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摘要:摘要:由于滥用抗生素，人类致病菌的耐药日益成为全球性的公共卫生难题。据统计，细菌感染80% 以上与细菌生物被膜有关。近年来，有关细菌群体感应和细菌生物被膜的形成乃至机理已有报道，但就群体感应与细菌生物被膜的关系却报道较少，而揭示二者之间的关系可能会为解决致病菌耐药问题提供一个全新的思路。本文立足群体感应和细菌生物被膜的形成机制，结合本课题组的阶段性研究内容，拟阐明细菌群体感应与生物被膜形成的关系。

摘要:摘要:禽戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus，HEV) 与人、猪HEV 同属于肝炎病毒属，它们在遗传性和抗原性上有一定的相关性。自禽HEV 被分离鉴定以来，许多国家从血清学或分子流行病学方面证实了该病毒的存在和流行。目前，GenBank 上共有5 个禽HEV 的全基因组或接近全基因组的序列，分为3 个基因型，并且其全基因组包含3 个ORFs，其中ORF2 基因编码病毒的衣壳蛋白，包含病毒主要的抗原表位，是血清学检测和疫苗设计的主要靶蛋白。禽HEV 由于其对家禽养殖业的危害以及人畜共患的可能性，正被引起越来越多的关注。本文结合国内禽HEV 的分离鉴定从禽HEV 病原学、致病性以及衣壳蛋白抗原性等方面进行了总结概述。

摘要:摘要:本文介绍了构建优势小基因组生产菌株的必要性和可行性;介绍了优势小基因组工业微生物的构建原理和方法;同时，还介绍了几个目前已成功应用的通过基因组精简提高生产效率的例证;最后，结合作者的研究对优势小基因组生产菌的应用进行了展望。

摘要:摘要:【目的】对南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)根际溶无机磷细菌进行了分离、筛选与鉴定，并对获得的高效溶磷菌株进行了温室盆栽试验。本研究为通过生物途径改善南方红豆杉磷素供应，促进其生长提供了优良的菌株资源。【方法】利用选择培养基从南方红豆杉根际土壤中共分离出具溶磷能力的细菌;采用NBRI-BPB 培养基进行复筛获得溶磷能力较强的溶无机磷细菌;并采用钼锑抗比色法测量其在NBRIP 培养基中经4d 发酵后的可溶性磷含量;通过形态指标、生理生化测定、Biolog 系统和16S rDNA序列分析鉴定细菌种类;并进行了溶磷菌株的室内盆栽实生苗接种试验。【结论】从南方红豆杉根际共分离出4 株高效溶磷细菌，分别鉴定为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus)、草木樨中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)和地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis);4株细菌对南方红豆杉苗期的生长有明显的促进作用。

摘要:摘要:【目的】研究腹泻犊牛直肠细菌多样性，以及与健康犊牛直肠细菌多样性的差异。【方法】通过建立直肠菌群16S rRNA 基因克隆文库，分别用限制性内切酶MspⅠ和HhaⅠ对阳性克隆的PCR 产物进行限制性酶切片段长度多态性(RFLP)分析，通过测定16S rRNA 基因序列，绘制系统发育树，确定犊牛直肠菌群的组成。【结果】腹泻组克隆阳性率达98. 75% (474 /480)，优势菌群以乳杆菌属(14%)、肠球菌属(10%) 和埃希菌属(8%)等需氧和兼性厌氧菌为主，健康组克隆阳性率达96.45%(488/506)，优势菌群以梭菌属(13%)、双歧杆菌属(8%)和巨型球菌属(5%)等专性厌氧菌为主。【结论】2 周龄犊牛直肠菌群复杂多样，并且具有自己的独特性菌群，且腹泻时乳杆菌属、肠球菌属、埃希氏菌属等显著增加。

摘要:摘要:【目的】构建溶磷黑曲霉H1 的cDNA 文库，并从中筛选溶磷相关基因。【方法】利用SMART 技术合成黑曲霉H1 的双链cDNA 并将其连接于pBluescript II SK(+) 载体上，将重组质粒转化E.coli HST08，得到黑曲霉的初级cDNA 文库。利用难溶磷培养基筛选具有溶磷能力的克隆子，测序并利用Blast 分析基因序列。在难溶磷液体培养基中，进行克隆子对溶液pH 值、可溶磷含量的影响和产有机酸实验。【结果】成功构建了黑曲霉H1 的cDNA 文库，其初级库容量约为5.65×106 cfu/mL，重组率约为99.15%;通过难溶磷固体培养基筛选，得到具有溶磷圈的克隆子61个，其中克隆子H-54 的cDNA序列长839 bp，基因编码氨基酸残基序列长179n.t。克隆子E.coli HST08 H-54 在液体难溶磷培养基中培养，提高了有机酸的表达量，并增加了有机酸的种类，在培养12 h 后，溶液中开始产生甲酸和乙酸，在24 h 后，溶液中产生苹果酸和α-酮戊二酸，培养36 h，溶液pH 值由6.32降到3.93，可溶磷含量达到0.105 mg/mL。【结论】从黑曲霉H1中获得1个溶磷相关基因，将其命名为psgA。

摘要:摘要:【目的】研究重组杆状病毒BV-T7杂合表达体系能否有效转导禽类细胞并在禽类细胞中表达外源基因(eGFP)，从而构建能在禽类细胞中高效稳定表达外源基因的重组杆状病毒表达系统。【方法】本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统，结合T7 表达系统，通过对eGFP 表达水平的调控来把握噬菌体T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的功能。利用两支重组杆状病毒，pFastBac-CMV-T7 RNAP 重组杆状病毒为哺乳动物细胞启动子CMV 调控的噬菌体T7 RNA 聚合酶的cDNA; pFB-T7pro-IRES-GFP-T7ter 重组杆状病毒为T7 启动子控制的eGFP 报告基因。将两支重组杆状病毒共同侵染哺乳动物OL(oligodendrocyte)细胞、鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞。【结果】两支重组杆状病毒利用T7 启动子和T7 RNAP，在OL 细胞、鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞中成功表达eGFP 报告基因，而且未引起细胞病变，但在鸡胚原代细胞中eGFP 的表达相对弱于在OL 细胞中的表达。在OL 细胞中重组杆状病毒对细胞的转导效率为59.5%，在鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞中转导效率分别为23.2%和33.1%。【结论】本研究构建的基于杆状病毒、T7RNA 聚合酶、T7启动子(BV-T7)杂合表达体系能够在哺乳类细胞及禽类细胞中表达T7 RNAP，并利用T7RNAP 继续高效而稳定地表达外源基因。这为难于体外操作的RNA 病毒提供了有效的研究方法，并对新型基因工程疫苗的研制提供了一个高效而稳定的表达载体系统。

摘要:摘要:【目的】为了提高红壤磷素利用率，探讨溶磷菌溶磷机理。【方法】利用难溶性无机盐培养基从花生根际土壤样品中分离到一株溶磷菌C5-A，结合菌落形态特征、生理生化和16S rRNA 序列确定该菌株的系统发育地位;通过菌株C5-A 在NBRIP 液体培养基培养过程中培养液pH 变化确定其溶磷能力;利用液体发酵实验测定不同的碳源、氮源对菌株C5-A 溶磷的影响;通过高效液相色谱检测C5-A 在不同氮源培养液中有机酸的种类和浓度。【结果】菌株C5-A 鉴定为洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)，遗传稳定性较好。在FePO4和AlPO4培养液中，菌株C5-A 的溶磷量和pH 变化呈显著负相关;菌株C5-A对磷酸三钙、磷酸铝、磷酸铁、磷矿粉均有较强的溶解能力，最高溶磷量分别为125. 79、227.34、60.02 和321.15 mg/L;菌株C5-A对不同浓度的两种磷矿粉有较强的溶解能力;分别以麦芽糖和草酸铵为碳源和氮源时溶磷量最高。高效液相色谱检测出10 种有机酸，分别为草酸(葡萄糖酸)、乙酸、苹果酸、琥珀酸和5 种未知有机酸，然而，乙酸而非草酸似乎是影响C5-A 溶磷的重要有机酸。【结论】从红壤花生根际土壤中筛选到一株对难溶性无机盐具有较强溶解能力溶的菌株C5-A，有望为开发高效红壤微生物磷肥提供种质资源。

摘要:摘要:【目的】通过比较不同碳氮营养及其消耗对产漆酶的影响，了解白腐菌模式种黄孢原毛平革菌解除营养阻遏产漆酶代谢的生理生态特性，揭示白腐菌合成漆酶的碳氮生理调控机理。【方法】分别利用限碳限氮(CL-NL)、限碳富氮(CL-NS)、富碳限氮(CS-NL) 与富碳富氮(CS-NS)4 种条件培养黄孢原毛平革菌野生型(WT) 与突变株，比较两者产漆酶动力学、菌体生长、葡萄糖与氨氮消耗差异及其相关性来揭示解除营养阻遏产漆酶调控生理特性，明确C、N 营养对产漆酶的生理调控途径。【结果】突变菌株除消耗速率比野生型略慢外，两者氨消耗趋势一致，但对葡萄糖的消耗比野生型快且氨氮浓度对葡萄糖的消耗影响不大。在CLNL、CL-NS、CS-NL、CS-NS 4 种培养条件下，野生型分别在培养后期的第11、14、19 和19 天的次生代谢时期产生0. 107、0.029、12.84 和18.05U/L 漆酶，启动漆酶合成及酶峰值出现的时间与基质中葡萄糖耗尽或接近耗尽的时刻，或同氨氮消耗至最低值的时刻相对应;与WT 产漆酶特性不同，突变株产漆酶伴随整个培养过程且均有两个产酶高峰，分别在培养的第8、7、12 天和12 天出现298.83、343.14、271.22、251.49U/L漆酶第一个产酶高峰，在培养的第12、13、19和19天产生257.69、298.78、213.81、216.93U/L 漆酶的第二个产酶高峰。碳氮营养对产酶的影响显示:两菌株只要初始碳源浓度相同( 限碳或富碳) ，各自产酶动力学趋势基本一致;相反，即使初始氮源浓度相同但其产酶动力学趋势却不同，说明碳源对黄孢原毛平革菌产漆酶的影响 比氮源更为重要。【结论】野生型黄孢原毛平革菌产漆酶受碳或氮饥饿调控，碳、氮各自独立发挥作用且在不同的营养条件下由不同营养素所调控，如在限碳条件下产漆酶主要由葡萄糖饥饿启动，而在富碳条件下则由氨氮饥饿所激发，以碳或氮菌体负荷表示是否达到启动酶合成的调控阀值比单纯碳或氮浓度更为合理。突变菌株漆酶合成的启动不受碳、氮营养所阻遏，可能涉及一个全局调控的改变，解除了漆酶合成的营养阻碍。

摘要:摘要:【目的】对转棘孢木霉几丁质酶基因tachi1 的毕赤酵母工程菌GS-tachi1-K 进行诱导表达，研究重组几丁质酶Tachi1 的酶学性质，优化表达条件。【方法】对GS-tachi1-K 进行甲醇诱导培养，纯化目的蛋白Tachi1进行几丁质酶酶学性质的研究;通过单因素和正交试验对GS-tachi1-K 菌株产几丁质酶Tachi1 表达条件进行优化。【结果】GS-tachi1-K表达的几丁质酶Tachi1表观分子量约为44 kDa，酶反应最适的温度和pH分别为50℃和5.5，具有较宽的温度、pH 适用范围;50℃以下保持较高的酶活力，在碱性条件下稳定性较差;受Ag+、Hg2+、Cu2+、Fe2+和高浓度的SDS及β-巯基乙醇强烈抑制。该菌株的最佳表达条件为:pH 为6.5，甲醇诱导浓度为0.5%，起始细胞浓度为OD600=2，甲醇诱导时间为180 h;几丁质酶Tachi1活力可达17.93U/mL，蛋白表达量为6.19g/L。【结论】成功实现了棘孢木霉新几丁质酶基因tachi1的毕赤酵母高效分泌表达，工程菌GS-tachi1-K具有高表达量和表达产物酶活性高两个特点，明确了几丁质酶Tachi1 的酶学性质和最佳诱导表达条件，为该几丁质酶及其基因的深入研究和开发利用奠定了基础。

摘要:摘要:【目的】以胶质为唯一碳源，从中海油南堡35-2 油田地层水中经富集培养，为海上油田稠油降解及提高稠油采收率研究奠定基础。【方法】利用富集培养和胶质平板法分离胶质降解菌株，对分离菌株通过形态特征、16S rRNA 基因进行鉴定，对菌株的理化性质进行分析，并对其降解胶质和稠油的性能进行研究。【结果】分离筛选出细菌菌株21 株，并从中筛选出性能较好的4 株。经鉴定为分别为Q4-油杆菌(Petrobacter sp.)、QB9-嗜热脂肪地芽胞杆菌(Geobacillus stearothermophilus)、QB26-地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)、QB36-白色地芽胞杆菌(Geobacillus pallidus)，其中QB26 菌株效果最好，对该菌株的理化性质进行了分析，并对其降解胶质和稠油的性能进行了研究。结果显示，该菌株可在厌氧条件下生长，并能适应地层环境。分离菌株作用稠油后，饱和烃相对含量均有不同程度的上升，芳香烃、胶质、沥青质相对含量降低，能使胶质相对含量降低5.1%，沥青质相对含量降低2.7%。【结论】分离菌株对NB35-2 油田稠油中的胶质具有一定的降解作用，在微生物采油和原油污染处理方面具有应用潜力。

摘要:摘要:【目的】克隆表达炭疽芽胞杆菌BlsA 的功能区片段并对其生物学功能进行鉴定。【方法】以炭疽芽胞杆菌A16R 基因组DNA 为模板PCR扩增bslA(260－652)基因片段，克隆至pET-28a(+)载体。将成功构建的重组质粒转化入大肠杆菌Rosetta (DE3)中，诱导表达后收集菌体经超声破碎后，对可溶表达部分用镍柱进行亲和层析纯化。以纯化后的蛋白为抗原，免疫BALB/c小鼠制备该蛋白的多抗，用ELISA和Western blot检测抗血清;使用间接免疫荧光实验和细菌黏附实验研究目标蛋白及其抗体的生物学功能。【结果】BslA(260－652)获得了可溶性表达，纯化后纯度约为87.4%。以纯化蛋白为抗原，免疫BALB/c小鼠制备的抗血清ELISA效价可达1:20000。将BslA(260－652)蛋白与Hela 细胞共孵育后，能够直接和Hela的细胞膜结合。细菌黏附实验表明BslA(260－652)蛋白及其相应的多抗血清都能够显著地抑制炭疽芽胞杆菌A16R 对Hela细胞的黏附。【结论】大肠杆菌表达得到的炭疽芽胞杆菌BslA(260－652)蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性，为深入研究BslA 蛋白在炭疽芽胞杆菌致病过程中的作用奠定实验基础。

摘要:摘要:【目的】研究犬细小病毒(Canine parvovirus，CPV) 非结构蛋白NS1在CPV引起宿主细胞凋亡中的作用，初步探讨CPV 引起细胞凋亡的机制。【方法】首先采用PCR 方法从犬细小病毒基因组中扩增NS1 编码基因，然后利用pcDNA3.1A 质粒构建NS1 真核表达载体pcDNA-NS1，并通过HEK293FT 细胞瞬时表达NS1重组蛋白，用Western-blot 检测以确定重组NS1蛋白能否在真核细胞中表达。然后用CPV感染和用pcDNANS1表达载体转染F81 宿主细胞，通过AnnexinV/PI 双染法检测磷脂酰丝氨酸外翻和通过化学发光法检测caspase-3/7活性，分析感染CPV或转染NS1基因对F81宿主细胞凋亡的影响。【结果】结果表明，本实验扩增的NS1 基因序列与GenBank 的序列一致，构建的表达载体结构正确，并能够介导NS1基因在真核细胞中表达。感染CPV 和转染NS1 基因均能诱导F81 细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻和明显提高细胞内caspase-3/7的活性，表明CPV 和NS1 蛋白均能引起细胞的凋亡。【结论】CPV 诱导宿主细胞凋亡与其编码的NS1 非结构蛋白有关。

摘要:摘要:【目的】构建串联亲和纯化原核表达载体，用于研究细菌中( 生理状态或接近生理条件下的) 蛋白-蛋白相互作用。【方法】设计并合成两条串联亲和标签序列，分别可以在靶蛋白N 端和C 端融合Protein G 和链亲和素结合肽(Streptavidin binding peptide，SBP) 标签;以pUC18 载体为骨架，去除原有的阻遏蛋白基因，构建组成型表达载体pNTAP 和pCTAP。【结果】成功构建N 端和C 端标签表达载体pNTAP和pCTAP，它们在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)、肠出血性大肠杆菌O157:H7 和痢疾杆菌福氏5 型M90T 菌株中都可以实现表达。【结论】本实验构建的两个串联亲和纯化表达载体可以在部分革兰氏阴性细菌中表达，为研究细菌内蛋白－ 蛋白相互作用及致病菌毒力蛋白的作用机制奠定了基础。

摘要:摘要:【目的】了解新疆特殊生境不同类型岩石内生细菌的组成及多样性。【方法】采用末端限制性片段长度多态性技术(Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism，T-RFLP)，分析新疆乌苏花岗岩(1 号样)、一号冰川和木垒变质岩(2，3 号样)、裕民和托克逊岩石漆(4，5 号样)内生细菌群落。【结果】样品间多样性指 数变化不大;聚类分析表明岩石类型相同，其相似性较高，2 号样和3 号样聚为一支并与1 号样再聚为一支，4 号样与5 号样聚为一支;各样品共有种群为厚壁菌门( Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteria)、变形菌门(Proteobacteria) 和拟杆菌门(Bacteroidetes)，1号样存在酸杆菌门(Acidobacteria)，2号样存在浮霉菌门( Planctomycetes);除5 号样优势类群为放线菌门(29.3%)，其它4 个样品均为变形菌门，只是所占比例略有不同。【结论】生境不同的同类型岩石的内生细菌群落组成存在差异，各类岩石中可能存在大量未知细菌新种。

摘要:摘要:【目的】以对叶百部块根为材料分离内生放线菌，并对分离菌株进行分类、抗菌活性和次级代谢产物合成基因研究。【方法】样品经过严格的表面消毒，选用4 种培养基分离百部内生放线菌;分离菌株通过形态观察和16S rRNA 序列分析进行分类鉴定;采用琼脂移块法测试分离菌株的抗菌活性;通过PCR 检测分离菌株的PKS/NPRS 和卤化酶基因;使用HPLC-UV/VIS-ESI-MS/MS 分析发酵产物。【结果】从6 个样品中获得18 株内生放线菌，分属链霉菌属(Streptomyces)、小单孢菌属(Micromonospora)、假诺卡氏菌属(Pseudonocardia)和甲基杆菌属(Methylobacterium)。分离菌株绝大部分具有抗菌活性和次级代谢产物合成基因，其中13 株对耐药金黄色葡萄球菌和/或绿脓杆菌有拮抗活性，17 株具有PKS/NRPS 基因，8 株菌具有卤化酶基因，且卤化酶阳性代表菌株的发酵产物具有抗细菌活性和卤代化合物特征。【结论】百部作为一种传统中药，其内生放线菌以链霉菌和小单孢菌为主，在次级代谢产物合成方面具有很好的潜力，可作为一类重要微生物资源进行活性产物开发。

摘要:摘要:【目的】探讨一种构建无抗生素选择标记链球菌透明质酸合成酶基因工程菌的方法。【方法】PCR 扩增链球菌透明质酸合成酶操纵子hasABC 基因，用温度敏感载体pJR700 构建携带hasABC 基因重组质粒pXL32;电转化pXL32 质粒到马链球菌兽疫亚种感受态细胞，卡那霉素(Kanamycin，kan)平板37℃培养筛选重组子，在不含kan 液体培养基中30℃传代，37℃平板分离挑取抗生素敏感菌落，RT-PCR 检测工程菌染色体hasABC 基因表达，Bitter-Muir 法测定菌体透明质酸含量。【结果】在无抗生素选择压力条件下，获得透明质酸产率提高34% 的马链球菌兽疫亚种透明质酸合成酶基因工程菌。【结论】用pJR700 温度敏感载体系统，构建能提高透明质酸产量的无抗生素选择标记的基因工程菌是可行的。

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