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摘要:摘要:本文基于细菌I型整合子中整合酶与细菌耐药性的密切关系，对影响整合酶基因表达调控的因素，如抗生素、cAMP-CRP途径、Pc-P2结合体、attC位点、一些拟核蛋白以及可变区的长度等，进行了总结分析。为缓解当今社会环境面临的细菌耐药性趋势逐渐加剧的问题提供了新的思路和参考。

摘要:摘要:细菌的耐药性问题是目前医学临床面临的严峻问题，其中细菌生物被膜的形成是引起细菌持续性感染的主要致病机制之一。细菌生物被膜的形成过程十分复杂，受多种因子和多基因的共同调控，且不同的因子和基因在生物被膜形成的不同阶段所起的作用不同。本文重点对引起院内感染的主要致病菌葡萄球菌的生物被膜形成的基因调控机制，以及药物抑制葡萄球菌生物被膜的研究现状进行综述，旨在为解决医学临床中存在的细菌感染，研制抗生物被膜药物和疫苗等提供参考。

摘要:摘要:肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)可天然合成1，3-丙二醇、2，3-丁二醇和3-羟基丙酸等大宗化学品，是近年来的研究热点，但其致病性限制了工业应用。本文综述了该菌的毒力因子，包括菌毛、受体、荚膜多糖、内毒素、铁载体，以及近年报道的其他因子。具体内容涉及毒力因子的编码基因、表达蛋白、参与的代谢活动，以及侵染宿主和抗宿主免疫反应的机制。此外，根据近年来代谢工程和合成生物学领域的新进展，提出了消除或弱化该菌毒性的策略，并对这些策略的可行性进行了讨论。

摘要:摘要:【目的】确定引发北京地区油菜［Brassica campestris L．ssp．chinensis (L.) Makino var． communis Tsen et Lee］软腐病的病原。【方法】结合病原菌形态、BIOLOG 及生理生化、16S rＲNA 基因序列及亚种IGS区特征分析，对从北京大兴和通州区油菜软腐病样中病原菌进行生物学鉴定。【结果】分离的40 个菌株均能引发 油菜软腐病，但分别为胡萝卜果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum) 的2个不同亚种，其中13株为P．carotovorum subsp．carotovorum(Pcc)，另27株为P．arotovorum subsp． brasiliensis(Pcb)。接种白菜(Brassica campestris L．ssp．pekinensis)致病力测定分析表明，亚种内、来源相同与16S rRNA基因序列相同的菌株间均存在明显的致病力分化。【结论】Pectobacterium carotovorum subsp．carotovorum和Pectobacterium carotovorum subsp. brasiliensis是引发北京地区油菜软腐病的致病菌，后者为首次报道能引起白菜类蔬菜软腐病的常见致病菌。

摘要:摘要:【目的】在十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv． campestris，Xcc)的致病因子中，III型分泌系统(Type III Secretion System，T3SS)是至关重要的致病系统，III型效应物通过III 型分泌系统直接转运到寄主植物细胞内。本研究通过效应物水平转移的特征获得候选基因，旨在鉴定一个新的依赖于III型分泌的效 应物。【方法】以缺失了N-端58个氨基酸的AvrBs1作为报告系统构建效应物鉴定报告质粒pLJB3176，导入ΔavrBs1和ΔhrcV，通过检测报告菌株在辣椒ECW-10R上的过敏反应来鉴定XC3176是否为III型效应物。构建XC3176融合GUS报告质粒pLGUS3176，导入野生菌株Xcc 8004、ΔhrpG和ΔhrpX，通过测定菌株GUS活性检测hrpG、hrpX对XC3176 的调控作用。构建XC3176缺失突变体和互补菌株，通过剪叶法接种检测XC3176对Xcc 8004致病性的影响。【结果】XC3176融合AvrBs1报告菌株在非寄主辣椒ECW-10R上能 引发过敏反应，GUS活性检测显示ΔhrpG/pLGUS3176、ΔhrpX/pLGUS3176比8004/pLGUS3176的GUS酶活显著降低，致病性检测显示突变体Δ3176与野生型Xcc 8004相比在寄主满身红萝卜上的病斑长度有显著减少，互补菌株C3176 的病斑长度能补回到野生型水平。【结论】XC3176是依赖于hrcV分泌的III型效应物，hrpG、hrpX正调控XC3176，XC3176与Xcc致病相关。

摘要:摘要:【目的】从枯草芽孢杆菌基因组DNA中扩增出bglC基因并在大肠杆菌中表达，分析表达产物的酶学性质并进行结构模拟，为进一步研究其生理功能及结构解析奠定基础。【方法】将bglC基因克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达，通过定向进化获取水解效率提高的突变株，经Ni-NTA镍离子层析柱纯化后，测定野生枯草芽孢杆菌β-糖苷酶与突变酶的性质。利用CD光谱，非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及三维结构建模，分析野生酶与突变酶的高级结构。【结果】野生酶的比活力为9.7 U/mg，最适催化温度为60℃，最适pH值是7.0。经过突变和筛选，我们得到一个突变体BS-GLY_M1(A242T/T385A/S425L)，其比活力达到17.1 U/mg，最适温度为55 ℃，最适pH值是7.0，在55 ℃下的半衰期为3.5 h，比野生酶增加2 h。突变酶对4-硝基苯基-β-半乳糖苷、乳糖和熊果苷的催化效率(Km/Kcat)有所提高。酶在天然条件下以二聚体、四聚体状态存在，推测它以二聚体为基本功能单位。结构模拟结果表明突变后酶的三维结构有轻微地变化，这可能是酶热稳定性和催化效率提高的原因。【结论】枯草芽孢杆菌β-糖苷酶可以在大肠杆菌中高效表达并可以通过定向进化提高其水解效率。

摘要:摘要:【目的】克隆药用真菌猪苓NADPH氧化酶及乙二醛氧化酶基因并进行生物信息学分析。【方法】利用RACE技术取得基因cDNA全长;利用生物信息学在线工具预测蛋白的理化性质、结构域等分子特征;用Bioeditor和MEGA 5.0分别对氨基酸进行多序列比对和进化关系分析。【结果】克隆到PuNOX(JX035912)及PuGLOX(JX035913)。它们cDNA全长分别为1674 bp、1723 bp;分别编码557、515个氨基酸，相对分子质量分别为63.845 kDa、55.891 kDa，等电点分别为5.58、4.82。PuNOX与真菌NADH蛋白的一致性为74% －80%，系统进化树分析结果显示猪苓PuNOX与糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)亲缘关系较近;PuGLOX与真菌乙二醛氧化酶同源性较高，均大于50%;其系统进化树分析表明猪苓PuGLOX与黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)进化上最保守。【结论】药用真菌猪苓NADPH 基因PuNOX以及乙二醛氧化酶基因PuGLOX的分子特征为进一步研究其在猪苓菌核生长发育过程中的作用奠定理论基础。

摘要:摘要:【目的】为了探究青藏高原乳酸菌对垂穗披碱草发酵品质的影响。【方法】本试验将3株从青藏高原垂穗披碱草(Elymus nutans Griseb.)中筛选的耐低温乳酸菌(戊糖片球菌PP-6，植物乳杆菌LP-2和清酒乳杆菌LS-5)作为添加剂加入垂穗披碱草进行青贮，同时对其生理生化特性进行研究，并以低海拔条件下分离得到的相同菌种的商品化乳酸菌制剂为对照，研究所筛选的3 株优良乳酸菌在低温(15 ℃)和常温条件(25 ℃)下对垂穗披碱草青贮饲料发酵品质的影响。【结果】试验结果表明，在碳源利用方面，分离得到的戊糖片球菌PP-6(Pediococcus pentosaceus)发酵棉子糖、乳糖、山梨醇、蜜二糖和蔗糖，清酒乳杆菌LS-5(lactobacillus sakei)可发酵棉子糖、苦杏仁苷、鼠李糖、乳糖、山梨醇、木糖、阿拉伯糖、蜜二糖和蔗糖，而相同菌种的商品菌均不能利用，表明高原乳酸菌具有更广泛的糖源利用特性。将筛选得到的3株低温生长优良菌株进行青藏高原垂穗披碱草青贮发酵试验，青贮50 d后，与对照的商品菌处理相比，在15 ℃时，清酒乳杆菌LS-5显著降低了青贮饲料pH值、丙酸含量和氨态氮/全氮值(P＜0.05)，且能够保存更多的水溶性碳水化合物和粗蛋白;植物乳杆菌LP-2(lactobacillus plantarum)和戊糖片球菌PP-6作为复合添加剂显著提高了青贮饲料乳酸含量(P＜0.05)，显著降低了氨态氮/全氮值和中性洗涤纤维含量(P＜0.05)，能够保存更多的粗蛋白。但在25 ℃时，此3株菌与对照菌种相比均无明显优势。【结论】上述结果表明，从青藏高原分离筛选的3株菌种在低温条件下可有效提高青藏高原垂穗披碱草青贮饲料的发酵品质。

摘要:摘要:【目的】系统研究棉秆制浆废液用于培养具有生物防治功能的枯草芽孢杆菌的适宜条件和转化液的安全性。【方法】以初始pH值、温度、曝气量和接种量作为单因素，通过实验优化培养条件，并以大鼠和大耳兔作为测试动物，对转化液的安全性进行分析。【结果】结果表明，APMP棉秆制浆废液培养枯草芽孢杆菌的最适条件为:初始pH7.0，温度30℃，曝气量16 L/h，接种量0.8 g/L，反应器内加入填料，装填率为30%，在此培养条件下菌株的活芽孢数为6.27×109 CFU/mL，废液COD 转化率达70.4%。生物转化后，转化液的成分含量与转化前相比均有不同程度的下降。经4种毒性试验检测表明，未发现转化液的生物致病性。【结论】APMP 棉秆制浆废液可为枯草芽孢杆菌的生长和代谢提供必要的营养，可用于生物转化，且转化液为无刺激性、无毒性物质。

摘要:摘要:【目的】将环状芽孢杆菌251(Bacillus circulans 251)来源的环糊精葡萄糖基转移酶(Cyclodextrin Glycosyltransferase，CGTase)展示在酿酒酵母( Saccharomyces cerevisiae)细胞表面，构建全细胞催化剂生产2-O-α-D-吡喃葡萄糖基抗坏血酸(2-O-α-D-glucopyranosyl-L-ascorbic acid，AA-2G)，以提高AA-2G 的产量。【方法】将CGTase编码基因cgt连接到载体质粒pYD1中的a凝集素(a-agglutinin)Aga2p亚基基因的下游构建表面展示重组质粒pYD1-cgt，转化酿酒酵母EBY100获得重组菌EBY100-pYD1-cgt，对发酵条件(培养基、诱导温度和诱导剂半乳糖浓度)进行优化;同时先后对重组菌的发酵产酶以及表面展示CGTase的酶促合成AA-2G的条件进行了优化;进一步又比较了表面展示的CGTase与E.coli BL21发酵所得的游离CGTase在酶促制备AA-2G过程中副产物的积累情况。【结果】展示CGTase的酿酒酵母重组菌株以YPG培养基作为发酵培养基，诱导剂半乳糖初始添加浓度为20 g/L，经25 ℃诱导48 h后，表面展示CGTase最大酶产量为0.5 U/mL;表面展示CGTase 40 ℃条件下的温度稳定性比游离酶有所提高，pH稳定范围变宽。对表面展示的CGTase制备AA-2G转化条件的优化发现，其最适温度最适pH分别为30 ℃和4.5，转化48 h达到平衡，表面展示的CGTase制备AA-2G的产量较游离酶提高了37%。【结论】对于CGTase，a凝集素系统是一个有效的展示系统，构建的酿酒酵母全细胞催化剂用于酶促制备AA-2G时，产生的副产物葡萄糖可能被酵母细胞利用，从而降低了葡萄糖与VC的竞争作用使AA-2G的产量增加，该全细胞催化剂具有良好的应用前景。

摘要:摘要:【目的】揭示湛江地区海水虾池蛭弧菌类生物(Bdellovibrio-and-like organisms，BALOs)多样性特点，为了解BALOs在虾池生态系统中的作用与合理应用其防治养殖对虾细菌病害提供基础。【方法】从8个热带海水虾池采集水样，提取总DNA，利用BALOs科特异引物对水样总DNA进行扩增，通过构建16S rRNA基因克隆文库与系统发育分析，对虾池水体BALOs多样性和种群结构进行研究。【结果】从嗜盐噬菌弧菌科(Halobacteriovoracaceae)和吞菌弧菌科(Peredibacteraceae)克隆文库中分别获得726个和664个有效克隆子，在16S rRNA基因序列99.5%相似性水平上分别划分为68和44个OTUs(operational taxonomic units)。在16S rRNA基因序列97%相似性上，嗜盐噬菌弧菌可划分为37个种群，且绝大多数属于未培养型，但仅有的5个可培养类群占总文库克隆数量43.5%，其中可培养类群IX 和未培养类群B28分别是最优势和次优势者;吞菌弧菌文库共包含28个种群，未培养类群pa12最为优势，唯一可培养类群A3.12是第2优势者。嗜盐噬菌弧菌与吞菌弧菌多样性大小随盐度高低呈相反趋势，但两者合起来的总BALOs 多样性大小在不同虾池间则比较接近。【结论】湛江地区海水虾池中普遍存在高度多样的嗜盐噬菌弧菌和吞菌弧菌种群，盐度显著影响虾池BALOs种群结构组成。

摘要:摘要:【目的】了解云南盐矿中病毒样颗粒的多样性及特征，为丰富嗜盐菌病毒资源及其生态功能研究奠定基础。【方法】采用电子显微镜直接观察、双层平板分离纯化对云南5 个盐矿样品病毒的分布和形态特征进行比较研究。【结果】电镜观察病毒富集液表明，其中含有3种不同形态的病毒样颗粒(头尾形、丝状、球状)。同时，分离获得3株嗜盐细菌病毒，其中2株感染盐单胞菌(Halomonas sp.)，1株感染色盐杆菌(Chromoha lobacter sp.)，分别命名为QHHSV-1、YPHSV-1 及YPCPV-1。QHHSV-1形成边缘清晰、透明的噬菌斑，出斑时间约为8 h，培养24 h，其噬菌斑直径可达3 mm，电镜观察显示，QHHSV-1呈头尾形，头部直径约为47 nm，其尾部极易断裂，长约75 nm;YPHSV-1形成边缘清晰、透明的噬菌斑，出斑时间约为12 h，培养24 h，其噬菌斑直径可达1 mm，电镜观察显示，YPHSV-1呈头尾形，头部直径约为50 nm，尾长约为140 nm;YPCPV-1形成边缘模糊、透光亦不易见的噬菌斑，出斑时间约为72 h，培养96 h，其噬菌斑直径可达2－4 mm，电镜观察显示，YPCPV-1呈球形，是表面有突起的多态形病毒，大小为20－50 nm。

摘要:摘要:【目的】对1 株热带底栖硅藻———双眉藻(Amphora sp. HN08)的盐度和附着材料等培养条件进行优化。【方法】分析测定双眉藻在琼脂板、玻璃、PVC塑料板、塑料保鲜膜和尼龙网5种附着材料和6个盐度梯度(10‰–60‰)下处理9 d后的生物质产量、光合色素含量和细胞附着状态。【结果】双眉藻在玻璃板和PVC塑料板上的生物质产量最高，细胞干重达到3.64 g/m2;细胞在玻璃上的附着强度为III级，容易刮取和采用离心法脱水。盐度对双眉藻生物质产量无极显著影响，但对其附着性和光合色素含量有显著影响。盐度为30‰和40‰的培养液中，细胞的附着强度为IV级，易于离心采收;在50‰和60‰高盐度条件下的藻细胞多悬浮于培养基中，离心法较难采收。盐度大于30‰培养条件下的双眉藻类胡萝卜素含量极显著高于低盐条件下(10‰和20‰)，50‰盐度条件下的Chl a和类胡萝卜素含量可达干细胞重的26.27%和11.11%。【结论】从采收性和生物质量两方面考虑，双眉藻的最佳生长和采收培养条件为:附着材料选用玻璃板，盐度为30‰–40‰;然而综合安全性和成本考虑，建议将来生产上采用PVC塑料板作为附着材料。

摘要:摘要:【目的】为比较金黄色葡萄球菌黏附素分子聚集因子(ClfA)与纤连蛋白结合蛋白A(FnBPA)A区(FnBPA-A)及BCD区(FnBPA-BCD)的抗原性、抗体的黏附抑制特性及其免疫保护力。【方法】分别表达了ClfA蛋白、FnBPA-A和FnBPA-BCD蛋白，并将表达纯化后得到ClfA、FnBPA-A和FnBPA-BCD重组蛋白单独或联合免疫小鼠，收集免疫血清对其进行抗原性及免疫保护力的比较分析。【结果】结果显示，重组蛋白FnBPA-BCD对Fn的结合能力高于其对Fg的结合，而重组蛋白ClfA及FnBPA-A对Fg的结合能力高于FnBPA-BCD。血清抗体的检测结果表明，ClfA蛋白及FnBPA-A蛋白免疫组诱导抗体的水平均优于FnBPABCD组。3种蛋白联合免疫组的血清抗体效价及抗体抗黏附能力明显优于单一蛋白免疫组(P＜0.05)。3种蛋白联合免疫组与ClfA蛋白免疫组免疫保护率为100%，FnBPA-A组与FnBPA-BCD组免疫保护率分别为80%与50%。【结论】重组蛋白ClfA及FnBPA-A的免疫原性优于FnBPA-BCD，三者联合免疫较单一蛋白免疫在抗细菌的黏附、抗体诱导和免疫保护方面具有优势，提示这3种蛋白联合免疫有利于达到更好的免疫效果。

摘要:摘要:【目的】分析E.coli的EscI蛋白C-末端多肽诱导巨噬细胞NLRC4炎性体应答情况。【方法】以含有E.coli的EscI蛋白C-末端氨基酸序列的多肽为材料，通过体外导入小鼠腹腔巨噬细胞，分析细胞的应答情况。【结果】利用脂多糖预先刺激后，含有EscI蛋白C-末端15个氨基酸的多肽能够明显地激活细胞内NLRC4炎性体应答，细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 被激活，细胞发生pyroptosis，细胞培养上清中IL-1β和IL-18的含量增加(P＜0.05)。通过优化刺激条件发现，以多肽/脂质体为70 μg/μL的比例导入细胞并孵育4 h时，IL-1β的分泌量最高。【结论】含有E.coli的EscI蛋白C-末端15个氨基酸的多肽能够明显地诱导巨噬细胞NLRC4炎性体应答。

摘要:摘要:【目的】为了阐明烟草黑胫病菌的代谢表型特征。【方法】采用BIOLOG细胞表型芯片技术系统地研究了烟草黑胫病菌的细胞表型;采用PM1－10代谢板，对烟草黑胫病菌的950种代谢表型进行了测定。【结果】黑胫病菌能代谢74%的碳源、96%的氮源、100%的硫源和98%的磷源;高效代谢的碳源为有机酸类和碳水化合物类，高效代谢的氮源为氨基酸类;病原菌具有285种不同的氮源代谢通路;黑胫病菌具有广泛的适应性，能在高达1%氯化钠、3%氯化钾、5%硫酸钠、20%乙二醇、2%甲酸钠、5%尿素或2%乳酸钠中存 活;其适应pH 值范围为3.5－10，最适7.0;在多种氨基酸的作用下，烟草黑胫病菌均表现出脱羧酶和脱氨酶活性。【结论】这些代谢特征为烟草黑胫病菌进一步的生理和代谢研究提供了理论基础，并对烟草黑胫病的防治提供了新的思路。