摘要:摘要：【目的】Serpin在病原与宿主互作中起着重要的作用。本研究旨在分析在家蚕微孢子虫中的丝氨酸蛋白酶抑制剂蛋白（Serpin）的结构特征，原核克隆表达以及Western blotting检测。【方法】 基于家蚕微孢子虫全基因组序列，同源序列比对搜索获得serpin基因序列。利用在线软件分析基因的序列特征，ClustalX对氨基酸序列进行多重序列比对。构建含有GST标签的pGEX4T1-NbSPN106原核重组表达载体，在大肠杆菌BL21（DE3）诱导表达并进行纯化。纯化的重组蛋白免疫小鼠，制备抗体，并与家蚕微孢子虫总蛋白进行Western blotting免疫杂交。【结果】比对搜索在家蚕微孢子虫基因组中发现一个新的serpin基因NbSPN106。NbSPN106蛋白序列长度为384 aa，N端具有信号肽，编码一个42 kDa左右的成熟蛋白。多重序列比对说明NbSPN106具有保守的serpin位点，可能具有抑制功能。免疫杂交在家蚕微孢子虫总蛋白检测到一条45 kDa左右的特异条带。【讨论】生物信息学分析以及免疫杂交结果说明在家蚕微孢子虫中存在NbSPN106。这是在微孢子虫中首次报道发现serpin基因。对研究家蚕微孢子虫与宿主家蚕的互作具有一定的参考价值。

摘要:【目的】Frataxin 是铁硫簇相关蛋白，在线粒体代谢中起着重要作用。分析家蚕微孢子中该蛋白的结构特征，系统进化关系以及在孢子体内的转录翻译活性。【方法】基于家蚕微孢子全基因组序列，同源序列搜索获得该基因序列。进行蛋白二级结构比较，近缘物种共线性特征分析及系统进化树构建。此外构建pGEX-4T-1-Nbfra原核重组表达载体,转化E. coli BL21(DE3)进行目的蛋白表达纯化,以此为抗原免疫小鼠，制备抗体，并与家蚕微孢子总蛋白进行Western免疫杂交。【结果】Nbfra蛋白缺乏进入线粒体的信号序列，功能区缺乏部分a-螺旋；frataxin基因在不同微孢子基因组中的分布具有共线性特征，表明其在基因组进化中非常保守。系统进化分析显示微孢子形成独立进化支，并且与高等真核生物近缘，说明微孢子在进化地位上比其它原虫更加高等，支持了微孢子虫是真菌的姊妹枝的进化地位假说。【结论】免疫杂交结果表明Nbfra基因家蚕微孢子虫中能正常表达与翻译。本研究为微孢子的分类地位及线体假说提供了重要的补充依据。