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    • 大肠杆菌O11 O-抗原基因簇序列的破译及特异分子标识的鉴定

      2006, 46(3).

      关键词:大肠杆菌O11;O抗原基因簇;分子分型;特异基因;探针
      摘要 (676)HTML (0)PDF 0.00 Byte (2234)收藏

      摘要:大肠杆菌O11是一种可在人畜间交叉传染的强致病菌,具有潜在流行性爆发的危险。现完成了O11 O抗原基因簇的破译,筛选和鉴定了多种特异分子标识,并实现了对大肠杆菌O11的快速、灵敏和准确的分子分型检测。利用鸟枪法测定大肠杆菌O11 O抗原基因簇的序列全长为14180bp,生物信息学方法分析序列结构,共发现12个基因:GDPL型岩藻糖合成途径基因 (gmd, fcl, gmm, manC, manB)、UDPN乙酰葡萄糖C4异构酶基因(gne)、O抗原转运酶基因(wzx)、O抗原聚合酶基因(wzy)和4个糖基转移酶基因;用PCR方法筛选出2个针对大肠杆菌O11的特异基因和4对特异引物,并进行环境样品检测实验鉴定了该PCR检测方法的灵敏度;设计并筛选出8条针对大肠杆菌O11的特异探针。

    • 广州地区嗜肺军团菌环境分离株的基因序列分型分析

      2011, 51(3):320-325.

      关键词:关键词: 嗜肺军团菌,基于基因序列分型,分子分型
      摘要 (1525)HTML (0)PDF 1022.85 K (1559)收藏

      摘要:摘要:【目的】研究广州市嗜肺军团菌的基因特征,对来自不同水域环境的嗜肺军团菌进行分子分型研究。【方法】选择嗜肺军团菌的7个基因flaA、asd、mip、pilE、mompS、proA和neuA 作为目的基因, 对在2006-2009年间广州地区分离的44株嗜肺军团菌进行PCR扩增和测序,并将核苷酸序列上传至欧洲军团菌病感染工作组(EWGLI)数据库进行比对,得到基因型别(Sequence type, ST),对结果进行基因序列分型(Sequence-Based Typing, SBT)和系统进化分析。【结

    • 空肠弯曲菌脉冲场凝胶电泳分子检测方法的建立及应用

      2009, 49(4):531-535.

      关键词:关键词:空肠弯曲菌;脉冲场凝胶电泳;分子分型
      摘要 (1395)HTML (0)PDF 414.42 K (1762)收藏

      摘要:摘要:【目的】建立空肠弯曲菌脉冲场电泳(pulsed-field gel electrophoresis, PFGE)图谱分型方法。【方法】在PFGE基本程序基础上,通过调整菌液浓度、Seakem Gold○R琼脂糖凝胶浓度、蛋白酶K浓度、洗涤方式和限制性内切酶SmaⅠ浓度,进行程序的比较与优化。应用PFGE技术对不同来源分离株进行分析。【结果】37株空肠弯曲菌脉冲场凝胶电泳图谱显示分离株均产生了6-24条电泳带,条带数量适中,清晰易读;系统进化树显示,可分为4个遗传谱系,分离株主要分布于PFGE遗传谱系

    • 炭疽芽胞杆菌中CRISPR位点

      2014, 54(11):1362-1368.DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.2014.11.014CSTR: 32112.14.j.AMS.2014.11.014

      关键词:关键词:规律成簇间隔短回文重复序列,炭疽芽胞杆菌,分子分型
      摘要 (1700)HTML (0)PDF 1.26 M (2066)收藏

      摘要:摘要:【目的】考察炭疽芽胞杆菌中规律成簇的间隔短回文序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)位点多态性情况及基于CRISPR 位点多态性的分子分型方法是否在炭疽芽胞杆菌分型中适用。【方法】下载NCBI 数据库中6株炭疽芽胞杆菌基因组并截取其中CRISPR位点片段序列。根据炭疽芽胞杆菌内CRISPR位点信息,设计相关引物,以193株炭疽芽胞杆菌基因组为模板PCR扩增CRISPR位点片段,测序。本地Blast比对截取序列及测序结果,查看CRISPR位点在炭疽芽胞杆菌中的多态性情况,并比较炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌内CRISPR位点情况。【结果】炭疽芽胞杆菌内CRISPR位点不存在多态性。【结论】基于CRISPR位点多态性的分子分型方法不适用于炭疽芽胞杆菌分型,但可以用于区分炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌。

    • 多位点序列分型分析空肠弯曲菌华东动物源分离株

      2010, 50(3):298-303.

      关键词:关键词:空肠弯曲菌;MLST;分子分型
      摘要 (2494)HTML (0)PDF 998.89 K (4649)收藏

      摘要:摘要:【目的】研究空肠弯曲菌菌株间的分子特征,对不同宿主来源的空肠弯曲菌进行分子分型研究。【方法】选择空肠弯曲菌的7个看家基因gltA、aspA、glnA、glyA、pgm、tkt和uncA作为目的基因,对2006?2008年间华东地区分离的42株空肠弯曲菌样本进行PCR扩增后测序。将测序结果软件分析并上传到数据库进行比对,将结果制作多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)遗传进化树并进行分析。【结果】与数据库已有类型比对,发现了24个新的ST型,通过进化树得到其遗传关系。【结论】MLST方法对于研究空肠弯曲菌的菌株群体基因差异与进化趋势具有重要意义。

    • 多杀性巴氏杆菌分子分型方法简述

      2016, 56(10):1521-1529.DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20160002CSTR: 32112.14.j.AMS.20160002

      关键词:多杀性巴氏杆菌分子分型方法多重PCR多位点序列分型
      摘要 (1060)HTML (817)PDF 988.11 K (4630)收藏

      摘要:多杀性巴氏杆菌是一种能感染多种动物甚至是人的重要革兰氏阴性病原菌。目前临床上用于多杀性巴氏杆菌诊断的分型方法主要包括血清学分型方法和分子分型方法。其中血清学分型方法主要基于免疫学实验技术建立,操作过程繁琐,技术要求高,工作量大,不适用于临床上大规模快速开展多杀性巴氏杆菌流行病学调查的需要;而基于分子生物学手段建立的分子分型方法相对于传统的血清学分型方法而言具有快速、简单、灵敏、灵活等特点,特别是某些分子分型方法与传统的分型方法形成了较为精确的对应关系,因而在临床上得到了广泛的应用。目前适用于临床上开展多杀性巴氏杆菌分离鉴定的分子分型方法主要包括多重PCR方法及多位点序列分型法(MLST),其中多重PCR方法又包括基于荚膜编码区及脂多糖外核编码簇建立的PCR方法。本文将重点就这3种常用的多杀性巴氏杆菌分子分型方法进行综述,介绍其建立原理、实现手段以及各自的优缺点,为临床上开展多杀性巴氏杆菌的流行病学调查特别是分子流行病学调查提供参考。

    • 苯唑西林敏感、mecA基因阳性的猪源金黄色葡萄球菌的流行、分子分型及耐药性研究

      2021, 61(11):3607-3618.DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20210086CSTR: 32112.14.j.AMS.20210086

      关键词:OS-MRSA毒素编码基因耐药性分子分型
      摘要 (556)HTML (1686)PDF 649.82 K (1163)收藏

      摘要:[目的] 为了解我国猪源苯唑西林敏感-mecA阳性金黄色葡萄球菌(Oxacillin-susceptible,mecA-positive Staphylococcus aureus,OS-MRSA)的流行情况、菌株分子特征及耐药性,本研究对我国中西部4个省份(甘肃、陕西、河南和广西)的9个规模化养猪场进行鼻腔拭子样本采集。[方法] 运用PCR扩增nuc和mecA基因及苯唑西林耐药性检测对OS-MRSA菌株进行分离鉴定。然后对分离所得的OS-MRSA菌株进行26种毒素编码基因、16种抗生素耐药性以及spa、MLST和SCCmec分型检测。[结果] 结果表明,采集的884份样本中,67份样本7.6%(67/884)分离到金黄色葡萄球菌,包括50株甲氧西林敏感菌株(Methicillin-sensitive Staphylococcus aureus,MSSA)、8株苯唑西林耐受-mecA阳性金黄色葡萄球菌(Oxacillin-resistant mecA-positive,OR-MRSA)和9株OS-MRSA菌株。26种被检毒素编码基因中有9种毒素编码基因被检出,其中hla基因检出率最高,其次为hld、hlb、hlg、sei、sem、seg、sen和seo。此外,67株分离株中仅有16株携带肠毒素编码基因,其中OR-MRSA和OS-MRSA菌株分别占37.5%(6/16)和50.0%(8/16),且携带毒素编码基因的菌株克隆型均为ST9-t899。16种所测试抗生素中,菌株对12种抗生素表现为耐药,其中MSSA、OR-MRSA和OS-MRSA分离株分别主要对1-8、10-12和7-11种抗生素耐药。所有分离株共有4种克隆型ST398-t571、ST9-t899、ST398-t034和t11241,其中ST9-t899为MRSA菌株唯一克隆型和ST398-t571为MSSA优势克隆型。除4株分离株未检测到SCCmec分型外,IVb(76.5%,13/17)是MRSA分离株的唯一分型。[结论] 结果表明,我国猪源MRSA分离株对苯唑西林药物敏感性发生了改变,出现了较多的苯唑西林敏感菌株。此外,MSSA和MRSA分离株优势克隆型分别为ST398-t571和ST9-IVb-t899。研究还发现,克隆型与毒素编码基因有显著相关性,携带毒素编码基因的菌株克隆型均为ST9-t899。通过了解我国猪源MSSA、OR-MRSA和OS-MRSA的流行、分子特征和耐药性,可以为我国猪源金黄色葡萄球菌的防控提供数据支持。

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