• 2010年第50卷第4期文章目次
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    • >学科先贤
    • 抗感染免疫学研究的先驱——林飞卿

      2010, 50(4).

      摘要 (912) HTML (0) PDF 416.16 K (953) 评论 (0) 收藏

      摘要:

    • >小型综述
    • 氨氧化古菌的生态学研究进展

      2010, 50(4):431-437.

      摘要 (2469) HTML (0) PDF 574.85 K (2369) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:上百年来细菌一直被认为是地球氨氧化过程的主要驱动者,2005年海洋中分离到迄今唯一的非极端环境泉古菌,发现其氧化氨态氮获得能源生长,是氨氧化古菌。氨氧化古菌和细菌对地球氨氧化过程的相对贡献率,是目前全球氮循环研究最重要的微生物生态学问题之一。已有的证据表明古菌在海洋氨氧化过程中发挥了重要作用,细菌则是土壤氨氧化过程的主要驱动者。本文重点探讨了原位自然环境下氨氧化古菌的生态学研究进展。

    • 微生物生态系统代谢网络研究进展

      2010, 50(4):438-443.

      摘要 (1503) HTML (0) PDF 633.08 K (1689) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:微生物生态系统代谢网络是自然生态系统中微生物遗传分子发挥功能作用的主要形式。本文通过全面介绍微生物生态系统代谢网络的特点及其研究的重要意义,综述了基于共培养技术、免培养高通量技术和计算生物学模拟技术的微生物生态系统代谢网络研究进展和所取得的主要发现,以及近年来快速发展的微生物生态系统代谢网络研究技术和方法体系。在此基础上,提出目前微生物生态系统代谢网络研究中存在的主要问题和重点研究方向,并对其在环境污染治理和资源化利用方面的应用潜力进行了展望。

    • 芳香聚酮后修饰氧化酶

      2010, 50(4):444-451.

      摘要 (1522) HTML (0) PDF 1.60 M (1371) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:氧化酶在芳香聚酮生物合成后修饰中普遍存在并对终产物的结构产生关键影响。本文简要总结了芳香聚酮后修饰氧化酶中几类最常见的氧化酶的结构和功能,并以杰多霉素生物合成途径中的后修饰氧化酶为例,阐明这些氧化酶在后修饰反应中发生作用的方式。并对后修饰氧化酶在组合生物学中的应用做了展望。

    • >遗传和分子生物学
    • 小葱植物内生链霉菌线型质粒pYY8L的端粒与复制区的克隆和鉴定

      2010, 50(4):452-458.

      摘要 (1079) HTML (0) PDF 1.04 M (1348) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:从小葱植物中分离到一株编号为36R-2-1B的链霉菌菌株,该菌株含有一个约为280 kb的线型质粒pYY8L。【目的】克隆、测序和分析pYY8L新的端粒和复制区。【方法】采用改良的“在凝胶中进行DNA碱处理与酶切”的方法来克隆大的线型质粒pYY8L的端粒,通过构建基因组柯斯文库和次级克隆的方法来缩小和鉴定pYY8L的复制区。【结果】在小葱植物内生链霉菌36R-2-1B中检测到约为280 kb的线型质粒pYY8L,克隆了pYY8L的端粒。其末端的152 bp包含6个小的回文序列,可以形成复杂的二级结构

    • 结核分枝杆菌H37有毒株与无毒株的代谢相关基因pabB和lpdA启动子活性分析

      2010, 50(4):459-464.

      摘要 (1756) HTML (0) PDF 1.34 M (1682) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:【目的】通过分析结核分枝杆菌无毒株 H37Ra 的全基因组序列,并与 H37Rv 基因组序列比较,发现 pabB 和 lpdA 预测的启动子区发生了突变。我们利用报告基因,确认启动子突变与其基因转录水平的关系,探索结核分枝杆菌 H37Ra 毒力丧失的内在原因。【方法】利用生物信息学方法预测这两对基因的启动子区,采用 PCR 技术克隆这两对基因的启动子,与分枝杆菌启动子探针载体 pMC210 相连,DNA测序证实连接片段正确后,用电穿孔法将重组质粒转化至耻垢分枝杆菌 mc2155。利用 Quantit

    • 杆状病毒AcMNPV p48基因在昆虫细胞中的表达

      2010, 50(4):465-471.

      摘要 (1033) HTML (0) PDF 2.92 M (1253) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:【目的】p48(ac103)基因在昆虫杆状病毒中高度保守,暗示其具有重要的生物学功能。为了研究该基因的功能,我们首先对该基因的表达特征进行描述。【方法】以杆状病毒代表种——苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus, AcMNPV)的p48基因为研究对象,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达载体系统分别构建了在P48蛋白N-端和C-端融合HA-标签,并且携带绿色荧光蛋白基因和多角体蛋白基因的重组Bacmid。将

    • >生理和代谢
    • 基于活性和基因从海洋微生物中筛选烯二炔类抗生素

      2010, 50(4):472-477.

      摘要 (1477) HTML (0) PDF 1.60 M (1544) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:【目的】高质量的海洋微生物菌种库及其天然产物库是新药开发的重要来源。在本研究中我们通过筛选新的烯二炔类抗生素来对已经构建的海洋微生物天然产物库进行质量评价。【方法】首先我们根据烯二炔类抗生素能引起DNA断裂的活性构建了活性筛选模型,并对我们的天然产物库进行筛选;其次根据合成烯二炔核心结构的独特且保守的重复I型聚酮合成酶设计了引物,通过PCR扩增的方法对海洋微生物库进行序列筛选。【结果】通过活性筛选从我们的海洋微生物天然产物库中获得一个阳性的发酵产物。对该阳性菌(LS481)的系统发育学分析表明该菌属

    • 交互保护对干酪乳杆菌ATCC 393TM存活的影响

      2010, 50(4):478-484.

      摘要 (1326) HTML (0) PDF 2.05 M (1341) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:【目的】以干酪乳杆菌典型株ATCC 393TM (Lactobacillus casei ATCC? 393TM) 为实验菌株,研究其在多重胁迫环境下的交互保护应答机制。【方法】比较不同亚适应条件(热、H2O2、酸、胆盐)处理后菌体细胞在热致死条件(>60oC)及氧致死条件H2O2 (>5 mmol/L)下的存活率变化,并集中考察了最佳亚适应条件-酸适应的不同处理方式对细胞交互保护存活率、胞内pH以及脂肪酸含量的影响。【结果】交互保护对干酪乳杆菌ATCC 393生理活性的影响因亚适应及致死条件而异:

    • 厌氧氨氧化菌富集培养物对羟胺的转化研究

      2010, 50(4):485-492.

      摘要 (1254) HTML (0) PDF 960.05 K (1528) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:【目的】羟胺是厌氧氨氧化的重要中间产物,本研究旨在探明厌氧氨氧化菌对羟胺的转化特性。【方法】采用厌氧氨氧化菌富集培养物,以羟胺和亚硝酸盐为基质进行分批培养试验,检测反应液中基质和产物的消涨情况。【结果】不接种厌氧氨氧化富集培养物时,羟胺和亚硝酸盐具有化学稳定性,彼此不发生化学反应;接种厌氧氨氧化富集培养物后,羟胺和亚硝酸盐发生化学反应;反应过程中有中间产物氨的产生和转化,最大氨氮积累浓度为0.338 mmol/L;液相中总氮浓度从起始的4.694 mmol/L降至结束时的0.812 mmol/L,转

    • >酶和蛋白质
    • 莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因的克隆与表达分析

      2010, 50(4):493-499.

      摘要 (1324) HTML (0) PDF 2.79 M (1569) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:【目的】为揭示昆虫病原真菌分泌的几丁质酶对宿主感染致病时的作用,对莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因进行了克隆与表达,并检测了表达产物的活性。【方法】采用CTAB法提取菌体DNA,设计特异性引物,多次PCR扩增克隆莱氏野村菌Cq菌株几丁质酶基因全序列,并克隆基因的ORF片段chit1,与载体pPIC9K相连接,构建表达载体pPIC9K-Chit1,转入毕赤酵母感受态细胞中,然后通过1.5 mg/L浓度的G418筛选及PCR验证,将阳性转化子进行诱导培养,对发酵液分别进行酶活性测定试验、几丁质酶透明圈验证

    • 固氮红细菌(Rhodobacter azotoforman)色素蛋白复合体的分离纯化与特性

      2010, 50(4):500-505.

      摘要 (1134) HTML (0) PDF 1.24 M (1469) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要: 【目的】为揭示不产氧光合细菌产氢菌株色素蛋白复合体(PPC)色素组成和含量与光合放氢的关系奠定基础。【方法】以PPC特征光谱为检测指标,采用硫酸铵分级分离、DEAE-纤维素层析、吸收光谱和SDS-PAGE等方法进行了固氮红细菌(Rhodobacter azotoformans, R. azotoformans)R7产氢菌株PPC的分离纯化、纯度分析和鉴定;采用表面增强激光解吸电离离子飞行时间质谱、HPLC-MS和荧光光谱法对其中一种PPC进行了组成分析和能量传递活性测定。【结果】从R7菌株获得了3

    • 重组IL-18BP拮抗重组鸡IL-18刺激外周血单核细胞产生IFN-γ的作用

      2010, 50(4):506-511.

      摘要 (885) HTML (0) PDF 954.65 K (1258) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:【目的】白细胞介素-18通过激活Th1细胞和NK细胞产生IFN-γ而发挥关键的免疫调节作用。人和小鼠分泌的白细胞介素-18结合蛋白(IL-18BP)可以拮抗其活性。推测在鸡痘病毒基因组中也含有IL-18BP基因的同源物,对其表达的蛋白质进行了活性鉴定,为拮抗IL-18主导的疾病提供理论依据。【方法】 根据鸡痘疫苗病毒的基因组序列设计特异性引物,使用PCR方法从中分离cIL-18BP基因,将该基因克隆到酵母表达载体pPICZαA中,甲醇诱导后在酵母GS115中进行表达。对表达的重组蛋白进行了活性鉴定。

    • >侵染和免疫
    • 缺失ORF73或ORF214基因对重组鸡痘病毒免疫应答的影响

      2010, 50(4):512-516.

      摘要 (1155) HTML (0) PDF 566.72 K (1393) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:【目的】 旨在研究鸡痘病毒ORF73和ORF214编码蛋白是否具有IL-18结合蛋白的功能,以及ORF73或ORF214基因缺失后对重组病毒诱导免疫应答的影响。【方法】 以缺失ORF73或ORF214基因并表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-△73LRH5A、rFPVLP-△214LRH5A)作为研究对象,以未缺失ORF73或ORF214基因而表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-12LSH5A)作为对照,检测重组病毒体外诱导SPF鸡脾细胞和外周血淋巴细胞产

    • 淋球菌porB和大肠杆菌ltB融合基因的构建、表达及其免疫活性

      2010, 50(4):517-523.

      摘要 (1311) HTML (0) PDF 1.32 M (1557) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:【目的】构建融合基因原核表达载体pET-30a/ltB-porB,并表达重组融合蛋白LTB- PorB,鼻饲途径免疫雌性BALB/c小鼠,分析重组融合蛋白的免疫活性,为研制抗淋病蛋白疫苗提供实验依据。【方法】构建大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)与淋球菌外膜孔蛋白B(PorB)融合基因及LTB、PorB单基因pET-30a原核表达载体,在大肠杆菌BL21中表达重组蛋白;鼻饲途径免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫水平。【结果】在大肠杆菌BL21中获得高效表达的重组蛋白;经鼻饲免疫小鼠

    • >技术与方法
    • 大豆疫霉菌一个DNA指纹分析重复序列探针的鉴定

      2010, 50(4):524-529.

      摘要 (1192) HTML (0) PDF 1.36 M (1639) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:【目的】大豆疫霉菌指纹分析的建立和黑龙江与新疆大豆疫霉菌群体的群体遗传分析。【方法】利用生物信息学方法寻找大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)的中度重复序列,并对黑龙江和新疆大豆疫霉菌进行DNA指纹分析。【结果】分析得到一个中度重复序列,定名为PS1227。Southern blot 分析表明PS1227在大豆疫霉菌基因组中约有34条可辨的介于1.5?23 kb之间的杂交条带,其中21个杂交条带在49个供试菌系中表现多态性。单游动孢子分析表明PS1227指纹特征在病菌无性生殖阶段表现稳

    • >研究简报
    • 醉马草内生菌的分离、鉴定及杀虫研究

      2010, 50(4):530-536.

      摘要 (1360) HTML (0) PDF 934.86 K (1835) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:【目的】探明醉马草内生菌的种类,筛选对农作物虫害有毒杀作用的菌株。【方法】采用研磨法从健康醉马草植物的根、茎、叶和种子中进行菌种分离;通过对其形态、培养特征、生理生化及其他生物学特性的研究;16S rDNA及ITS序列的系统发育学分析进行鉴定;用玻片浸渍法和喷雾法筛选产杀虫活性物质菌株。【结果】获得细菌89株,分别属于枯草芽孢杆菌属(Bacillus)、链霉菌属(Streptomyces)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、叶杆菌属(Phyllobacterium)、鞘脂单胞菌属(Sph

    • 角蛋白酶生产菌株的分离筛选与鉴定

      2010, 50(4):537-541.

      摘要 (1573) HTML (0) PDF 983.33 K (1330) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:【目的】分离筛选具有高效脱毛能力的野生角蛋白酶生产菌株,开发无硫制革生物脱毛剂。【方法】以贮备原料皮的特定环境中的污水样品为菌株源、在含诱导物脱脂羊毛粉的培养基中的富集、筛选与评估其发酵液脱毛能力的多相筛选方法分离选育高产角蛋白酶野生菌株。通过形态学、生理生化特征,Biolog全自动分析以及16S rDNA基因序列分析等方法多尺度地鉴定目的菌株。【结果】定向筛选得到了一株高活力,无硫脱毛效率高的菌株。鉴定结果表明,该菌株为地衣芽孢杆菌属,故命名为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniform

    • 溃烂症眼斑拟石首鱼分离的灿烂弧菌的鉴定

      2010, 50(4):542-547.

      摘要 (952) HTML (0) PDF 1.29 M (1452) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:【目的】从患溃烂症的眼斑拟石首鱼分离到优势菌株M-1,并进一步对该菌的系统发育学进行了分析。【方法】采用形态学、生理生化鉴定,结合16S rRNA和HSP60基因序列分析。【结果】16S rRNA基因同源性分析,菌株M-1与灿烂弧菌(AJ874361、AY046955)聚为一群;HSP60基因(groES)序列分析表明M-1与弧菌(EU653883、AY837440)聚为一个分支。【结论】菌株M-1属于灿烂弧菌(Vibrio splendidus)。

    • 副溶血性弧菌全基因组DNA芯片的研制和芯片质量的评价

      2010, 50(4):548-553.

      摘要 (1237) HTML (0) PDF 3.87 M (1337) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要 目的 研制副溶血性弧菌全基因组芯片,建立芯片杂交方法,并对芯片质量进行评价。方法 利用副溶血性弧菌全基因组序列,挑选出4770条基因,PCR扩增各基因并将PCR产物纯化,点样制备芯片;设计了两个质控杂交组合,采用双色荧光杂交策略,对芯片质量进行评价;PCR方法验证部分芯片结果。结果 芯片杂交与理论预期结果以及PCR验证结果完全一致。结论 成功的研制了一批质量良好的副溶血性弧菌全基因组DNA芯片,并建立了基于DNA芯片的副溶血性弧菌比较基因组学技术平台,建立了一套系统的芯片数据分析的标准方法。

    • 幽门螺杆菌Lpp20-IL2核酸疫苗免疫活性

      2010, 50(4):554-559.

      摘要 (1237) HTML (0) PDF 1.51 M (1640) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要:【目的】观察pcDNA3.1(+)/Lpp20-IL2免疫C57BL/6小鼠后所产生的体液免疫和细胞免疫应答水平,为研制高效、新型的幽门螺杆菌核酸疫苗提供实验依据。【方法】构建pcDNA3.1(+)/Lpp20-IL2重组载体,并转染HeLa细胞,用Western-blot观察鉴定其在真核细胞得到表达后免疫C57BL/6小鼠, ELISA间接法测定小鼠血清中抗Lpp20 IgG抗体水平,ELISA双抗体夹心法检测脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL4水平,MTT比色法检测脾淋巴细胞增殖反应,免疫荧光

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