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    • 食品级分泌表达载体的构建及报告蛋白在乳酸乳球菌中的表达

      2008, 48(3):293-298.

      关键词:乳酸乳球菌 p32启动子 食品级载体 分泌性表达 报告蛋白
      摘要 (1960)HTML (0)PDF 0.00 Byte (4012)收藏

      摘要:为构建乳酸乳球菌食品级分泌表达载体, 通过PCR扩增质粒pMG36e的p32启动子片段及乳酸乳球菌MG1363未知分泌蛋白(Usp45)基因的核糖体结合位点、分泌信号肽和成熟肽前11个氨基酸的编码序列(SPusp45), 克隆到食品级载体pSH91中, 构建食品级分泌性表达载体pSQ; 克隆报告基因金黄色葡萄球菌核酸酶(NucA)成熟肽的编码序列nucA到pSQ中分泌信号后, 转化乳酸乳球菌MBP71, 构建了乳酸乳球菌食品级分泌性表达系统L lactis/pSQ-nucA; 通过TB-D法和酶谱法检测 L lactis/pSQ-nucA的表达形式、表达量并与以前构建的L lactis/pSQZ-nucA系统表达能力进行比较, 结果发现L lactis/pSQ-nucA能够分泌性表达NucA, 分泌性表达的NucA量大约是胞内NucA的10倍; L lactis/pSQ-nucA的表达量高于lactis/pSQZ-nucA。为进一步目的蛋白的的分泌性表达及食品级疫苗的研制奠定了基础。

    • 乳酸乳球菌食品级诱导表达系统的构建及异源蛋白的表达

      2007, 47(4):604-609.

      关键词:乳酸乳球菌 食品级载体 诱导表达系统 融合外膜蛋白
      摘要 (548)HTML (0)PDF 0.00 Byte (83)收藏

      摘要:以α-aga基因为食品级选择标记构建了乳酸乳球菌食品级高效诱导细胞内和细胞壁锚定表达系统,并用这一表达系统表达了铜绿假单胞菌融合外膜蛋白基因OprF/H。首先以pRAF800和pNZ8048构建了含有α-aga、PnisA-MCS-TpepN和θ复制子的乳酸乳球菌食品级细胞内诱导表达载体pRNA48,再以pRNA48和pVE5524为出发载体构建了含有α-aga、PnisA-SPUsp45-nucA-CWAM6-t1t2和θ复制子的乳酸乳球菌细胞壁锚定诱导表达载体pRNV48。然后以食品级载体pRNA48和pRNV48为基础,构建了不含抗生素抗性选择标记的铜绿假单胞菌融合外膜蛋白基因的表达质粒pRNA48-OprF/H和pRNV48-OprF/H。利用nisin进行重组乳酸乳球菌菌株的诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot分析,检测到表达蛋白分别占细胞内可溶蛋白的9.6%和细胞壁锚定蛋白的9.8%,表达产物具有免疫原性,可与含OprF/H的乳球菌以及铜绿假单胞菌发生特异性的凝集反应。

    • 乳酸乳球菌食品级诱导表达系统的构建及异源蛋白的表达

      2007, 47(4):604-609.

      关键词:乳酸乳球菌 食品级载体 诱导表达系统 融合外膜蛋白
      摘要 (1022)HTML (0)PDF 0.00 Byte (2685)收藏

      摘要:以α-aga基因为食品级选择标记构建了乳酸乳球菌食品级高效诱导细胞内和细胞壁锚定表达系统,并用这一表达系统表达了铜绿假单胞菌融合外膜蛋白基因OprF/H。首先以pRAF800和pNZ8048构建了含有α-aga、PnisA-MCS-TpepN和θ复制子的乳酸乳球菌食品级细胞内诱导表达载体pRNA48,再以pRNA48和pVE5524为出发载体构建了含有α-aga、PnisA-SPUsp45-nucA-CWAM6-t1t2和θ复制子的乳酸乳球菌细胞壁锚定诱导表达载体pRNV48。然后以食品级载体pRNA48和pRNV48为基础,构建了不含抗生素抗性选择标记的铜绿假单胞菌融合外膜蛋白基因的表达质粒pRNA48-OprF/H和pRNV48-OprF/H。利用nisin进行重组乳酸乳球菌菌株的诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot分析,检测到表达蛋白分别占细胞内可溶蛋白的9.6%和细胞壁锚定蛋白的9.8%,表达产物具有免疫原性,可与含OprF/H的乳球菌以及铜绿假单胞菌发生特异性的凝集反应。

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