法有可能应用于其他海绵放线菌的分离培养。

摘要:摘要:【目的】矿区优势植物可培养细菌生物多样性研究将有助于了解植物根际细菌与矿物,植物根系相互作用及对矿物风化和土壤形成的重要影响。【方法】采用纯培养法分离南京小龙山废钾矿区野生植物野塘蒿,千金子和栽培植物甘薯根内与根周围土壤的可培养细菌, 通过16S rDNA限制性酶切多态性分析(amplified rDNA restriction analysis, ARDRA)和16S rDNA序列分析研究了可培养细菌的多样性。【结果】分离纯化到60株具不同菌落形态的可培养细菌, 在60%相似水平上可分为18个OTU. 19株代表菌株分别属于3个门, 10个科, 11个属。多数菌株属于变形菌门(α-proteobacteria, 4株, 21.1%; β-proteobacteria, 2株, 10.5%; γ-proteobacteria, 6株, 31.6%)。假单胞菌属(Pseudomonas), 泛菌属(Pantoea)和根瘤菌属(Rhizobium)为优势种群。【结论】小龙山废矿区优势植物根围具有丰富的微生物种群多样性。

摘要:摘要：【目的】为了阐明水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzae, 简称Xoo)转录调控因子OxyRxoo对过氧化氢(H2O2) 降解途径的调控作用。【方法】本研究对推导的H2O2识别调控基因oxyRxoo进行了基因克隆、序列分析、缺失突变和互补试验及其相关表型的鉴定。【结果】克隆的oxyRxoo基因序列与其它几种病原黄单胞菌的同源序列高度保守。OxyRxoo是LysR家族成员之一，具有PBPb结构域和DNA结合保守结构域(HTH)。用标记交换法构建了△oxyRxoo基因缺失突变体。与野生型菌株PXO99A相比，尽管△oxyRxoo在离体培养条件下的生长无明显变化，但H2O2抗性显著地降低，过氧化物酶(CAT)活性明显下降，基因互补可以使之恢复； 过氧化物酶基因表达下调， oxyRxoo自身表达显著上调。【结论】OxyRxoo作为一个重要转录调控因子，调控了Xoo的 H2O2降解途径。

摘要:摘要：【目的】继杂交瘤技术后，重组抗体技术是新一代的抗体制备技术。然而如何用原核系统中较多地表达具有生物活性的单链抗体，避免包涵体形成仍是一个需要探讨的问题。【方法】将目的基因scFv-H4克隆到载体pET22b上，分别转入大肠杆菌BL21（DE3）和Origami（DE3）中，通过改变诱导温度和IPTG浓度，比较具有生物活性的蛋白量以及包涵体的量。【结果】在BL21（DE3）中，pET22b能产生大量表达scFv-H4，而BL21(DE3) 的含有trxA和gor双突变的衍生菌Origami（DE3）表达的scFv-H4的总量较少，但是具有生物活性的蛋白量较多（35 mg/L培养物），具有生物活性的蛋白比例也较BL21（DE3）高。另外IPTG的浓度对scFv-H4表达没有显著影响，而较高的诱导温度会促使表达的蛋白形成包涵体。【结论】在较低的温度下，pET22b能在Origami（DE3）能较好地表达具有生物活性的scFv-H4，减少包涵体的比例，为后续的抗体性质研究和改造奠定了基础。

摘要:摘要：【目的】鉴定一株对番茄溃疡病病原菌—密执安棒形杆菌密执安亚种(Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis,Cmm)具有强拮抗作用的放线菌菌株Z-L-22，并分析其代谢产物，为开发新的生物活性物质奠定基础。【方法】根据菌株Z-L-22的形态特征、培养特征、生理生化特征、细胞壁组分和16S rDNA序列对菌株Z-L-22的进行了鉴定。通过薄层层析、纸层析和特征性鉴别试验对活性物质进行分离、回收和鉴定。并利用抗生素合成基因保守区域设计的引物用对基因组DNA进行PCR扩增。【结果】菌株Z-L-22属于链霉菌属，各特征与西唐链霉菌(Streptomyces setonii)相似。获得了2个主要活性成分，均为放线菌素类抗生素。利用放线菌素类抗生素合成酶保守引物在该菌基因组中扩增到770 bp的相关基因片段。【结论】活性菌株Z-L-22鉴定为西唐链霉菌，命名为西唐链霉菌Z-L-22。该菌产生的抗生活性物质为放线菌素类抗生素，本研究为开发该菌株奠定基础。

摘要:摘要：【目的】对海洋Agarivorans albus QM38菌株所产琼胶酶的纯化工艺和酶学性质进行了研究。【方法】发酵液通过离心、(NH4 ) 2SO4盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow 阴离子交换层析、Sephacry S-100 凝胶过滤等纯化步骤得到SDS-PAGE电泳级纯酶，并用质谱对酶的降解产物进行分析。【结果】得到琼胶酶A，纯化倍数为17.6倍，收率为15.21 %，SDS-PAGE测定其分子量为127.8 kDa。对琼胶酶A进行了进一步的性质分析，其最适反应温度为35 ℃，最适反应pH为7.6，最适底物浓度为0.9 %，多数金属离子为其活性抑制剂。琼胶酶A的降解产物经质谱分析主要为四糖和六糖。【结论】从菌株QM38的发酵液中纯化得到的琼胶酶A具有降解凝胶态琼胶的能力，其分子量与以往报道过的琼胶酶不同。

摘要:摘要：【目的】为了分析大西洋洋中脊深海海水及表层沉积物中多环芳烃(PAHs)降解菌群中的优势菌。【方法】采用富集培养法和平板涂布法从深海样品中分离可培养细菌及PAHs降解菌。通过16S rRNA基因测序完成系统发育分析。采用变性梯度凝胶电泳（DGGE）及DNA测序分析降解菌群中的优势菌。【结果】总共分离到16株细菌，包括一株PAHs降解菌Novosphingobium sp. 4D。系统发育分析发现，可培养细菌中两个最大的类群分别与Alcanivorax dieselolei NO1A（5/16）和Tistrella mobilis TISTR 1108T（5/16）亲缘关系最近。DGGE结果表明，在菌群MC2D中菌株4L（以及4M、4N， Alcanivorax dieselolei NO1A， 99.21％）、4D（Novosphingobium pentaromativorans US6-1T，97.07％）和4B（以及4E、4H、4K，Tistrella mobilis TISTR 1108T，＞99％）是降解菌群中的优势菌。而降解菌群MC3CO中的优势菌是菌株5C（以及5H，Alcanivorax dieselolei NO1A，＞99％）、条带5-8代表的未培养菌株（Novosphingobium aromaticivorans DSM 12444T，99.41%）、5J（Tistrella mobilis TISTR 1108T，99.52％）和5F（以及5G，Thalassospira lucentensis DSM 14000T，＜97％）。【结论】本研究发现在大西洋洋中脊深海海水及表层沉积物中Alcanivorax、Novosphingobium、Thalassospira、Tistrella属的细菌是PAHs降解菌群中的优势菌，其中的主要降解菌是Novosphingobium属的细菌。

摘要:摘要 【目的】获得炭团菌液体培养菌液中高效抑制樟子松枯梢病菌的活性物质。【方法】炭团菌液体培养菌液中活性物质的提取采用水提和酯提2种方式。水提方式采用直接提取法和超声波提取法2种方法，酯提方式选择正丁醇、乙酸乙酯、乙醇3种萃取剂。各提取物对病原菌的抑菌活性研究选用菌丝生长抑制率和孢子萌发抑制率2个指标，对病原菌菌丝生长的抑制测定采用生长速率法，对病原菌孢子萌发的抑制试验采用悬滴法。炭团菌液体培养菌液乙酸乙酯提取物稳定性的研究选用紫外线、温度、pH值、氧化剂与还原剂以及贮存时间5个因子。乙酸乙酯提取物中抑菌活性成分的分离采用柱层析、纯化采用薄层层析、结构鉴定采用紫外光谱（UV）、红外光谱（IR）、气质联用（GC-MS）和核磁共振（NMR）等分析测试技术。【结果】炭团菌液体培养菌液5种提取物对樟子松枯梢病菌均有一定的抑菌活性，其中乙酸乙酯提取物对病原菌菌丝生长的抑制率最高，达到73.20%；乙酸乙酯提取物、超声波提取物、正丁醇提取物对病原菌孢子萌发抑制率均超过90%。乙酸乙酯提取物对自然环境下的紫外线、温度具有很高的稳定性，并且具有一定的抗氧化还原能力和良好的耐热性，长期贮存不影响其抑菌活性。乙酸乙酯提取物中有3个组分，组分I的抑菌率最高（72.94%）。组分I含3种化合物，其中得率最高（57.952%）的为对甲氧基肉桂酸甲酯，化学式为C11H12O3。其他两种化合物为邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸二异丁酯。本研究首次发现上述3种化合物的天然存在。【结论】炭团菌液体培养菌液乙酸乙酯提取物对樟子松枯梢病菌具有较高的抑菌活性，在自然环境下具有很高的稳定性，具有很高的开发价值和应用前景，其主要抑菌活性成分为对甲氧基肉桂酸甲酯。对甲氧基肉桂酸甲酯作为医药中间体主要用于化妆品中，作紫外防护吸收剂；邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸二异丁酯均是聚氯乙烯最常用的增塑剂。上述3种化合物天然存在的发现，对于医药工业和化学工业具有极为重要的意义。

摘要:摘要：【目的】从广西大学辐射中心辐射源附近被常年辐射的水样中分离并鉴定出新的耐辐射菌株，并对其耐辐射特性进行研究。【方法】通过GBM培养基分离培养得到一株新的耐辐射菌株，命名为WGR700T。应用生理生化试验，脂肪酸含量，(G+C) mol％含量测定以及16S rRNA序列同源性分析等方法对菌株进行鉴定，同时对WGR700T的耐辐射特性进行分析。【结果】菌株WGR700T为革兰氏阴性，杆状，没有鞭毛，不能运动，厌氧并能产生红色素。最佳生长温度和PH分别为37℃和pH7.0，主要的呼吸醌是MK-8，细胞壁内还有鸟氨酸，主要脂肪酸为16:1ω7c, 16:0, 15:1ω6c, iso-15:0和 iso-17:0。G+C含量为64.7mol%。菌株WGR700T具有很强的UV(>728 J/m2)和电离辐射抗性(D10 = 9.8 kGy)。菌株WGR700T和奇异球菌属（Deinococcus）内其它菌种16S rRNA有很高的相似性（87.1-95.6%）。【结论】根据16S rRNA及生理生化特征区别，菌株WGR700T应是奇异球菌属的一个新种，命名为Deinococcus guangxiensis sp. nov. 模式菌株为WGR700T(= CGMCC1.7045T =CICC 10360T = JCM 15082T)。

摘要:摘要：【目的】为获得降解多菌灵的微生物菌株，并用其制备生物修复剂，修复被污染的土壤。【方法】从耐药性木霉菌株诱变选育过程中,得到一株能降解多菌灵的变异菌株T2-2。该菌株在多菌灵浓度100 mg/L无机盐培养基中, 于25℃、200 r/min振荡培养取样，用HPLC-MS检测代谢产物；以玉米秸秆粉为原料经固体发酵制成T2-2生物修复剂；采用土壤人工接种,在T2-2菌剂接种量为107cfu/g干土、多菌灵含量为0.1 mg/g干土时进行灭菌土和自然土壤的修复试验；另外，还做了T2-2菌剂对黄瓜枯萎病的活体防效试验。【结果】处理2 d的培养液，HPLC-MS检测出代谢产物为：2-氨基苯并咪唑，苯并咪唑和2-氨基苯腈，处理5 d的培养液经检测未发现多菌灵和代谢产物；土壤修复试验中，灭菌土壤中的多菌灵接种6 d被完全降解，而自然土壤中的多菌灵被完全降解缩短到4 d。说明秸秆粉作为共代谢底物，促进了T2-2和土著微生物的共代谢降解作用；另外，T2-2菌剂对黄瓜枯萎病的活体防治效果达到81.7%，优于化学农药。【结论】木霉T2-2菌株即可降解土壤中的多菌灵，又可防治植物病害。

摘要:摘要：【目的】香鱼弧菌病对中国沿海地区的香鱼养殖业造成了巨大的危害，然而，病原不明导致了防治上的许多问题。本文鉴定了引起宁海地区香鱼爆发性弧菌病的病原。【方法】采用TCBS平板分离优势菌；采用回归感染试验确认病原菌，采用改进的寇氏法计算LD50；采用形态学观察、生理生化特征测定、细菌特异性引物PCR扩增检测及细菌16S rRNA和金属蛋白酶（MP）基因序列分析鉴定细菌；采用药敏实验测定它对部分抗生素的敏感性。【结果】分离并鉴定优势菌株ayu-H080701为宁海地区香鱼弧菌病的病原菌，它对香鱼的半致死量为1.2×104 CFU。形态学观察和生理生化特征测定表明，ayu-H080701与鳗利斯顿氏菌最为接近。PCR扩增检测表明，细菌16S rRNA 基因通用引物和鳗利斯顿氏菌MP基因特异引物均能扩增到预期大小的特异性条带。ayu-H080701与鳗利斯顿氏菌16S rRNA基因核苷酸序列同源性最高，为99.4%～99.5%，与同属的海弧菌和美人鱼发光杆菌分别为94.3%和91.9%；ayu-H080701与鳗利斯顿氏菌MP氨基酸序列同源性高达97.6%～98.8 %，与其它弧菌科成员则低于75.6 %，系统进化树分析也揭示ayu-H080701与鳗利斯顿氏菌进化相关性最高。【结论】引起宁海地区香鱼弧菌病的菌株ayu-H080701被鉴定为鳗利斯顿氏菌。

摘要:摘要：【目的】为了探索治疗急性乙型肝炎和爆发性乙型肝的新策略，本研究将HBV DNA疫苗和相应抗原的蛋白质分子联合免疫小鼠，旨在探讨联合免疫对小鼠抗原特异性T细胞增殖反应的影响。【方法】我们将HBV DNA疫苗（pcDS2）和相应抗原蛋白质分子(HBsAg)联合免疫BALB/c小鼠；分别在第0、2和4周进行免疫，在第6周用ELISA方法检测抗-HBs IgG效价，MTT和流式细胞仪检测T细胞增殖反应，及流式细胞仪检测细胞因子表达水平。【结果】pcDS2和HBsAg联合免疫组小鼠的抗-HBs水平显著提高；免疫小鼠的T细胞体外经HBsAg刺激后, 联合免疫组刺激指数(SI)明显降低；经流式细胞仪检测进一步证实联合免疫组T细胞增殖反应被显著抑制；联合免疫组T细胞表达IL-10和Foxp3水平显著升高。【结论】pcDS2和HBsAg联合免疫能诱导产生特异性体液免疫应答，但不能诱导产生抗原特异性T细胞增殖反应；T细胞增殖反应被显著抑制可能与T细胞表达IL-10和Foxp3上调有关；本研究为急性乙型肝炎和爆发性乙型肝炎治疗及HBV疫苗的研究奠定了基础。

摘要:摘要：【目的】构建含有RGD受体结合位点口蹄疫病毒（FMDV）Asia1/JS/China/2005株的全长感染性cDNA克隆。【方法】采用定点突变方法，构建Asia1型FMDV含有预期突变的全长cDNA克隆pFMDV-RGD。pFMDV-RGD重组质粒经NotI线化后，与表达T7 RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞，进行FMDV-RGD病毒拯救。【结果】序列测定结果表明成功构建了FMDV含有RGD受体位点的Asia1/JS/China/2005全长cDNA克隆。共转染实验获得拯救病毒，对拯救的病毒分别进行序列测定、间接免疫荧光、电子显微镜观察和乳鼠致病性分析，表明成功拯救了含有RGD受体结合位点的Asia1/JS/China/2005株FMDV。【结论】该实验为进一步研究含有RGD和RDD受体结合位点2个拯救病毒生物学特性的差异奠定了基础。

摘要:摘要：【目的】建立狂犬病毒的反向遗传系统，为研制不含狂犬病病毒致病性的新型安全高效的狂犬疫苗提供技术依据。【方法】本研究采用反向遗传学方法和分子克隆技术，建立了狂犬病病毒Evelyn- Rokitnicki-Abelseth (ERA)疫苗株的CMV/ T7、T7启动子病毒拯救系统，构建了表达N、P、L蛋白的辅助质粒。【结果】成功拯救出野生型病毒rERA-VC，在Vero细胞上的生长动力学特性与父母本ERA 相同，第三代可在Vero细胞上可获得很高的生长滴度。【结论】建立了狂犬病病毒的反向遗传系统，拯救出的野生型病毒生物学特性与父母本相同。

摘要:摘要：【目的】了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在抗体选择压作用下的遗传变异。【方法】将制备疫苗用的LG1株H9N2亚型AIV分别接种含有母源抗体鸡胚(A组)和不含有母源抗体的SPF鸡胚(B组)，并连续传代。其中A组再分为4 个独立的传代系列A1-4，B组再分为2 个独立传代系列B1-2。在每个传代系列，分别对第10，20，30，40，50 代病毒的HA基因进行扩增克隆测序，并与原始病毒的序列比较。【结果】LG1株H9N2在没有抗体的鸡胚的传代过程中，仅发生少数碱基的不稳定随机变异，且多为无义突变。在2 个传代系列的10 个代次病毒，共出现了29 个位点变异，有义突变(NS)与无义突变(S)比值NS/S为1.42 。但在有抗体的鸡胚的传代过程中，发生了多个呈现稳定遗传的有义突变。在4 个传代系列的20 个代次病毒，共出现了45 个位点变异，有义突变(NS)与无义突变(S)比值NS/S为3.46。【结论】在鸡胚传代过程中母源抗体提供的免疫选择压确实能影响H9N2的HA基因的变异。同时表明，带有母源抗体的鸡胚是实验室条件下研究免疫选择压对病毒抗原性变异影响的一种有效的实验模型。

摘要:摘要：【目的】为了更好的了解水泡性口炎病毒（VSV）感染后引起细胞炎性反应特别是炎性细胞因子的反应，探讨宿主-病毒之间的作用关系。【方法】我们运用荧光定量PCR技术，测定和分析VSV感染IPEC-J2细胞引起的病毒RNA量的变化和细胞因子IL-2、6、8、10、12、IFN-α、 IFN -γ、TNF-α、TGF-β和TLR3分泌水平。【结果】我们发现，VSV感染后引起IPEC-J2细胞分泌IL-6、8、12、TNF-α和TLR3显著增加，TGF-β无显著差异；IPEC-J2细胞不分泌IL-2、IL-10、IFN-α和IFN –γ。【结论】水泡性口炎病毒感染可引起IPEC-J2细胞炎性分子分泌增加。

摘要:摘要: 【目的】简化cDNA末端快速扩增技术（Rapid amplification of cDNA ends, RACE）流程，测定基因III、VIb和VIId型新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）基因组两侧末端序列，并对NDV的leader和trailer进行分析。【方法】利用T4 RNA连接酶将特定寡聚核苷酸片段的连接于病毒基因组RNA和cDNA，再利用RT-PCR或PCR方法对病毒基因组的末端进行快速的扩增。【结果】建立一套操作简单、低成本、可重复性高的RACE方法，测定了三种基因型5株NDV 3’末端leader和5’末端trailer序列比对分析。【结论】本实验测定的鹅源VII型毒株JS/7/05/Ch基因组的15,184 nt由一个T变为了C，5’端trailer与3’端leader的连续互补序列由8 nt变为12 nt，而其它4株基因III型和VI型NDV均未发现该突变。通过RNA的二级结构分析，NDV基因组和反向基因组RNA的3’末端形成一个发卡结构。JS/7/05/Ch等3株NDV U→C（T→C）的突变位于发卡环上，不影响二级结构的形成，发卡环的RNA序列突变为3’-UCUC-5’，与基因组3’端发卡环的3’-UCUUA-5’相似，推测可能影响了基因组RNA的复制速度。

摘要:摘要：【目的】获得谷氨酸棒杆菌10147基因组中具有启动子活性片段的结构序列，为构建表达载体做准备。【方法】利用启动子探测载体pAKC6，采用鸟枪法克隆经过限制性内切酶Sau3A I完全酶切的谷氨酸棒杆菌10147染色体DNA片段，并测定pAKC6上报告基因编码的氯霉素乙酰转移酶（CAT）的比活力，以筛选有启动子功能的片段。【结果】共克隆到30个具有启动子功能的片段。其中有三个插入片段起动的氯霉素乙酰转移酶比活力大于24 U/mg，插入片段F57起动的CAT比活力为32.50 U/mg；而插入有启动子Ptrc的阳性对照的CAT比活力为26.33 U/mg。【结论】获得三个DNA插入片段具有与已知启动子Ptrc相当的启动活性，这些片段可以用于构建谷氨酸棒杆菌表达载体。