摘要:首次构建了能表达犬冠状病毒纤突糖蛋白（CCV S1）的重组犬2型腺病毒(CAV_2)。用RT_PCR方法从CCV DXMV株细胞培养物中扩增出编码S糖蛋白A、B、C和D 4个抗原位点的基因片段S1，将其克隆到pVAX1中，然后将含有CCV S1基因的完整表达盒（CMV_S1_PolyA）进一步定向克隆到含有CAV_2 E3区的穿梭质粒pVAXE3中，构建出pVAX△E3S1。通过SalⅠ+NruⅠ双酶切pVAX△E3S1回收含有目的基因的表达盒，将其克隆入含有CAV_2全基因组的骨架质粒pPoly2_CAV_2中，获得重组质粒pCAV_2_CCV_S1。ClaⅠ+AscⅠ酶切pCAV_2_CCV_S1释放重组基因组，转染MDCK细胞，获得了重组病毒CAV_2_S1。该重组病毒在MDCK细胞上能产生典型的腺病毒细胞病变。通过mRNA水平和Western blot检测，证实重组病毒能表达CCV S1蛋白。动物免疫试验表明，该重组病毒可以有效地诱导免疫犬产生抗CCV和CAV_2抗体。

摘要:取某养殖场健康狐狸（61份）、貉（24份）粪样，用套式PCR（RTnPCR）方法检测犬冠状病毒（CCV）并进行基因型鉴定。结果显示：狐狸粪样中有43份（70.5%）为CCVⅡ型阳性，29份（47.5%）为CCVⅠ型阳性,两型混合感染25份，占41.0%，两型总感染率为77.0%。24份貉粪样中， 22份为CCVⅡ型阳性(91.7%)， 其中16份为CCVⅠ型、Ⅱ型混合感染(66.7%)。分别取狐狸和貉粪样中CCVⅠ、Ⅱ型阳性PCR产物各2份（共8份）进行测序，均与CCV的M基因序列相符，证实PCR结果非假阳性。序列及系统进化分析表明，CCVⅠ型与源于意大利腹泻犬的CCVⅠ型（AF502583）同源性最高（96.7%～98.1%）；CCVⅠ、Ⅱ两种基因型同源性为 88.3%～89.7%，在进化树中处于两个大的分支上；同为CCVⅡ型，狐狸源与貉源序列也存在多个位点差异。首次在貉粪中检出CCV，证实在健康狐狸、貉群体中存在CCV流行，且CCVⅠ、Ⅱ型并存。

摘要:【目的】了解分析山东地区健康犬及腹泻犬中犬冠状病毒(CCoV)的分子流行病学及其基因型。【方法】采集2017年以来山东省宠物市场、流浪犬中心、犬舍、各地宠物医院等的健康和腹泻犬只的肛拭子样品，采用PCR方法检测CCoV及其CCoV-Ⅰ和CCoV-Ⅱ(CCoV-Ⅱa和CCoV-Ⅱb)基因分型情况，并对扩增出的M、S全基因进行测序分析。【结果】199份样品中，共检出CCoV阳性样品79份，健康犬中的检出率为40.2%(33/82)，腹泻犬中的检出率为39.3%(46/117)。健康犬中CCoV-Ⅰ型与CCoV-Ⅱ型阳性检出率分别为78.8%(26/33)和51.5%(17/33)；腹泻犬中CCoV-Ⅰ型与CCoV-Ⅱ型阳性检出率分别为39.13%(18/46)和80.4%(37/46)。基因型阳性比率分析表明，健康犬中单独感染CCoV-I型的比率最高，为48.5%(16/33)；腹泻犬中单独感染CCoV-Ⅱa比率最高，为47.8%(22/46)。测序分析获得48株M基因序列，遗传进化分析表明，12株CCoV-Ⅰ型毒株中除1株外，其余均从健康犬中分离。36株CCoV-Ⅱ型毒株中除7株来自健康犬外，其余均为腹泻犬中获得。获得的3株S全基因均来自腹泻犬且均属于CCoV-Ⅱa亚型。【结论】山东地区犬群中CCoV检出率较高，说明CCoV广泛流行，健康犬和腹泻犬中均存在多重感染情况，健康犬中主要流行CCoV毒株为CCoV-Ⅰ型，腹泻犬中主要流行CCoV-Ⅱa型。