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摘要:摘要:巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris) 由于能高效表达正确折叠加工的外源蛋白而成为目前最具应用前景的表达宿主。但随着对大量不同外源蛋白在毕赤酵母中分泌表达的研究发现，并不是所有蛋白均能高效分泌表达，这严重限制了毕赤酵母这一表达系统的推广应用。相关研究发现，外源蛋白在内质网中的聚集是限制酵母分泌表达外源蛋白的主要因素，因此近年来开始尝试通过基因操作改良毕赤酵母表达外源蛋白的能力。本文综述了这一领域的研究进展。

摘要:摘要:VBNC( viable but non-culturable) 是指处于“活的但非可培养”状态的微生物，此微生物体的细胞仍有代谢活性，但用常规方法无法分离培养。本文阐述了VBNC 状态菌的形成机理、转变与种类、复苏、研究意义及其应用展望。并报道了我们在十余年间针对生态环境中处于VBNC 状态菌的复苏、可培养化、系统进化关系及潜在功能等方面的一些研究成果，拟为微生物资源的开发与应用提供新的科学依据。

摘要:摘要:拟杆菌(Bacteroidales) 是粪便污染的主要标志之一，近年来被广泛应用在水体微生物溯源领域，并展现了良好的应用前景。拟杆菌微生物溯源的优势在于不需要纯培养过程，直接根据拟杆菌具有的宿主特异性生物标记引物设计，通过检测水体中拟杆菌生物标记的存在情况来判断粪便污染来源。本文从人、猪、反刍动物等拟杆菌特异性生物标记的发现、引物设计以及其应用综述了拟杆菌在微生物溯源中的研究进展，指出了应用过程中的局限性。本文还对拟杆菌在溯源中的应用进行了展望。提出了寻找新的宿主特异性拟杆菌生物标记是研究的主要方向

摘要:摘要:犬细小病毒(Canine parvovirus，CPV-2) 首次分离于1978 年，被认为是由遗传关系相近的猫泛白细胞减少症病毒( FPLV) 或其他肉食兽细小病毒( FPLV-like virus) 跨宿主感染犬产生的新病原。其感染能引起新生犬急性心肌炎或幼犬出血性肠炎，造成较高的发病率和死亡率。该病原爆发后短短一年时间内即广泛流行到世界各地。随着CPV-2 对宿主的适应和变异，新抗原变异型( CPV-2a、CPV-2b 和CPV-2c) 不断产生并在世界各地逐步替代了CPV-2 的流行。伴随C

摘要:摘要:【目的】本文研究南海北部陆坡神狐HS-PC500 重力活塞岩心沉积物中微生物多样性。【方法】使用吖啶橙染色法计数沉积物中微生物丰度;提取沉积物微生物总DNA，使用特异性引物扩增古菌及细菌16SrRNA 基因序列;对克隆文库进行系统发育分析。【结果】系统发育分析显示表层PC500-1 (0 － 5 cm belowsea floor，bsf) 古菌以C3 为主要类群，占该层总序列的25. 6% ; 中层PC500-6 ( 350 － 355 cm bsf) 和底层PC500-11 (790 － 795

摘要:摘要:【目的】为了阐明可扩散性信号分子( diffusible signal factor，DSF) 调控的鞭毛基因对水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv． oryzicola，Xoc)Rs105 的致病性等方面的影响。【方法】采用PCR 的方法克隆靶标基因flgDxoc 和flgExoc，用同源重组法构建缺失突变体，测定突变体及其互补菌株的菌体形态、运动性、致病性及过敏性反应等表型，用反转录PCR(RT-PCR) 的方法验证Rs105 和ΔrpfFxoc( rpfFxoc 基因

摘要:摘要:【目的】四磷酸或五磷酸鸟苷(Guanosine 3'，5'-bispyrophosphate，( p) ppGpp) 是细菌在遭遇环境胁迫时细胞产生应激反应的信号分子，( p) ppGpp 由其合成酶RelA 或具有合成酶或水解酶双重催化功能的RelA/SpoT 合成。本文证明了集胞藻PCC6803 ( Synechocystis sp．) 中唯一编码RelA / SpoT 同源蛋白( 命名为Syn-RSH) 的基因slr1325( syn-rsh) 的功能。【方法】通过互补试验证明syn-rsh

摘要:摘要:【目的】为了深入研究大丽轮枝菌(Verticillium dahliae) 致病基因的功能，构建高效大丽轮枝菌基因敲除体系。【方法】融合PCR 构建基因敲除载体;利用农杆菌介导法转化大丽轮枝菌;使用在T-DNA 之间加入致死基因的双元载体，使T-DNA 随机插入转化子在添加5-氟脱氧尿苷的培养基上不能存活，实现对随机插入转化子的“反向筛选”。【结果】对大丽轮枝菌腺嘌呤合成酶基因和几丁质合成酶基因进行基因敲除验证，基因敲除转化子在总转化子中的比例分别达到87% 和44%。【结论】成功构建大丽轮枝菌高效

摘要:摘要:【目的】以不同强度的启动子控制表达木酮糖激酶基因，并研究其引起的不同木酮糖激酶活性水平对木糖利用酿酒酵母( Saccharomyces cerevisiae) 代谢流向的影响。【方法】以酿酒酵母CEN． PK 113-5D 为出发菌株，选择酿酒酵母内源启动子TEF1p，PGK1p 和HXK2p，利用Cre-loxP 无标记同源重组系统，置换染色体上木酮糖激酶基因XKS1 的启动子(XKS1p) 序列;并通过附加体质粒引入木糖代谢上游途径，构建不同水平表达木酮糖激酶的木糖利用工程菌株;从木酮糖激酶的转

摘要:摘要:【目的】选育高产紫杉醇菌株，并构建选育到的高产紫杉醇菌株与出发菌株HD1－3差异表达的cDNA消减文库。【方法】分别采用硫酸二乙酯和紫外线与硫酸二乙酯复合诱变处理菌株HD1－3孢子;以选育到的高产紫杉醇菌株为tester，菌株HD1－3为driver，应用抑制性消减杂交技术构建选育到的高产紫杉醇菌株与菌株HD1－3差异表达的cDNA 消减文库。【结果】试验确定的Nodulisporium sylviforme 紫杉醇产生菌HD1－3孢子复合诱变的适宜条件为:将106 cfu /mL 孢子悬液经过8%

摘要:摘要:【目的】利用核糖体工程抗性筛选技术，获得有抗菌活性突变株，并对突变株新产生活性物质进行研究。【方法】以三峡库区筛选出的无抗菌活性放线菌野生株为出发菌，通过单菌落挑选与平板划线培养，分离筛选具有链霉素和利福平抗性突变株;通过摇瓶发酵和对发酵液进行纸片法活性测定，获得抗金葡菌活性突变株;采用高效液相色谱法(HPLC) 分析其发酵液组分，通过LC-MS 对变化峰进行分析;进行16S rDNA 及形态学鉴定。【结果】链霉素和利福平对放线菌菌株FJ3的MIC分别为0.5μg/mL和110μg/mL;在FJ3突

摘要:摘要:【目的】坚强芽胞杆菌是一种在自然界普遍存在的益生菌，在对虾养殖中应用较为广泛．为了研究其分泌性蛋白从而为分泌性载体的构建提供理论依据，本文对坚强芽胞杆菌的主要分泌蛋白进行质谱鉴定及分泌性序列的分析。【方法】从本实验室分离保存的1 株来自对虾肠道的坚强芽胞杆菌(Bacillus firmus)培养液中获取了分泌性蛋白，进行SDS-PAGE，并对表达量较高的3 条蛋白区带进行MALDI-TOF/TOF 质谱鉴定及克隆测序，进行生物信息学分析。【结果】鉴定出的蛋白分别是坚强芽胞杆菌几丁质酶( chitin

摘要:摘要:【目的】研究米曲霉木糖醇脱氢酶基因的结构与功能。【方法】克隆测序来源于米曲霉的木糖醇脱氢酶(XDH)基因，利用Swiss-MODEL 和Modeller 对XDH 进行三级结构模建，通过PROCHECK和Prosa2003 对得到的4 个目标模型进行评价，从中得到一个最佳模型。在同源建模的基础上，通过分子对接软件Molsoft ICM-Pro，对辅因子进行对接，预测了XDH 与NAD+、Zn2+作用的相关残基。寻找底物木糖醇与XDH 结合的可能活性口袋，用Molsoft 模拟XDH 与木糖醇的对接，

摘要:摘要:【目的】探讨植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)121 和戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)ML32 的苯并芘吸附作用与机制。【方法】采用高效液相色谱检测菌体对苯并芘的吸附率。【结果】菌株121 和ML32对苯并芘的吸附率分别为65.9%和64.9%，这种吸附特性与菌体活力无关，随培养时间延长、温度提高以及细胞浓度的上升而增加。菌株121 和ML32 的吸附率在pH4和5 时达到最大，分别为87.6% 和89.0%。当培养液中Ca2+或Mg2+浓度大于

摘要:摘要:【目的】以减毒鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium aroA strain SL7207，SL7207) 为载体携带可表达呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial vrius，RSV)密码子优化的融合蛋白(Fusion glycoprotein，F)的真核表达质粒，探讨不同黏膜免疫途径及密码子优化对免疫效果的影响。【方法】通过对RSV 野生型F 基因 (Fwt)进行密码子优化，获得密码子优化的F 基因(Fsyn)，并构建可表达Fsyn 的真核表达质

摘要:摘要:【目的】检测禽致病性大肠杆菌IMT5155 自分泌黏附素基因等具有代表性的疑似毒力基因在不同来源大肠杆菌中的分布，为进一步研究其致病机理提供依据。【方法】采用PCR 和Dot blot，检测疑似毒力基因在不同地区(101 株大肠杆菌中国分离株和121 株大肠杆菌德国分离株)、不同来源(人源、禽源及猪源)大肠杆菌中的分布，并分析其和大肠杆菌系统进化分群的关系。【结果】自分泌黏附素基因B11 等11个疑似毒力基因在禽致病性大肠杆菌中分布率较高，阳性率分别为:A1 36. 4% (32/88 )、A8 5

摘要:摘要:【目的】本试验旨在筛选引导表达外源木聚糖酶基因高效分泌的信号肽，为枯草芽胞杆菌木聚糖酶高效分泌表达系统提供元件。【方法】构建信号肽筛选载体，载体是以含壮观霉素抗性基因的大肠-枯草穿梭载体为基本骨架，目标蛋白为耐碱性木聚糖酶，可在麦芽糖启动子Pglv 诱导下表达。从枯草芽胞杆菌A1747基因组中扩增获得24 个Sec 途径信号肽，并将其全部链接到至筛选载体上，并在枯草芽胞杆菌WB700 中实现表达分泌。重组菌在3% 麦芽糖诱导下培养24h 后用DNS 法测定上清酶活。【结果】成功构建信号肽筛选载体pG

摘要:摘要:【目的】建立能够稳定表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，Mtb)分泌蛋白EspB(Rv3881c)的RAW264.7细胞系，为研究EspB 蛋白在调控巨噬细胞功能中所起的作用提供科学依据。【方法】首先成功构建的重组质粒pEGFP-C1-EspB，然后将重组载体pEGFP-C1-EspB和空载体pEGFP-C1以脂质体介导的方法转染至小鼠巨噬细胞RAW264. 7 中，经过G418 筛选后建立稳定表达EGFP-EspB 融合蛋白以及EGFP的细胞系，并通过RT-PC

摘要:摘要:【目的】构建含有完整的绿色荧光蛋白(Green Fluorescence Protein，GFP) 和潮霉素抗性基因的表达质粒，观察该质粒在丝状真菌粉红粘帚霉中的表达。【方法】采用PCR、酶切、去磷酸化、酶连、转化等多种分子生物学手段，利用原生质体制备及转化的方法将其转入机会真菌粉红粘帚霉中，并在荧光显微镜下观察表达情况。【结果】成功构建了用于真菌标记的真核表达载体pANGH3，将其转化粉红粘帚霉后，在荧光显微镜下观察到菌丝有绿色荧光产生。【结论】重组质粒pANGH3 的成功建立及其在染粉红粘帚霉中

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