摘要:摘要:【目的】黄曲霉毒素是一类强毒、致癌的真菌次级代谢产物。本文旨在筛选出能高效降解黄曲霉毒素B1(AFB1)的细菌。【方法】以AFB1结构类似物香豆素为惟一碳源进行AFB1降解菌株初筛，得到的活性菌株的培养液分别与AFB1标准品(2.5μg/mL)共同作用，以AFB1降解率为指标进行复筛。对降解活性最好的菌株通过形态、生理生化特性以及16S rRNA 序列分析进行初步鉴定;并对细胞浓度、pH、温度、金属离子等对菌株降解活性的影响进行考察。【结果】初筛获得了10 株在香豆素培养基上生长良好的细菌，复筛发现这些菌均具有良好的AFB1降解活性，其中从金毛羚牛粪便中筛选出的菌株F4 降解活性最好，去除AFB1能力达到90.03%。根据F4菌株16S rRNA 序列同源性分析，结合形态、生理生化特性，初步确定菌株F4 为施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)。F4 的降解活性与细胞浓度呈正相关。当pH 7.0，35℃，菌细胞作用72 h后毒素降解率达到82.91%。Mg2+可增强F4 的降解活性，降解率提高7.68%，而Cu2+可抑制其降解活性，降解率降低51.1%。【结论】筛选到能高效降解AFB1的施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)F4，F4 降解毒素的活性物质主要存在于菌体细胞，其作用受到温度、pH 等的影响，可能是一种胞内酶。

摘要:摘要：【目的】 确立基于高通量酶联免疫（HTS-ELISA）筛选方法制备高亲和力抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的方法体系。【方法】 采用AFM1-BSA （Aflatoxin M1-bovine serum albumin）免疫Balb/C小鼠，利用HTS-ELISA方法筛选分泌抗黄曲霉毒素 M1单抗的杂交瘤细胞株，并分析抗体的特性。【结果】筛选到14株具有分泌高活性抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，纯化的最佳抗体的亲和力为5.5×10-10 mol/L。与黄曲霉毒素M1及其结构类似物黄曲霉毒素M2、B1、B2、G1、G2以及其他物质脱氧雪腐镰刀菌烯醇和BSA的交叉反应率分别为100%、4.5%、21.5%、1.0%、16.6%、1.0%、0%、0%。间接竞争ELISA检测最低检测限可达0.01 μg/L，线性范围为0.1-10 μg/L，竞争性抑制抗体反应50%的抑制浓度IC50为0.82 μg/L，添加0.25-5 μg/L黄曲霉毒素的牛奶间接竞争ELISA检测回收率在60.3%-152.8之间。【结论】HTS-ELISA方法可以制备具有高亲和力的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，可为黄曲霉毒素M1免疫检测体系的建立提供优质抗体材料。

摘要:摘要：【目的】继杂交瘤技术后，重组抗体技术是新一代的抗体制备技术。然而如何用原核系统中较多地表达具有生物活性的单链抗体，避免包涵体形成仍是一个需要探讨的问题。【方法】将目的基因scFv-H4克隆到载体pET22b上，分别转入大肠杆菌BL21（DE3）和Origami（DE3）中，通过改变诱导温度和IPTG浓度，比较具有生物活性的蛋白量以及包涵体的量。【结果】在BL21（DE3）中，pET22b能产生大量表达scFv-H4，而BL21(DE3) 的含有trxA和gor双突变的衍生菌Origami（DE3）表达的scFv-H4的总量较少，但是具有生物活性的蛋白量较多（35 mg/L培养物），具有生物活性的蛋白比例也较BL21（DE3）高。另外IPTG的浓度对scFv-H4表达没有显著影响，而较高的诱导温度会促使表达的蛋白形成包涵体。【结论】在较低的温度下，pET22b能在Origami（DE3）能较好地表达具有生物活性的scFv-H4，减少包涵体的比例，为后续的抗体性质研究和改造奠定了基础。