摘要:炭疽毒素包括3种蛋白因子，即保护性抗原（PA）、致死因子（LF）和水肿因子（EF）。EF是钙调蛋白依耐的腺苷酸环化酶，可使细胞cAMP浓度升高，导致宿主防御能力下降。为深入研究炭疽毒素的作用机理，构建了原核表达质粒，在大肠杆菌中表达出重组EF（rEF）。经鉴定，rEF以可溶形式表达于细菌胞质中。经过金属螯和层析、阳离子交换层析和凝胶层析，每升诱导培养物可获得约5mg 重组蛋白。用重组蛋白免疫家兔获得了兔多抗，能够在细胞试验中中和rEF，体外细胞试验显示rEF具有很好的生物活性，在J774A.1和CHO细胞试验中，能与LF共同竞争和PA的结合位点，相互抑制。上述工作为深入研究炭疽毒素的作用机理，开发针对EF的毒素抑制剂打下基础

摘要:使用分泌型表达质粒，实现了重组炭疽致死因子（rLF）在大肠杆菌周质腔中的分泌表达。表达量约占菌体总蛋白的4%。经过离子交换和凝胶过滤纯化，每升诱导培养物可获得约3mg电泳纯的rLF。蛋白N端测序表明，rLF序列与天然炭疽LF一致。体外细胞毒性试验亦显示rLF具有很好的生物活性。rLF的成功表达为今后研究LF的作用机理、发展新型炭疽疫苗、筛选针对炭疽致死毒素的抑制剂打下基础。

摘要:摘要:【目的】建立能够稳定表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，Mtb)分泌蛋白EspB(Rv3881c)的RAW264.7细胞系，为研究EspB 蛋白在调控巨噬细胞功能中所起的作用提供科学依据。【方法】首先成功构建的重组质粒pEGFP-C1-EspB，然后将重组载体pEGFP-C1-EspB和空载体pEGFP-C1以脂质体介导的方法转染至小鼠巨噬细胞RAW264. 7 中，经过G418 筛选后建立稳定表达EGFP-EspB 融合蛋白以及EGFP的细胞系，并通过RT-PC

摘要:摘要:【目的】研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)分泌蛋白ESAT-6 (early secreted antigenic target of 6 kDa)对巨噬细胞吞噬功能的影响。【方法】用重组质粒pFLAG-ESAT-6和pFLAG-EGFP 转染RAW264.7细胞，经G418筛选，PCR、RT-PCR和Western blot鉴定，获得稳定表达flag-ESAT-6和flag-EGFP的RAW细胞系，然后用流式细胞术观察各稳转细胞系吞噬荧光微球的能力，并用共聚焦显微镜和菌落计数法检测稳转细胞系吞噬大肠杆菌(Escherichia coli)的能力。【结果】获得了稳定表达flag-ESAT-6 的RAWE6细胞系和表达flag-EGFP的RAW-EGFP细胞系;流式细胞术检测结果表明RAW-E6吞噬荧光微球的能力显著强于野生型细胞系RAW264.7和对照细胞系RAW-EGFP;菌落计数和激光共聚焦分析表明RAW-E6细胞系吞噬E.coli的能力也显著强于RAW264.7和RAW-EGFP。【结论】通过胞内表达发现结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6能够增强巨噬细胞的吞噬功能，这将为深入理解结核分枝杆菌的致病机制提供新的思路。