摘要:摘要：聚酮是一类结构和生物活性多样的天然产物，根据结构特点可以分为芳香聚酮和复合聚酮两大类。芳香聚酮环化酶是芳香聚酮生物合成过程中一种非常重要的早期后修饰酶，是决定芳香聚酮骨架结构的主要影响因素。根据序列和结构的相似性，芳香聚酮环化酶可以分为不同的种类。本文主要对其中3类芳香聚酮环化酶结构和功能进行了简要总结，从晶体结构、催化反应和催化机制等方面对它们进行了分类描述和功能分析，并结合自己实验室工作介绍了杰多霉素B环化酶催化机制的研究方法。

摘要:摘要：【目的】了解新疆玛纳斯热气泉土壤免培养细菌群落组成及多样性。【方法】采用免培养法直接从土壤样品中提取总DNA，利用细菌通用引物对土壤总DNA进行16S rDNA扩增，构建细菌16S rDNA文库。使用Hae III限制性内切酶对阳性克隆进行限制性片段长度多态性分析(restriction fragment length polymorphism, RFLP)，挑选具有不同酶切图谱的克隆进行测序、比对并构建16S rDNA 系统发育树。【结果】从土壤细菌16S rDNA文库中随机挑选了170 个阳性克隆，共得到29个不同的分类单元(operational taxonomic unit,OTU)。系统发育分析归为6个门：酸杆菌门(Acidobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和浮霉菌门(Planctomycetes)。其中厚壁菌门(Firmicutes)为绝对优势类群，占整个细菌文库的71%。29个OTUs中有14条序列与GenBank中相关序列的相似性低于97%(序列长度约1.5 kb)，占序列总数的48%。【结论】热气泉土壤细菌种群多样性较低，但存在大量潜在细菌新种。

摘要:摘要:【目的】了解新疆沙湾冷泉沉积物的古菌组成及多样性。【方法】采用免培养法，液氮研磨提取冷泉沉积物总DNA，使用古菌通用引物进行16S rRNA 基因扩增，构建16S rRNA 基因文库。对阳性克隆进行Hha I限制性酶切分型，选出具有不同酶切图谱的序列进行测序，将所得序列与GenBank数据库中序列比对并构建16S rRNA 基因系统发育树。【结果】从冷泉沉积物古菌16S rRNA 基因文库中随机挑选了121个阳性克隆，共得到22个不同的可操作分类单元，BLAST结果表明全部克隆子归属于泉古菌门(Crenarchaeote)中免培养类群。系统发育分析归类为Soil-Freshwater-subsurface group和Marine group I，2个亚群并且各占整个文库的50%。其中40%左右的克隆子与具有无机碳和硝酸盐同化能力的泉古菌有高的相似性。此外还发现40%的克隆子与低温泉古菌类群具有很高的相似性。【结论】新疆沙湾冷泉沉积物中古菌类群多样性较低，但存有大量高度适应此低温、贫营养环境的泉古菌类群。

摘要:摘要：【目的】从植物根部土壤中分离到一株高效溶磷真菌Z32，进行了分类学鉴定和土壤定殖与溶磷特性的初步研究。为溶磷微生物的应用提供新的菌株。【方法】通过形态特征、培养特征和ITS rDNA序列分析方法进行菌株鉴定。通过菌株Z32在土豆液体培养基培养过程中培养液pH的变化确定溶磷菌株的溶磷能力。利用菌株土培试验，进行菌株的土壤定殖和土壤中不同形态无机磷转化试验。【结果】菌株Z32鉴定为棘孢青霉菌（Penicillium aculeatum）。菌株Z32能在4 d内完全溶解固体培养基中的磷酸三钙，18 h内将土豆液体培养基的pH值从7.0降低到1.5左右。菌株Z32在20℃时的定殖效果最好，21 d时，菌数达到起始的9.83倍，而且能够保持到49 d不消亡。在20℃时，添加菌株Z32的土培实验在21 d时，土壤中Ca8H2(PO4)6?5H2O、AlPO4和FePO4等难溶无机磷向可溶性的CaHPO4转化，CaHPO4含量增加了58.83%。49 d时，土壤中的Ca8H2(PO4)6?5H2O、AlPO4和和FePO4被转化后，没有随着微生物的减少而完全被固定。【结论】筛选到一株新的溶磷菌株Z32在土壤中很好定殖，能够转化土壤中多种形态的难溶无机磷为可溶性的CaHPO4，显著增加土壤中CaHPO4的含量。同时阻滞了Ca8H2(PO4)6?5H2O、AlPO4和和FePO4等难溶无机磷的固定。

摘要:摘要：【目的】分离好氧氯苯降解菌，并通过研究降解特性为应用提供理论依据。【方法】利用富集培养技术分离菌株，通过形态、生理生化反应特征及16S rRNA基因序列分析鉴定菌株，测定培养液中氯苯、其它氯苯类化合物和氯离子的浓度以及菌体细胞的密度和菌体细胞粗提液中邻苯二酚双加氧酶的活性，研究菌株的降解特性。【结果】16S rRNA基因序列相似性比较表明，分离出的菌株与乙酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus）的相似性高达98.5％。以初始浓度为50 mg/L的氯苯为唯一碳源和能源时，120 h内菌株对氯苯的降解率高达98.2％，氯离子净释放量和氯苯降解量的摩尔比范围为1:1.85－1:1.39，菌体细胞粗提液中邻苯二酚1,2-双加氧酶的平均活性为0.538 U/mg蛋白质。加入葡萄糖后，菌体细胞数量和氯离子浓度明显增加，但单位细胞的氯苯降解能力明显下降。在二氯苯和三氯苯共存时，菌株对氯苯的降解能力受到明显的抑制作用，但对二氯苯有一定的降解作用，降解能力大小顺序为：1,3-二氯苯>1,2-二氯苯>1,4-二氯苯。【结论】分离出的好氧氯苯降解菌属于Acinetobacter 属菌株，该菌株对氯苯和二氯苯均具有降解作用，可能通过邻位裂环途径降解氯苯，氯苯对菌株的降解能力和邻苯二酚1,2-双加氧酶的活性具有明显的增强作用。

摘要:摘要：【目的】通过构建26 S蛋白酶体的三个亚基RPN4、RPN7、RPN10的缺失突变菌株，研究这些缺失突变体的表型，进而探究这三个亚基在蛋白酶体中的作用。【方法】采用同源重组基因敲除技术、电转化、粗糙脉胞菌杂交、子囊孢子萌发及PCR鉴定等方法分别获得三个调节亚基的基因缺失突变体。利用racetube和平板生长法进行突变体表型检测。【结果】得到rpn4和rpn10的缺失突变纯合体及rpn7缺失突变异核体菌株。【结论】与野生型相比， rpn7KO （ku70RIP背景）突变体的菌丝生长及产生分生孢子的能力显著减弱；rpn4KO突变体在生长初期的菌丝生长缓慢，而后期的产孢能力与野生型无显著差异； rpn10KO突变菌株的表型介于上述两种突变体的表型之间。这些结果表明26 S蛋白酶体的这三个亚基对脉胞菌的生长和发育至关重要。

摘要:摘要：【目的】从本实验室分离的Bt4菌株中克隆cry9Ea基因，并研究其表达和杀虫活性。【方法】以PCR-RFLP方法鉴定Bt4菌株含有cry9基因，然后以菌株Bt4的质粒为模板，利用全长引物F9EA /R9EA 进行PCR扩增全长基因。【结果】将目的片段插入到表达载体pET21b，得到大肠杆菌重组表达质粒pETcry9Ea。转化E. coli BL21(DE3)，诱导后表达130 kDa的蛋白，再将cry9Ea7基因连接到穿梭载体pSXY422b，电激转化HD73-(cry-)，得到工程菌BioHD9Ea7，提取Cry9Ea7晶体蛋白，并进行生物活性测定。生物活性测定结果显示Cry9Ea7蛋白对粉纹夜蛾（Trichoplusia ni）初孵幼虫具有高毒力，LC50为0.044 μg/ml，而对甜菜夜蛾（Spodoptera exigua）和棉铃虫（Helicoverpa armigera）初孵幼虫未显示活性。【结论】克隆和表达了一个对粉纹夜蛾高毒力的基因cry9Ea7，并成功构建了工程菌BioHD9Ea7。

摘要:摘要：【目的】体外测定双歧杆菌的黏附能力并对其表面性质进行分析。【方法】利用Caco-2细胞作为黏附模型体外测定七株菌的黏附能力，同时分析其自动聚集能力和表面疏水性，通过采用不同酶及化学物质处理双歧杆菌菌体细胞表面初步确定双歧杆菌细胞表面黏附相关化合物的类型，并对双歧杆菌表面蛋白进行电泳分析。【结果】自动聚集能力和表面疏水性均高的双歧杆菌菌株，其黏附能力高于自动聚集能力和表面疏水性均低的菌株，表现出明显的正相关。此外，受试菌株的黏附能力对蛋白酶和高碘酸钠敏感，利用LiCl对菌体表面蛋白进行提取后，其黏附能力明显下降，SDS-PAGE结果表明LiCl提取物中含有分子量大小不等的多个蛋白。【结论】双歧杆菌体外对Caco-2细胞的黏附具有菌株特异性，其黏附能力与表面疏水性质和自动聚集能力相关，此外，推测双歧杆菌表面可能含有能调节其黏附的糖蛋白类物质。

摘要:摘要：【目的】构建带有苏云金芽孢杆菌cry3a基因非芽孢依赖启动子和绿色荧光蛋白基因gfp（Green Fluorescent Protein）的原核表达载体，并转化从桑粒肩天牛幼虫肠道分离的两株常驻细菌短短芽孢杆菌CQUBb和苏云金芽孢杆菌CQUBt，以检测cry3a启动子在昆虫肠道常驻菌中的启动子活性，获得GFP标记菌株，为常驻菌在昆虫幼虫肠道中的定殖情况和杀虫工程菌的构建奠定基础。【方法】采用重叠延伸PCR将cry3a基因启动子和gfp基因进行融合，并与pHT304载体连接构建重组质粒pHT3AG，获得的重组质粒以电脉冲转化肠道常驻菌短短芽孢杆菌CQUBb和苏云金芽孢杆菌CQUBt，于可见光和荧光显微镜下观察荧光并通过SDS-PAGE分析重组菌株的蛋白表达情况，然后对重组菌株进行生长动力学分析和稳定性测试。【结果】重组菌在营养期大量组成型表达GFP，经电泳分离在凝胶上出现约29 kDa的特异蛋白条带；重组菌生长曲线与出发菌没有显著差异，说明外源质粒未对宿主菌的生长带来明显不利影响；抗性条件下传代30 次后两菌株外源质粒稳定性仍可达95%、67%；两个菌株比较，CQUBb比CQUBt质粒转化率高、重组菌GFP表达时间长、表达量大，并且重组菌株稳定性好。【结论】成功地将cry3a基因核心启动子和gfp基因转入桑粒肩天牛幼虫肠道常驻菌，实现了该启动子在Bt之外的菌株中发挥作用，构建了两个GFP标记菌株；重组基因工程菌株表达量大，稳定性好，可以用作昆虫肠道内微生态研究和芽孢杆菌表达系统以及杀虫菌株的构建。

摘要:摘要： 【目的】 研究嗜压微生物中蛋白质在不同结构区域的特点对了解其稳定的结构基础及设计新型嗜压酶具有重要意义。【方法】利用43对嗜压和非嗜压同源蛋白的晶体结构信息，将氨基酸所处结构分成3种：分子表面、中间区及内核区，统计了不同结构状态中氨基酸的差异。【结果】统计分析结果表明，嗜压蛋白具有明显的溶剂可及性结构特点：其分子表面Cys、Asp、Asn和Lys含量显著高于非嗜压蛋白，而Pro和Arg则相反；中间区域Ile、Met含量显著高，而Trp则相反；内核区Cys、Ile含量显著高，而Ala则相反。同时，非嗜压氨基酸在嗜压蛋白分子表面及内核区含量均显著高于非嗜压蛋白。【结论】嗜压和非嗜压蛋白在分子表面差异最为明显，将是改造嗜压酶的首选区域；同时，需要统计更多的样本，对氨基酸压力不对称指数进行修订。

摘要:摘要：【目的】利用乳酸乳球菌nisin诱导基因表达系统（the NIsin Controlled gene Expression system，NICE）表达牛凝乳酶原。【方法】从克隆载体pS19-PPC中获得牛凝乳酶原基因，将该基因与表达载体pNZ8148连接并电转化乳酸乳球菌NZ9000，转化子经酶切、PCR和测序鉴定后，用nisin进行诱导表达，表达产物利用SDS-PAGE和Western blot鉴定，表达产物纯化后检测凝乳活性。【结果】重组牛凝乳酶原与天然牛凝乳酶原比较，其分子量大小、免疫性质、生物活性和抑制剂敏感性没有发现显著差异，其凝乳活性可达2×103 IMCU/mL。【结论】在乳酸乳球菌中表达了具有凝乳活性的牛凝乳酶原，同时乳酸乳球菌作为发酵剂和凝乳酶产生菌双重角色的实现，为奶酪加工提供了新思路和新方法。

摘要:摘要：【目的】筛选具有不对称拆分消旋酮基布洛芬氯乙酯能力的脂肪酶基因，构建其表达分泌型工程菌，并进一步提高该脂肪酶的立体选择性。【方法】以自筛选出的一株具有不对称拆分消旋酮基布洛芬氯乙酯能力的菌株NK13为材料，通过构建其基因组文库，筛选具有不对称拆分消旋酮基布洛芬氯乙酯能力的脂肪酶基因。通过构建该脂肪酶基因的分泌型诱导表达载体pHY300-plk-sacR-gene，将其转入枯草芽孢杆菌WB600，获得基因重组菌WB600(pHY300-plk-sacR-gene)。用SDS-PAGE检测其表达和转化情况，采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法纯化脂肪酶；并利用TLC和HPLC检测该酶的立体选择专一性。【结果】得到了具有专一性拆分获得(S)-酮基布洛芬能力、长度为633 bp的脂肪酶基因（GenBank登录号为：EU381317）。该脂肪酶在枯草芽孢杆菌WB600中得到了分泌表达。TLC和HPLC检测结果显示，纯化的脂肪酶对底物转化40 h时转化率为30%， 生成(S)-酮基布洛芬的e.e.%值最高，达60.02%，与未加Tween-80的枯草芽孢杆菌转化子体系相同。而在含Tween-80的环境下，枯草芽孢杆菌表达重组菌对底物转化36 h时转化率约为45%，生成(S)-酮基布洛芬的e.e.%值最高，达93.64%，是野生菌NK13的16倍。【结论】从NK13号菌株中筛选得到的新的脂肪酶具有很高的不对称拆分获得（S）-酮基布洛芬的能力， 实现了NK13菌中633 bp脂肪酶基因在枯草芽孢杆菌中的分泌表达，研究证明Tween-80能提高该脂肪酶的拆分专一性。

摘要:摘要：【目的】白叶枯病和稻瘟病是最主要的水稻病害，Xa21是水稻白叶枯病抗性基因，Pi-d2是稻瘟病抗性基因，二者都编码类受体激酶蛋白质。本研究旨在毕赤酵母系统中表达XA21和PI-D2激酶蛋白质。 【方法】用Xa21和Pi-d2的激酶区PCR产物，构建了pPICZαA-Xa21K、pPICZαA-Pi-d2K重组质粒，酶切及测序验证后，将重组质粒线性化，转化到毕赤酵母菌株中，系统地比较了不同酵母菌株（KM71、GS115、X33），不同甲醇浓度（1%、2%、3%），不同pH(pH5、pH6、pH7、pH8)值，不同诱导时间（24 h、48 h、72 h）条件下激酶蛋白质的表达情况。【结果】XA21和PI-D2激酶蛋白质可以在毕赤酵母中表达，但表达的蛋白质不能分泌到培养基上清中，而只能在菌体中检测到，对表达条件的系统比较发现，毕赤酵母菌株KM71和X33、2%的甲醇诱导浓度、pH5和48 h以上的诱导时间有利于激酶蛋白质的表达，最后我们在酵母裂解物上清中获得了纯化的考染可见的激酶蛋白质。【结论】在毕赤酵母中表达了XA21和PI-D2激酶蛋白质，为下一步生化特性研究奠定了基础。

摘要:摘要：【目的】不同风化程度钾长石表面矿物分解细菌生物多样性研究将有助于了解矿物生物风化、生物成矿和土壤形成的演化规律和机理。【方法】采用纯培养法自南平钾矿区高、中、低风化度钾长石以及矿区土壤样品中分离矿物分解细菌，通过摇瓶释硅实验比较不同菌株分解矿物能力，采用16S rDNA限制性酶切多态性分析（Amplified rDNA Restriction Analysis，ARDRA）研究了供试菌株的遗传多样性。【结果】分离筛选到35株生长良好的矿物分解细菌，与对照相比，接菌处理发酵液中有效硅增加了101~206％；所有供试菌株可分为11个OTU，分别属于5个门，6个科，7个属。多数菌株（74％）属于γ-变形杆菌纲（γ-Proteobacteria）。泛菌属（Pantoea），沙雷氏菌属（Serratia），假单胞菌属（Pseudomonas）为优势种群。【结论】南平钾矿区矿物分解细菌具有丰富的微生物种群多样性，且γ-变形杆菌纲（γ-Proteobacteria）细菌在钾长石风化过程中可能起了重要的作用。

摘要:摘要： 【目的】研究359株在2007-2008年分离于陕西部分地区零售畜禽肉中沙门氏菌的血清型和基因型，为确保食品安全提供依据。【方法】使用WHO指定的泰国S&A公司的沙门氏菌诊断血清，采用玻片凝集法测定沙门氏菌的血清型。使用美国疾病预防控制中心推荐的脉冲场凝胶电泳方法确定沙门氏菌的DNA酶切图谱，BioNumerics软件分析电泳结果，确定沙门氏菌的基因型。【结果】359株沙门氏菌共检出24个血清型，以肠炎沙门氏菌（Salmonella Enteritidis）、鼠伤寒沙门氏菌（S. Typhimurium）、舒卜拉沙门氏菌（S. Shubra）、印第安纳沙门氏菌（S. Indiana）和德尔卑沙门氏菌（S. Derby）等为主，不常见血清型有圣保罗沙门氏菌（Salmonella Saintpaul）、里地乌沙门氏菌（S. Rideau）、田纳西沙门氏菌（S. Tennessee）、汤卜逊沙门氏菌（S. Thompson）、加里玛沙门氏菌（S. Galiema）、卡罗尔沙门氏菌（S. Kallo）、沙门氏菌Ⅲa （S. Ⅲa）、罗森沙门氏菌（S. Rissen）和布兰卡斯特沙门氏菌（S. Brancaster）等。鸡肉中最常见血清型为肠炎沙门氏菌，猪肉和羊肉中以德尔卑沙门氏菌检出率最高，而牛肉中以里地乌沙门氏菌为主。359株沙门氏菌使用XbaⅠ酶切分型后，按照88%的基因同源性，可分为7个大簇。同一血清型的沙门氏菌分型后基本位于同一大簇之中，虽然部分沙门氏菌的血清型不同，但分型后仍表现出较高的基因同源性和相似的基因型。【结论】陕西零售肉沙门氏菌的血清型和基因型表现为多样性的特征。

摘要:摘要：【目的】建立家兔盲肠结扎模型，研究炭疽杆菌在家兔体内外不同培养条件下的蛋白表达差异。【方法】本实验通过进行家兔盲肠结扎模型对炭疽杆菌进行体内外培养，用不同方法提取胞外蛋白、细胞壁蛋白及全菌体蛋白，并经双向电泳分离和质谱鉴定。【结果】送检144个蛋白点，检出124个，其中包括上清蛋白19个，细胞壁蛋白29个，全菌体蛋白76个。【结论】经分析发现，与合成代谢相关的蛋白在体内主要呈下调趋势，包括多种氨基酰－tRNA合成酶、长链脂肪酸CoA连接酶等；在体内表达上调的蛋白则具有多种功能，其中包括分子伴侣DnaK、超氧化物歧化酶SodA、 S-层蛋白等。

摘要:摘要: 【目的】提高抗对硫磷抗体的亲和力以提高酶联免疫检测的灵敏度。【方法】本研究通过抗对硫磷单链抗体基因和核心链霉亲和素基因片段的拼接重组，获得抗对硫磷单链抗体-核心链霉亲和素融合基因（scfv-sa），并将该融合基因（scfv-sa）插入到表达载体pET28a(+)中，转化大肠杆菌BL21（DE3）进行原核表达，制备融合蛋白。SDS-PAGE和Western blot鉴定scfv-sa的表达，Ni+-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白，并用ELISA方法测定该融合抗体的亲和力。【结果】结果表明，在大肠杆菌BL21（DE3）中该融合基因能表达出分子量约为46kD的融合蛋白，形成了四价结构域-四价聚合抗体。ELISA测定结果表明该抗体能与对硫磷特异结合，抗体效价在1:1×106以上，亲和常数为4.25×107 L /mol。 【结论】制备的抗对硫磷四价聚合抗体能与抗原特异结合，与单克隆抗体相比，抗原结合位点显著增加，ELISA检测灵敏度显著提高。

摘要:摘要：【目的】使用流式细胞术（FCM）建立一种新的检测方法，可快速筛选自溶度不同的乳酸菌菌株。【方法】菌悬液经20 mmol/L 的PI-PBS染液在4℃条件下避光染色30 min，上流式细胞仪进行测定，检测器激发光波长488 nm，检测波长630 nm，每个样品收集1×105个细胞，联机使用CellQuest软件分析结果。【结果】阳性染色细胞数与细胞总数之比很好地反映菌液中自溶细胞与非自溶细胞的比例关系，整个检测过程耗时仅为1 h左右。【结论】与传统检测方法比较，FCM测定结果稳定可靠，检测时间短，为乳酸菌的自溶特性研究及筛选自溶度不同的菌株用作商业发酵剂提供了便利条件。

摘要:摘要：【目的】研究天然麻疯树根际土壤中内生菌根菌孢子果密度，揭示麻疯树根际土壤中内生菌根菌的分布特征，为麻疯树育苗繁殖和栽植推广提供科学依据。【方法】采用随机采样的方法对攀枝花市仁和区天然麻疯树根际土壤中内生菌根菌孢子果数量进行调查，确定了20个采样点，采集了20个土根混合样，利用解剖镜测定其孢子果密度，再根据1999年林业行标测定样品中的水分含量，养分含量等。【结果】天然麻疯树根际土壤采样从海拔1025m开始，直到1500m。土壤样品中均含有AM菌根菌孢子果，且数量丰富的，含量最高的土壤样品中AM菌根菌孢子果密度为236个/g干土，最小的密度为9个/g干土，平均密度为80个/g干土。土样含水量在4.01 %－13.39 %之间，平均值为6.79 %，与AM菌根菌孢子果含量正相关。有机质平均含量为3.80g/kg，与AM菌根菌孢子果含量正相关。【结论】天然麻疯树根际土壤中均能检测出AM菌根菌孢子果，且含量高，但分布不均。它的密度随着海拔高度的升高逐渐降低，随土壤含水量的增加而增加，随土壤有机质含量的增加而增加。

摘要:摘要：【目的】查明仿刺参耳状幼体“烂边症”的病原及其来源，并获得该病的治疗药物。【方法】对烂边症状较为典型的育苗场的发病幼体进行病原学分析，对可疑病原进行人工回接感染并进行形态学、生理生化和16S rDNA序列分析鉴定，对养殖场育苗系统，包括水源、饵料、育苗池水、育苗池底污物和亲参池水进行细菌学分析，对病原菌进行药敏测试。【结果】从患病幼体分离得到1种优势菌株，人工回接感染证明它对健康仿刺参有较强的致病性，且感染发病与自然发病仿刺参幼体的症状相同。鉴定出“烂边症”的病原为弧菌Vibrio lentus。养殖系统中的细菌浓度均较高 (2.8 × 102 cells/mL ~ 8.8 × 107 cells/mL)；病原来源较复杂：育苗池水、池底污物和亲参池水均发现了病原菌，病原菌浓度以池底污物中最多，育苗池水次之，亲参池水最少。新霉素等15种常用抗生素可有效抑制该病原菌的生长。【结论】“烂边症”的病原为弧菌Vibrio lentus；池底污物、育苗池及亲参均可能是本次“烂边症”的病原来源；新霉素等15种常用抗生素可用于该病的防治。