摘要:[目的]鉴定及克隆新型隐球酵母（Cryptococcus neoformans）中Pol Ⅲ型的U6启动子（CnU6启动子），并验证CnU6启动子能否有效转录shRNA及CRISPR/Cas9系统中gRNA。[方法]结合GenBank数据库已公布的新型隐球酵母基因组信息和本实验室RNA-seq文库数据，利用生物信息学技术分析得到新型隐球酵母中具有高转录水平的U6 RNA序列。使用重叠PCR和EasyGeno方法将预测的CnU6启动子分别克隆到shRNA及gRNA的上游区域，通过观察shRNA对靶基因的RNAi效果及gRNA引导Cas9核酸酶对靶位点的切割结果，确定CnU6启动子能否转录短RNA。[结果]CnU6启动子能够转录形成shRNA对靶基因进行沉默，并且能转录形成gRNA引导Cas9核酸酶对靶点进行切割。[结论]新型隐球酵母的CnU6启动子被成功鉴定及克隆，它能有效驱动shRNA和gRNA的转录。

摘要:[目的] 初步探讨酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中Snf1/AMPK蛋白激酶影响细胞壁完整性的机制。[方法] 通过同源重组交换的方法,构建酿酒酵母Snf1/AMPK蛋白激酶催化亚基的敲除菌株snf1Δ,并通过基因回补对敲除菌株表型进行验证。在含有刚果红(Congo red)和荧光增白剂(Calcofluorwhite)的平板上检测snf1Δ菌株细胞壁的完整性,通过qRT-PCR的方法检测snf1Δ菌株中已知的细胞壁合成相关基因的表达情况。[结果] SNF1基因敲除影响细胞壁的完整性,并影响酿酒酵母对热激应答的反应。进一步研究发现,SNF1突变菌株中β-1, 3-葡聚糖合成相关基因与β-1, 6-葡聚糖合成相关基因的表达量均明显降低。[结论] 结果显示酿酒酵母Snf1蛋白激酶影响细胞壁的完整性,此影响发生在转录水平上,即通过调节细胞壁合成相关基因的转录来实现,揭示了Snf1蛋白的一个新角色。