摘要:[目的] 探究丙酮丁醇梭菌半胱氨酸合成代谢途径上铁氧还蛋白和胱硫醚-γ-裂解酶基因的功能。[方法] 使用ClosTron系统对半胱氨酸合成途径上的铁氧还蛋白基因（fer）和胱硫醚-γ-裂解酶基因（mccB）进行失活，得到突变株；在不同硫源的培养基中进行分批发酵，分析突变株的生长特点；通过pH控制，使用限磷的连续发酵方法将丙酮丁醇梭菌维持在产酸期和产溶剂期，分析野生型菌株和突变株在连续发酵中的生长情况。[结果] 成功构建Δfer和ΔmccB突变株。在分批发酵中，敲除fer基因的突变株无法利用硫酸盐作为硫源，但添加亚硫酸盐或半胱氨酸可以使其恢复生长；在以半胱氨酸为唯一硫源进行分批发酵时，其终浓度1 mmol/L时不会影响野生型与Δfer突变株的生长，但高于1 mmol/L时生长均会受到抑制。在连续发酵中，Δfer突变株不能在产溶剂阶段生长，添加过量的半胱氨酸也不能恢复生长；敲除mccB基因的突变株仍能在添加甲硫氨酸的培养基中生长，但最大OD仅为野生型的57%；相较于野生型，ΔmccB突变株在产酸期和产溶剂期的生长均受到抑制。[结论] fer基因为半胱氨酸合成途径中硫酸盐还原为亚硫酸盐的关键基因，其控制合成的半胱氨酸不能完全由外源的半胱氨酸替代，敲除后对生长的抑制主要表现在连续发酵中的产溶剂阶段。mccB基因参与调控甲硫氨酸转化为半胱氨酸的过程，其敲除会影响甲硫氨酸到半胱氨酸的转化，但不会阻断该生物反应过程。