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摘要:摘要:博卡病毒是细小病毒科细小病毒亚科的成员之一。目前已知博卡病毒成员有牛博卡病毒、犬博卡病毒、人博卡病毒、以及新鉴定的猪博卡病毒，猩猩、猫、犬以及加利福尼亚海狮体内发现的新博卡病毒成员。作为新发病原，博卡病毒成为各国科研人员的研究热点。本文结合前人的文献和我们近期的研究成果，对博卡病毒的家族成员分类、基因组结构与复制、临床致病特点、致病分子机制等方面进行了阐述，为广大科研人员对博卡病毒的研究提供一定的帮助。

摘要:摘要:【目的】对300份奶粉样品和50 份非奶粉类食品中克罗诺杆菌的污染情况做定量检测，并对分离得到的克罗诺杆菌进行鉴定。【方法】通过分子方法和9管法对奶粉和其他食品中克罗诺杆菌的污染情况做定量检测;通过吲哚产生、丙二酸盐利用、卫矛醇、肌醇、松三糖和松二糖发酵产酸等六种生化试验对分离株进行鉴定;同时对分离株的16S rRNA基因序列进行同源性分析，通过N-J(Neighbour-Joining)法构建系统发育树。【结果】定量检测结果表明，350份样品中有23 份样品分离出克罗诺杆菌，共分离到24株克罗诺杆菌，检出率为6.6%;23份受污染样品中有4个样品的克罗诺杆菌大于100MPN/100g;24株克罗诺杆菌被鉴定到种或亚种，其中19株为阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii);2株为丙二酸盐克罗诺杆菌(C．malonaticus);2株为都柏林克罗诺杆菌奶粉亚种(C.dublinensis subsp． lactaridi);1株为莫金斯克罗诺杆菌(C.muytjensii)。【结论】分子方法和9管法联用适合污染率低而定量检测要求高的克罗诺杆菌的奶粉调查;采用生化和分子生物学方法将24 株分离株鉴定到种或亚种，其中阪崎克罗诺杆菌为优势种;奶粉中克罗诺杆菌的污染问题对婴幼儿安全存在隐患，应引起消费者和有关部门的重视。

摘要:摘要:【目的】在体外研究surfactin合成酶的A结构域，为获得新的surfactin类似物奠定基础。【方法】本文从枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis) fmbj中克隆出surfactin合成酶第7个模块的A 结构域基因(SrfAC-A)，与表达质粒pET-23a 相连后在大肠杆菌表达系统中表达，用Ni-NTA亲和柱对重组蛋白SrfAC-A进行分离纯化 后测定其活性。【结果】克隆所得的A结构域对Ile有选择活性，而对其他氨基酸基本无活性。【结论】Surfactin合成酶中的A结构域能在体外独立行使其选择底物氨基酸的功能。

摘要:摘要:【目的】为了研究昆虫病原真菌感染蚧虫过程中对其蜡泌物的降解作用。【方法】本文选择3种虫生真菌的4个菌株即，蜡蚧霉Lecaniciliium lecanii的菌株V3.4504和V3.4505、球孢白僵菌Beauveria bassiana菌株FDB01和绿僵菌Metarhizium anisopliae菌株TSL06，以日本龟蜡蚧Ceroplastes japonicus Green(昆虫纲:半翅目:蚧总科)雌成虫的蜡泌物作为无机盐培养液中的唯一碳源，研究各菌株在该无机盐培养液中的生长情况、酶活变化和对蜡泌物的降解作用。【结果】在上述培养液中，4 株病原真菌都能以日本龟蜡蚧的蜡泌物作为其营养碳源，进行生长繁殖，产生酶类物质，对蜡质造成降解。菌株V3.4504和V3.4505在无机盐培养液中多以芽管的形态存在，而菌株FDB01 和TSL06多以附着胞的形式存在;在7天的培养过程中，菌株V3.4504、V3.4505、FDB01、TSL06的脂肪酶活性最高值分别为(0.128±0.017)U/mL、(0.056±0.002)U/mL、(0. 124±0.011)U/mL、(0.149±0.005)U/mL，不同菌株之间的脂肪酶活性有显著差异;4 菌株脱氢酶活性分别为(0.075±0.003)U/mL、(0.074±0.003)U/mL、(0.061±0.04) U/mL、(0.066±0.002)U/mL，它们之间的差异没有达到显著水平; 4 菌株对蜡泌物的降解率分别为(18.20±0.019)%、(11.00±0.011)%、(15.4±0.017)%、(23.10±0.031)%;在菌的作用下，蜡泌物的结构变得松脆，表面出现许多小孔洞，并有白色附着物。用扫描电镜观察到了菌丝在蜡质上的附着和穿刺。【结论】昆虫病原真菌可以降解 日本龟蜡蚧蜡泌物的化学成分(主要是长链脂肪酸等多种长碳链化合物以及组成“内蜜露”的多种糖类和氨基酸)作为自己的营养碳源，并使蜡泌物的物理结构发生改变，这是病菌打破蜡壳屏障，成功入侵蚧虫的关键原因。菌株分泌的脂肪酶和脱氢酶参与了降解作用，其中脂肪酶发挥了更为关键的作用。4菌株中对蜡质的降解率依次为TSL06＞V3. 4504＞FDB01＞V3.4505。

摘要:摘要:【目的】分离纯化出一株高浓度氯苯优势降解菌株，对其所产氯苯降解酶进行分离与纯化，为该菌株及其氯苯降解酶的研究提供理论参考。【方法】利用梯度富集培养技术和无菌滤纸片平板法分离菌株，通过形态特征及16S rRNA基因序列分析初步鉴定菌株，用气相色谱法测定培养液中氯苯浓度，以单位细胞氯苯降解率评价菌株对氯苯的降解能力，以氯苯降解率表示氯苯降解酶的活性。取纯化菌株的发酵酶液制备粗酶液，经硫酸铵梯度盐析、透析脱盐、DE-52离子交换层析、G-100凝胶层析和透析浓缩后，进行SDS-PAGE凝胶电泳检验酶的纯度并测定酶的分子量。【结果】从氯苯长期驯化的成熟期活性污泥中筛选到一株以氯苯为唯一碳源和能源的氯苯优势降解细菌LW13，该菌株在以2000 mg/L 氯苯为唯一碳源的无机盐培养基中仍能正常生长，其单位细胞氯苯降解率可达1.37×10－10。扫描电镜观察到该菌株细胞大小约为2.3×0.8μm，长有数根端生鞭毛。16S rRNA基因序列相似性比较表明该菌株与Lysinibacillus fusiformis(溶藻菌)的相似性达95.5%。所纯化的氯苯降解酶为胞外酶，带正电荷，其分子大小约为57 kDa。整个纯化过程中酶纯化倍数化达8.0倍，酶活回收率达52.51%，酶量回收率达6.57%。纯化后的氯苯降解酶在30℃－55℃和pH在6.0－8.0之间都保持较高的酶活性，其最适反应温度和pH分别在40℃和pH8.0左右。【结论】所分离的氯苯优势降解菌属于Lysinibacillus属菌株，该菌株能有效降解高浓度(500－2000 mg/L)氯苯废水，通过逐级分离纯化，可获得氯苯降解酶纯酶，纯化指标符合分离纯化基本规律，纯化效果较为理想。

摘要:摘要:【目的】从空肠弯曲杆菌NCTC11168菌株中筛选糖蛋白。【方法】本实验基于凝集素-糖蛋白特异结合的特性，先用免疫印迹的方法确定空肠弯曲杆菌内糖蛋白能与凝集素SBA 特异结合，再用包被有凝集素SBA的磁珠捕获样品中的潜在糖蛋白，通过N-乙酰半乳糖胺竞争性洗脱及双向电泳分离，最后利用串联质谱鉴定捕获的糖蛋白。【结果】质谱分析共鉴定到22种空肠弯曲杆菌蛋白，其中至少5 种为已报道糖蛋白，包括Cj0633在内的17种为迄今为止未知的潜在糖蛋白。【结论】这种糖蛋白筛选策略可用于细菌糖蛋白的分离鉴定。

摘要:摘要:【目的】从新疆细毛羊、牛和骆驼瘤胃液中分离出具有分解纤维素能力的好氧细菌，用于绿色粗饲料微生物添加剂的研发。【方法】采取新鲜瘤胃液，接种于羧甲基纤维素钠平板，通过刚果红染色和液体复筛培养基，筛选出分解纤维素能力强的好氧细菌;形态学、生理生化试验与16S rDNA序列分析方法相结合对细菌进行鉴定;同时对纤维素分解能力强的4株细菌进行不同条件下酶活力测定。【结果】共分离到84株具有分解纤维素能力的细菌，其中筛选出较强分解纤维素能力的40株。该菌包括37株G－菌和3株G+菌;经鉴定40株纤维素分解菌分别属于6个属10个种，其中16株为寡养单胞菌属，10株为苍白杆菌属，5株为鞘氨醇杆菌属，3株为微杆菌属，3株为副球菌属，2株为假单胞菌属。其中产酶能力强的4株菌在不同条件下的酶活力表明，它们在最佳碳源为秸秆粉、pH5.5－6.0的偏中性条件和37℃培养条件下的酶活力较高。不同菌株对不同纤维素类物质的分解能力不一样，同一菌株对不同纤维素碳源的利用能力也不相同。【结论】分离获得的瘤胃纤维素分解菌是从新疆不同地区、干旱半干旱环境下饲养的动物胃液中分离、筛选出来的，有较强的纤维素分解能力，将为高品质、高消化率的青贮饲料生产提供优质菌种资源及一定的科学依据。

摘要:摘要:【目的】为探明小花棘豆不同组织中内生真菌带菌率及其种属分布特点，对采自内蒙古阿拉善盟草原的小花棘豆各组织内生真菌进行检测与分离。【方法】制作小花棘豆不同组织临时装片，通过染色观察与分离鉴定方法研究小花棘豆各组织中内生真菌分布形态、带菌率以及内生真菌种属分布情况。【结果】通过临时装片染色技术从小花棘豆茎、叶、叶柄及种子中均检测到内生真菌并观察到其在各组织中的分布特点;采用普通分离方法从小花棘豆四种组织中分离出79株内生真菌，鉴定为5个种。比较小花棘豆各组织内生真菌带菌率与分离率发现种子＞叶＞茎＞叶柄，且小花棘豆内生真菌的主要优势种(相对分离频率)为疯草内内生真菌(Undifilum oxytropis) (77.32%)，砖格孢属( Embellisia sp.) L12(64.00%)，镰刀菌属(Fusarium equiseti) (50.00%)。【结论】小花棘豆各组织中普遍存在内生真菌，其在各组织中的形态分布各异，内生真菌数量与种属分布存在组织差异性，种子和叶是内生真菌侵染和定殖的主要部位。

摘要:摘要:【目的】研究双精氨酸运输系统(Tat)与肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)生物学特性之间的关系。【方法】通过同源重组的方法，构建EIEC的tatABC基因缺失菌株以及互补菌株，并探索其对细菌形态、底物转运功能以及对HeLa细胞和豚鼠角膜侵袭力的影响。【结果】TatABC基因缺失株细菌形态变化明显，底物转运功能丧失，细菌侵袭力也显著减弱(缺失株侵入HeLa 细胞数量明显减少，致豚鼠角膜病变能力明显减弱)，而互补菌株在上述方面较接近野生株。【结论】EIEC的Tat蛋白运输系统与EIEC的生物学特性有密切关系。

摘要:摘要:【目的】诊断安徽地区养殖的克氏原螯虾发生疫情的病原，追踪感染源，为疫病的防控提供依据。【方法】采集病料，参照OIE推荐的套式PCR 法检测白斑综合征病毒(WSSV)。将病螯虾鳃丝组织研磨后离心，取上清液接种健康克氏原螯虾。透射电镜观察病原特征。综合流行病源学及病原检测，分析养殖地区的可能感染源。【结果】发病螯虾感染了WSSV，动物实验可见和发病螯虾相同的临床症状，证实该病原引起养殖螯虾发病。电镜观察可见典型的白斑综合症病毒颗粒。流行病学调查显示，水产颗粒膨化饲料和冷冻饲料甲壳类检测阳性。【结论】该地区养殖的克氏原螯虾近年爆发的疫病病原为WSSV，推断地区性克氏原螯虾WSSV的感染并流行与污染的饲料有关。

摘要:摘要:【目的】研究金黄色葡萄球菌噬菌体GH15和K的生物学特性及联合用于治疗金黄色葡萄球菌感染的潜力。【方法】通过透射电镜观察噬菌体GH15和K的形态;测定二者的裂解谱和一步生长曲线;通过体外裂解实验和体内治疗实验分别测定单独使用GH15、K及二者混合使用时的裂解能力和对菌血症小鼠的保护效果。【结果】通过电镜观察发现两个噬菌体的外形相似，但GH15的尾部比K的长。GH15裂解谱较宽，可以裂解28株金葡菌，而K仅能裂解7株金葡菌。通过对两株噬菌体感染7株共同宿主菌形成的一步生长曲线进行拟合曲线分析，表明二者对不同宿主菌的增殖趋势是不同的。在体外，混合噬菌体与单个噬菌体的抑菌活性无明显差别;在体内实验中，混合噬菌体表现出优于单个噬菌体的治疗效果，用较低的剂量即可以达到高剂量单个噬菌体的治疗效果。【结论】GH15 和K 所形成的混合噬菌体在治疗金黄色葡萄球菌感染具有更大的应用潜力。

摘要:摘要:【目的】建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)易感的猪CD151转基因PK-15细胞系，研究CD151分子在PRRSV感染猪源细胞中的作用。【方法】用RT-PCR从猪肺泡巨噬细胞中扩增CD151全长cDNA，测序正确后克隆入真核表达载体pcDNA3;用重组载体pcDNACD151转染PK-15细胞，经G418抗性筛选获得转基因细胞系PK15-CD151，用RT-PCR和免疫荧光试验检测CD151表达;用VR-2332株PRRSV分别感染PK-15细胞、PK15-CD151细胞、MARC-145细胞和3D4-CD163细胞，定期观察细胞病变，用RT-PCR和免疫荧光试验检测病毒RNA基因组和病毒抗原，用半数组织细胞感染剂量测定病毒滴度。【结果】从猪巨噬细胞中克隆得序列正确的猪CD151 cDNA;从重组载体转染的PK-15细胞培养中筛选得G418抗性细胞克隆，并能正确表达猪CD151分子;在PRRSV感染后，PK15-CD151细胞虽然不表现明显的细胞病变，但能检测到病毒RNA基因组和病毒抗原，并能产生较高滴度的感染性病毒;该细胞系已在体外传30代以上，第10、20、30代细胞的PRRSV滴度无明显变化。【结论】猪CD151基因转 染能使非易感PK-15细胞获得对PRRSV的易感性，提示猪CD151参与PRRSV感染猪源细胞。

摘要:摘要:【目的】为了了解无机盐与米根霉L-乳酸代谢之间的关系，提高米根霉菌株RLC41-6发酵产L-乳酸的产率与质量，研究了ZnSO4浓度与菌株乳酸代谢和细胞内乳酸脱氢酶活性的关系。【方法】在米根霉培养基中加入不同浓度ZnSO4，经过36℃培养36 h后，应用HPLC-反相色谱法测定产物中的L-乳酸含量，并利用活性PAGE分析法测定细胞内乳酸脱氢酶的活性和组成。【结果】实验结果显示，ZnSO4对除LDH1之外的其它几条同工酶都有促进作用，尤其对LDH4，LDH5作用明显，当ZnSO4浓度大于0.02%时，LDH4，LDH5达到最大水平，同时高浓度的锌离子在体外抑制了LDH的活性。当ZnSO4浓度为0.02%时LDH酶活达到最大200 U/mL，HPLC图谱表明，此时发酵产物的只有L-乳酸，且产量达到最大137g/L，乳酸转化率为91%。【结论】Zn+会影响米根霉的乳酸代谢过程，并导致发酵过程中产物类型的变化，合适浓度的ZnSO4在米根霉代谢产乳酸的过程中，提高了乳酸脱氢酶LDH的表达，抑制丙酮酸进入苹果酸和富马酸途径，从而有利于提高葡萄糖到乳酸的代谢。

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