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摘要:摘要:随着基因重组技术的不断发展和蛋白糖基化机制研究的不断深入，糖蛋白药物对人类健康的重要作用越来越受到重视。迄今为止，哺乳动物表达载体仍然是最常见的药用蛋白生产系统。由于其存在成本高、产率低等问题，酵母和细菌表达系统也日益受到重视。受到理论和技术的限制，细菌表达系统的开发仍存在相当大的困难，而酵母表达系统的开发和应用已经取得了一系列突破性的成果。本文综述了国内外近年来改造不同表达系统N-糖基化途径用于生产人源糖蛋白的研究进展。

摘要:摘要:【目的】探究新疆地震断裂带含硫冷泉泉水古菌群落组成及多样性。【方法】利用酶解法直接从冷泉泉水样品中提取环境总DNA，采用古菌通用引物对16S rRNA基因进行扩增，构建16S rRNA基因克隆文库，通过Alu I和Afa I两种限制性内切酶对随机挑选的115个阳性克隆子进行酶切分型，将不同酶切带型对应的克隆子送样测序，测序结果与GenBank序列进行比对并构建16S rRNA基因系统发育树。【结果】古菌克隆文库中共得到44个不同的酶切带型，BLAST序列比对和系统发育分析将它们划分于广古菌门(Euryarchaeota，94.78%)和奇古菌门(Thaumarchaeota，4.35%)。奇古菌门克隆与Nitrosopumilus. sp序列相似性达到了93%;而广古菌门类群较为多样，其中，42.61%的克隆子属于RC-V cluster，20.87%与13.91%的克隆子分别属于LDS cluster和Methanomicrobiales，4.35%的克隆子与甲烷厌氧氧化相关的类群(ANME-1a-FW)具有较高的的相似。另外，13.05%的克隆子属于广古菌门中的未知类群。【结论】乌鲁木齐10号泉水体中广古菌类群多样，可能蕴藏有大量潜在的古菌新类群。

摘要:摘要:【目的】明确SigmaK和GerE对苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)芽胞外壁(exosporium)基质结构基因exsB的转录调控。【方法】序列比较蜡样芽胞杆菌群exsB及启动区序列，利用启动子融合lacZ技术检测exsB启动子的转录活性;通过凝胶阻滞方法检测GerE与exsB启动子的结合。【结果】在蜡样芽胞杆菌群中，exsB及其启动区具有较高的相似性，exsB启动子在芽胞形成期的晚期大量转录;sigK和gerE的突变影响了exsB启动子的转录活性，凝胶阻滞结果显示GerE蛋白与exsB启动子可以结合。【结论】本研究证明exsB在芽胞形成晚期受到SigmaK转录调控，并直接受到GerE的正调控。

摘要:摘要:【目的】通过了解一氧化氮在启动黄孢原毛平革菌合成木质素过氧化物酶(LiP)中的作用及其作用机制，弄清白腐菌启动次生代谢的调控机制。【方法】以黄孢原毛平革菌原种pc530及突变种pcR5305为研究对象，弄清在不同营养条件下NO含量的动态变化及其与合成LiP之间的关系，再通过添加外源NO供体SNP、NO淬灭剂cPTIO对两菌株合成LiP 的影响分析，揭示NO在白腐菌启动合成LiP中的作用和作用机理。【结果】两菌株均能在两种不同营养条件下产生NO，但NO的产生量与菌株及其营养状况有关，富营养使pc530 产生NO量低且严重延后，而pcR5305产生NO并不需要营养饥饿激发且产生量显著高于pc530。除了LiP峰值出现时间迟于NO峰值时间外，NO含量与LiP合成呈正相关性;外施SNP对合成LiP有促进作用，但对pcR5305的促进作用没有pc530明显;15 mmol/L cPTIO使黄孢原毛平革菌合成LiP均大为降低，但并没有完全抑制产生LiP。【结论】黄孢原毛平革菌可能通过产生NO 启动LiP的合成，但NO并不直接参与或影响合成LiP，NO更可能是作为一种上游的信号分子起作用。除了NO外，可能还有其它与NO有相互促进作用的信号分子也参与了LiP合成的调控。与pc530具有不同的产生NO的机制可能就是pcR5305抗营养阻遏合成木质素降解酶的机理。

摘要:摘要:【目的】构建产溶血性磷脂酶C(Hemolytic Phospholipase C，PLCH)的重组大肠杆菌(Escherich coli)菌株，并初步优化其发酵条件。【方法】首先利用卵黄硼砂平板分离法筛选到一株产磷脂酶C(Phospholipase C，PLC)活性较高的菌株，命名为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)41;进一步以P.aeruginosa 41基因组DNA为模板设计引物，PCR扩增获得溶血性磷脂酶C(PLCH)基因，构建重组大肠杆菌表达质粒并转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3);筛选转化子并检测PLC活性和溶血能力，并初步优化其发酵条件。【结果】成功构建了重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28a-plcH;在硼砂卵黄平板上对重组菌进行PLC活性测定，显示重组菌有明显的磷脂酶C活性;在哥伦比亚血琼脂平板上对重组菌进行溶血性试验，表明PLCH具有较强的溶血活性;初步优化摇瓶发酵条件为:5%转接量，37℃、200 r/min下培养4 h添加IPTG至终浓度为0.9 mmol/L，转为25℃、150r /min诱导培养14 h;优化后重组菌的酶活可达到722.89±0.47 U/mL。【结论】本文成功构建了一株产溶血性磷脂酶C活性较高的重组大肠杆菌菌株，并通过优化发酵条件使其酶活达到了722.89±0.47 U/mL，本实验在国内首次实现了铜绿假单胞菌来源的溶血性磷脂酶C基因在大肠杆菌的胞内表达，该研究为研究磷脂酶C产业化奠定了一定的基础。

摘要:摘要:【目的】探讨水稻种子内生细菌的多样性并测定其分泌IAA 能力。【方法】采用传统的可培养方法分离水稻种子内生细菌，并通过16S rRNA基因序列分析初步确定分离菌株的系统发育地位，利用比色法进一步对不同种类菌株产植物生长素(IAA)能力进行定性、定量检测。【结果】共分离纯化获得66 株内生细菌菌株，分属于5个类群的15个属26个种。以26株细菌为代表对其进行分泌生长素(IAA)能力的定性及定量测定，共发现19株细菌可分泌生长素或其类似物，其中Z10、Z17、Z14和Z20 4株内生细菌具较强的分泌植 物生长素能力。【讨论】分离得到的内生细菌表现了水稻种子内生细菌的多样性，其中某些细菌对植物有一定的促生功能。

摘要:摘要:【目的】构建高致病性2 型猪链球菌IV 型样分泌系统virB1-89K基因的敲除株和互补株，研究virB1-89K基因缺失对细菌毒力的影响。【方法】通过同源重组技术敲除virB1-89K基因，多重PCR筛选敲除株并测序鉴定。再将virB1-89K基因克隆到穿梭质粒pSET1后转入virB1-89K敲除株中，构建互补株。比较野生株05 ZYH33、突变株△virB1-89K和互补株CvirB1-89K三者基本生物学特性的差异，小鼠实验分析virB1-89K基因敲除后对细菌毒力的影响。【结果】成功构建突变株△virB1-89K和互补株CvirB1-89K，在基本生物学性状无明显改变的情况下，敲除株的毒性降低到野生株的30%，互补株可恢复其毒性。【结论】virB1-89K基因作为2型猪链球菌高致病性菌株05 ZYH33的IV样分泌 系统的重要组分，与其高致病性密切相关。

摘要:摘要:【目的】制备高效价鼠和兔抗Ⅰ型马立克氏病毒(Marek＇s disease virus，MDV) sorf2蛋白的多克隆抗体并对其特异性进行鉴定。【方法】以Ⅰ型MDV GX0101为模板，利用PCR扩增sorf2基因，分别克隆进原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+)中，转化大肠杆菌BL21(Rosetta)，经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导后进行融合蛋白的表达和纯化。用纯化的融合目的蛋白常规免疫6－8周龄Balb/c小鼠和成年新西兰大白兔，制备抗sorf2蛋白的多克隆抗体。用Western blot和间接免疫荧光试验鉴定多克隆抗体的特异性。【结果】Ⅰ型MDV的sorf2基因在原核表达载体中能够正确表达，免疫小鼠和兔后能获得与sorf2蛋白发生特异性反应的高效价的多克隆抗体。【结论】制备的抗sorf2 蛋白的多克隆抗体能够特异的鉴定MDV sorf2基因缺失株，有效的区分MDV 疫苗株HVT(FC-126)与Ⅰ型MDV毒株，用于临床MDV 野毒的分离鉴定。

摘要:摘要:【目的】随着高通量测序方法的应用，越来越多的sRNA(small non-coding RNA，sRNA)需验证。本研究建立用地高辛标记Northern blot检测鼠疫菌sRNA的技术，为细菌sRNA 验证提供一种灵敏、特异的方法。【方法】在低铁条件下，提取鼠疫菌总RNA，10% dPAGE分离后电转到尼龙膜上并用紫外线交联RNA。膜经地高辛标记RyhB1或RyhB2寡核苷酸RNA探针过夜杂交后洗脱、封闭和免疫检测，最后曝光显影。【结果】地高辛标记的Northern blot曝光时间为20 s－3 min，RyhB1或RyhB2检测灵敏度分别为0.005 μg和 0.05 μg。RyhB1或RyhB2探针特异性好，相互间无交叉反应。带正电或中性的尼龙膜都适用于杂交反应。RNA 探针在42℃－65℃内杂交均可，提高温度可减少非特异性反应;而DNA 探针杂交温度需摸索。【结论】本研究成功构建一种地高辛标记Northern blot检测鼠疫菌sRNA技术，具有特异性好、灵敏度高、探针易保存、曝光时间短等优点，为细菌sRNA验证和功能研究提供有利工具。

摘要:摘要:【目的】制备鼠抗fps单因子血清，检测急性致瘤性ALV诱发肉瘤组织中的fps肿瘤抗原。【方法】以J亚群相关禽白血病/肉瘤病毒Fu-J株RNA为模板，分两段扩增v-fps肿瘤基因，利用大肠杆菌表达系统表达这两段蛋白，纯化后将两种蛋白同时免疫小鼠，获得抗血清，间接免疫荧光试验检测肉瘤组织滤过液感染的CEF和肿瘤细胞中的fps抗原，免疫组织化学方法检测肿瘤组织中的fps抗原。【结果】该单因子血清具有较好特异性，不与经典ALV-J发生交叉反应。被感染的CEF 细胞、肿瘤细胞及纤维肉瘤组织切片均显示阳性。【结论】该实验制备了鼠抗fps单因子血清，建立了fps肿瘤抗原的检测方法，为进一步研究该病毒的生物学特性及其致瘤机制奠定了基础。

摘要:摘要:【目的】筛选出合适的内参基因用于分析不同环境条件下副溶血性弧菌毒力基因的表达情况。【方法】本研究以虾样品中、海水样品中、过滤海水样品中以及TSB 培养条件下的副溶血性弧菌为材料，利用qRTPCR技术评价了GAPDH、pvuA、pvsA 和rpoS 4种常用管家基因在不同条件下的表达稳定性。【结果】4种管家基因均能特异扩增，表达稳定性排列顺序为pvuA(2.906)＞pvsA(3.197)＞GAPDH(3.746)＞rpoS(6.512)，进一步通过geNorm软件分析，最终选择两个表达最为稳定的内参基因即pvuA和pvsA，以二者的几何平均值作为参照可更为准确地校正目的基因的表达。【结论】pvuA和pvsA可作为环境样品中副溶血性弧菌毒力基因表达变化研究的内参基因。

摘要:摘要:【目的】自诱导信号分子AI-2(Autoinducer-2，AI-2)作为细菌间的通用自诱导信号分子，参与细菌众多生理功能的调控。本研究通过开展AI-2在鸭疫里氏杆菌(Riemerella antatipestifer，RA)CH3 株对非洲绿猴肾细胞(Vero 细胞)的粘附、入侵以及对RA 相关基因调控作用的研究，为进一步研究AI-2对RA的调控作用奠定基础。【方法】在CH3(血清型1 型)对Vero细胞的粘附、入侵过程中加入不同浓度的AI-2，研究其对CH3 粘附、入侵Vero的影响;在添加184.0μmol/L AI-2的胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)中培养RA CH3菌株，利用real-time PCR来检测AI-2对RA相关基因转录水平的影响。【结果】结果表明，AI-2浓度为18.4μmol/L时，AI-2对CH3粘附Vero细胞的抑制性最强，为62%，当AI-2浓度为184.0 μmol/L时，AI-2对CH3入侵Vero细胞的促进性最强为194%。荧光定量PCR结果表明AI-2对部分基因的转录有促进作用，对部分基因的转录有抑制作用。【结论】AI-2参与调控RA 粘附、入侵Vero细胞及RA毒力因子、免疫原性蛋白基因以及代谢相关基因转录水平的调控。

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