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    • 缺失宿主Vta1蛋白的MIT结构域对杆状病毒AcMNPV复制的影响

      2019, 59(2):247-257.DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20180112CSTR: 32112.14.j.AMS.20180112

      关键词:草地贪夜蛾内吞分选转运复合体Vta1苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒
      摘要 (836)HTML (2585)PDF 1.84 M (1610)收藏

      摘要:[目的]克隆草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Vta1基因,检测Vta1在苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)复制中的作用。[方法]利用反转录-PCR与PCR方法筛选草地贪夜蛾Vta1基因及缺失Vta1 N-端MIT结构域的突变体并构建其瞬时表达质粒,通过转染Sf9细胞检测表达;构建Vta1及其突变体的双分子荧光互补表达质粒,并通过瞬时转染检测其与Vps4及ESCRT-III亚基Vps46与Vps60的相互作用;共转染gp64与Vta1及其突变体瞬时表达质粒,检测瞬时表达Vta1突变体对AcMNPV出芽型病毒产量及病毒基因启动子指导报告基因表达的影响。[结果]获得了草地贪夜蛾Vta1基因。氨基酸序列相似性分析表明,昆虫、酵母与人类Vta1同源蛋白的相似性分别约为20%与50%。Western blotting分析表明GFP标签的Vta1及其突变体均能在瞬时转染的Sf9细胞中表达。双分子荧光互补分析发现,缺失第1个或第2个MIT结构域显著降低Vta1突变体与Vps4、Vps46或Vps60的相互作用。此外,瞬时表达Vta1突变体显著降低了AcMNPV感染性出芽型病毒的产量,但并未影响AcMNPV ie1基因早期启动子和p6.9基因晚期启动子指导的LacZ和GUS报告基因的表达。[结论]Vta1可能参与杆状病毒AcMNPV子代病毒粒子的组装和/或出芽释放过程。

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