摘要:分别以含铁培养基和限铁培养基培养4株兔多杀性巴氏杆菌JS、C51-2、C51-3及C51-17株，用刚果红结合试验初步分析铁调节外膜蛋白（IROMPs）表达情况，同时破碎菌体，提取外膜蛋白，经SDSPAGE比较这4株细菌在正常培养条件、富铁培养条件及限铁培养条件时外膜蛋白的表达差异，结果表明：限铁培养时，细菌表现出对刚果红染料较强结合性，且这4株巴氏杆菌均表达数种高分子量的IROMPs，主要有147 kD、135 kD、99 kD、94 kD、82 kD及72 kD蛋白带，4株之间存在一定的差异，而正常或富铁条件培养时均不表达上述条带。免疫印迹结果显示，正常条件培养的全菌（C5117株）抗血清中不含有针对IROMPs的抗体，限铁培养的C5117株IROMPs可诱导机体产生相应抗体，并且能与JS、C51.2及C51.3株的IROMPs发生抗原交叉性反应。同时用间接ELISA检测C51.17株3种IROMP（99 kD、94 kD和87.6 kD）的交叉抗体效价，结果这3种抗血清均与其它3株的产生较高的交叉抗体滴度。

摘要:多杀性巴氏杆菌是一种能感染多种动物甚至是人的重要革兰氏阴性病原菌。目前临床上用于多杀性巴氏杆菌诊断的分型方法主要包括血清学分型方法和分子分型方法。其中血清学分型方法主要基于免疫学实验技术建立，操作过程繁琐，技术要求高，工作量大，不适用于临床上大规模快速开展多杀性巴氏杆菌流行病学调查的需要；而基于分子生物学手段建立的分子分型方法相对于传统的血清学分型方法而言具有快速、简单、灵敏、灵活等特点，特别是某些分子分型方法与传统的分型方法形成了较为精确的对应关系，因而在临床上得到了广泛的应用。目前适用于临床上开展多杀性巴氏杆菌分离鉴定的分子分型方法主要包括多重PCR方法及多位点序列分型法（MLST），其中多重PCR方法又包括基于荚膜编码区及脂多糖外核编码簇建立的PCR方法。本文将重点就这3种常用的多杀性巴氏杆菌分子分型方法进行综述，介绍其建立原理、实现手段以及各自的优缺点，为临床上开展多杀性巴氏杆菌的流行病学调查特别是分子流行病学调查提供参考。

摘要:巴氏杆菌（主要是多杀性巴氏杆菌）可以引起多种动物疫病（巴氏杆菌病），同时也引起人类感染发病。[目的] 研究巴氏杆菌糖酵解酶对宿主细胞（兔肾细胞）和两种常见分子[纤连蛋白（fibronectin，Fn）和血浆纤维蛋白溶解酶原（plasminogen，Plg）]的黏附作用。[方法] 采用原核表达系统对多杀性巴氏杆菌的糖酵解酶进行表达并纯化及制备多克隆抗体，通过菌体表面蛋白定位检测、黏附与黏附抑制等实验探究巴氏杆菌糖酵解酶的黏附作用。[结果] 菌体表面蛋白检测结果显示除烯醇化酶和丙酮酸激酶外的7个糖酵解酶在多杀性巴氏杆菌表面存在。这7个糖酵解酶均能黏附兔肾细胞，但仅有磷酸葡萄糖异构酶的多克隆抗体能对多杀性巴氏杆菌黏附宿主细胞产生抑制作用。Far Western blotting结果显示9个糖酵解酶均能结合宿主Fn和Plg。招募抑制实验结果显示磷酸葡萄糖异构酶、醛缩酶、磷酸甘油酸变位酶的抗体对多杀性巴氏杆菌结合Fn和Plg都有抑制作用，磷酸果糖激酶、丙糖磷酸异构酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、磷酸甘油激酶抗体仅对多杀性巴氏杆菌结合Fn或Plg有抑制作用。[结论] 多杀性巴氏杆菌糖酵解酶成员葡萄糖异构酶、磷酸果糖激酶、醛缩酶、丙糖磷酸异构酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、磷酸甘油激酶、磷酸甘油酸变位酶在多杀性巴氏杆菌黏附宿主细胞或分子过程中发挥作用。该研究的完成将加深巴氏杆菌病分子发病机制的认识，并为巴氏杆菌病的诊断标识筛选、新型疫苗创制和药物靶标筛选等提供基础数据。

摘要:[目的]本研究旨在对引起犊牛呼吸道综合征的多杀性巴氏杆菌进行分离鉴定，分析其亲缘关系和毒力基因的分布情况。[方法]收集2017年8月至2018年4月疑似患有犊牛呼吸道综合征的病牛鼻拭子进行细菌分离培养，对菌落形态和染色疑似巴氏杆菌的菌株进行16S rRNA测序和血清型鉴定，选择巴氏杆菌7类23种毒力基因，筛查临床分离株的毒力基因的分布。[结果]从8个省份的237份病料中分离出31株多杀性巴氏杆菌，分离率为13.1%。16S rRNA测序分析表明31株A型多杀性巴氏杆菌属于同一亚群，其序列同源性与中国分离株HB01以及国外分离株USDA-ARS-USMARC-60712、USDA-ARS-USMARC-60214、ATCC 43137以及36950亲缘关系较近。对分离出的31株A型多杀性巴氏杆菌的7类共23种毒力基因鉴定，结果显示31株多杀性巴氏杆菌所携带的毒力因子大多分布在17-19个，且集中度较高。[结论]A型多杀性巴氏杆菌为犊牛呼吸道综合症的主要流行血清型，通过对多杀性巴氏杆菌的临床分离株进化树和毒力基因分析，内蒙古、黑龙江、新疆、山西以及河北的7株分离株进化来源于同一分支，且均缺失毒力基因tadD和hgbA及携带毒力基因hsf-1，提示着其亲缘关系可能与其携带的特定毒力基因存在一定相关性。该研究为犊牛呼吸道综合征的病原学调查和多杀性巴氏杆菌流行病学调查提供了参考数据。

摘要:摘要：【目的】本研究利用Asd+平衡致死系统构建表达巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin, PMT)的重组猪霍乱沙门氏菌株，并对重组菌株的生物学特性进行比较研究。【方法和结果】通过基因克隆的方法构建表达PMT的重组质粒pYA-PmtC，再将其电转化减毒猪霍乱沙门氏菌C500的asd基因缺失株C501，构建口服活疫苗菌株C501(pYA-PmtC)。研究结果表明重组菌株C501(pYA-PmtC)的生化特性、血清型和生长速度与亲本菌株C500一致；在没有选择压力的条件下，C501(pYA-PmtC)能够稳定遗传重组质粒及其外源基因片段，并能稳定、高效、分泌性表达30.5 kDa的外源保护性抗原rPmtC。C501(pYA-PmtC)腹腔感染BALB/c小鼠的LD50为8.5×106 CFU，毒力稍低于C500（LD50为4.4×106 CFU）；口服接种C501(pYA-PmtC)和C500的所有仔猪未见任何发病症状，两者没有显著差别。【结论】本研究利用Asd+平衡致死系统的原理构建表达T+Pm保护性抗原重组猪霍乱沙门氏菌弱毒菌株C501(pYA-PmtC)，为进一步开发猪萎缩性鼻炎-副伤寒的双价基因工程疫苗奠定基础。

摘要:将5个toxA基因片段N1518、C2345、N3172、N3388和C2115分别克隆到合适的原核表达载体pET-28a(b,c)系统, 其中pET28a-N1518和pET28b-C2115在大肠杆菌成功表达, 获得大小分别为57kDa和78kDa的融合蛋白rPMT-N和rPMT-C, Western blot检测证实两种表达产物均具有反应原性。分别以200μg rPMT-N和rPMT-C对小白鼠进行体内生物学活性试验, 结果两种表达蛋白均不能致死小白鼠; 体外细胞毒性试验证实896ng/mL的rPMT-N能使Vero细胞发生病变, 而rPMT-C对Vero细胞无明显毒性作用。将rPMT-N和rPMT-C制成亚单位疫苗, 同时设天然PMT及无菌PBS对照组, 间隔2周分2次皮下免疫小白鼠。二免后2周用8.2×105 CFU的HN-13株T+Pm进行腹腔攻毒, 结果rPMT-N组保护率为90.0%(9/10), rPMT-C组保护率为50.0%(5/10), 天然PMT组保护率为80.0%(8/10)。综上试验表明, rPMT-N具有良好的生物学活性和免疫原性, 可作为PAR疫苗添加成分, 显示了良好的应用前景。

摘要:摘要：【目的】比较体内外增殖禽多杀性巴氏杆菌荚膜蛋白、天然粘附蛋白Cp39和重组粘附蛋白rCp39对小鼠的交叉保护作用。【方法】用NaCl提取法制备鸡胚尿囊液和DSA培养基增殖的C48-3株荚膜蛋白，并用电洗脱方法纯化Cp39蛋白，将rCp39蛋白以可溶形式表达在大肠杆菌BL21后，用Amylose Resin亲和层析柱纯化。分别以100 μg剂量的鸡胚尿囊液增殖菌体荚膜蛋白、DSA培养基培养菌体荚膜蛋白、纯化的Cp39蛋白和rCp39蛋白通过皮下注射各试验组小鼠，生理盐水为对照组，第二次免疫后2周分别以A:1型菌C48-3株（6.7×102 cfu）和A:3型菌C51-3株（1.1×103cfu）进行攻毒试验。采集免疫后小鼠血清，用ELISA法检测抗体水平，并计算免疫保护率，来评价4种抗原对小鼠的交叉保护效果。【结果】SDS-PAGE结果显示，体内外增殖禽多杀性巴氏杆菌荚膜蛋白的条带和分子量相似，且体内外表达的Cp39蛋白的分子量相同；ELISA结果表明Cp39免疫组小鼠和rCp39免疫组小鼠血清rCp39蛋白特异性抗体的水平显著高于其他两组（P<0.05）；保护试验表明，体外增殖菌体荚膜蛋白免疫组小鼠对同源C48-3株和异源C51-3株攻毒的保护率分别为100%和60%，鸡胚尿囊液增殖菌体荚膜蛋白免疫组小鼠、Cp39免疫组小鼠和rCp39免疫组小鼠对同源C48-3株和异源C51-3株攻毒的保护率分别为100%和80%。【结论】粘附蛋白Cp39是禽多杀性巴氏杆菌荚膜蛋白中的主要交叉保护抗原，可以作为禽霍乱亚单位疫苗。

摘要:摘要:【目的】探讨ompH 基因在禽多杀性巴氏杆菌致病过程中的作用。【方法】利用同源重组原理构建中间为四环素抗性基因，两侧为ompH基因上下游同源序列同源的敲除载体pWSK29ΔompH，将敲除载体电击转入C48-3株感受态细胞中，通过四环素抗性和菌落PCR 筛选ompH 基因的敲除突变株，并通过组合PCR、逆转录PCR和DNA测序对突变株进行验证。用生物学功能实验比较野生株、互补株和突变株在生长速率、荚膜结构、粘着能力和致病性等方面的差异。【结果】组合PCR、逆转录PCR 和DNA 测序结果证实ompH基因的敲除突变株C48-3ΔompH构建成功，电镜观察结果证实ompH基因的缺陷影响细菌的荚膜合成能力，粘附实验结果显示与野生株C48-3和互补株C48-3C相比突变株C48-3ΔompH对CEF细胞的粘附能力显著降低(P＜0.01)，而小鼠毒力实验结果表明突变株C48-3ΔompH的致病性相对减弱。【结论】本实验构建的突变株C48-3ΔompH，为进一步研究多杀性巴氏杆菌的致病机理奠定基础。

摘要:摘要:【目的】构建多杀性巴氏杆菌aroA 基因缺失突变株，并验证其致病性。【方法】采用正向筛选同源重组技术构建多杀性巴氏杆菌aroA 基因缺失突变株，利用PCR 对突变株进行鉴定，分析其遗传稳定性、生长特性和致病性。【结果】成功构建多杀性巴氏杆菌aroA 基因缺失突变株，连续传代20代，遗传稳定;突变株体外生长曲线表明，在前6h 生长速度稍慢于亲本菌，随后两者生长速度一致。对小鼠的致病性试验表明:经腹腔注射aroA 基因缺失突变株在1.0×106 CFU对小鼠无致死性，而亲本菌株在1.0×102 CFU 对小鼠是致死性的。【结论】本研究获得多杀性巴氏杆菌aroA 基因缺失突变株，对小鼠的致病性是减弱的。多杀性巴氏杆菌突变株的构建有助于研究其致病机理。