摘要:采用四环素次抑菌浓度对嗜水气单胞菌进行选择，筛选得到耐四环素的嗜水气单胞菌菌株，其MIC（最低抑菌浓度）为出发菌株的8倍。通过比较对照菌与耐药菌总蛋白质的双向电泳图谱，获得3个差异显著的蛋白点。对这3个差异蛋白质进行肽质量指纹及其生物信息分析，分别鉴定为核糖体小亚基蛋白、药物排出系统蛋白和乙酸乙酰辅酶A转移酶亚基。文中对嗜水气单胞菌耐四环素的机理进行了初步探讨。

摘要:分别用质粒pJJ699与pUC19(vhb)，pIJ702与pBR322(vhb)，构建大肠杆菌链霉菌穿梭质粒，将透明颤菌血红蛋白基因转入金色链霉菌。在低溶解氧浓度下，透明颤菌血红蛋白的表达，可提高金色链霉菌氧的利用效率，产物合成比原始菌株提高40%～60%。在局部低氧的环境中，采用四环素抗性基因启动子带动血红蛋白基因表达，可有效发挥透明颤菌血红蛋白的氧传递效率，优于透明颤菌血红蛋白基因受溶解氧调控的天然启动子。

摘要:用DNA体外重组技术，将嗜热硫扦菌(Thiobacillus sp．)染色体DNA的Hind III片段插人启动子探测质粒pSDSI(Apr、Tc2)的Hind III位点，在四环素平板上获得一批转化子。四环素抗性能力测定表明，有12个转化子可以在含240／μg／ml四环素的平板上生长，有2个可以在360μg／ml的四环素平板上生长，对这二个抗性表达能力较高、分子量较小的质粒pSDH7和pSDH11作了限制性酶切图谱分析，并利用PstI位点，通过亚克隆将pSDH11插人片段上的启动子定位在0．25kb片段内。分子杂交实验证明克隆的启动子活性片段确实来源于嗜热硫杆菌染色体DNA。

摘要:【目的】在次抑制浓度四环素条件下，研究铜绿假单胞菌phzA1操纵子的调节基因及调节途径。【方法】对转座突变库中phzA1操纵子表达发生变化的突变体，进行随机PCR、基因测序及比对，确定突变位点。并以发光杆菌的荧光素酶基因操纵子luxCDABE为报道基因，研究基因调节作用及调节路径。【结果】在两株突变体PAM0487和PAM0487R中phzA1操纵子的表达降低，这两株突变体的突变基因确定为假定钼元素转运蛋白调节子PA0487基因。【结论】PA0487是phzA1操纵子表达的一个新的正向调节子，并对密度感应系统相关基因的表达有调节作用。

摘要:【目的】抗生素作为新兴污染物,已经引起社会的极大关注。针对四环素有效降解菌株缺乏这一现状,本研究旨在筛选和鉴定具有降解四环素功能的菌株,分析其降解特性和降解作用类型、初步探讨其降解活性物质定位并评估其降解产物的生理毒性。【方法】以四环素为唯一碳源,从受四环素污染的猪场污泥中筛选四环素降解菌株;结合菌落形态学特征、生理生化特征、扫描电镜观察和16S rRNA基因测序鉴定菌株,通过不同外源碳、pH及去除动力学阐明菌株对四环素的降解特性,提取菌株不同成分探讨其去除四环素的作用类型,并进一步从细胞内液和细胞外液开展生物降解的活性物质定位,最后评估降解产物的生理毒性。【结果】筛选鉴定得到一株霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei) MEH2305,pH为7.0和添加10 g/L外源碳胰蛋白胨是其发挥降解作用的最适条件。MEH2305通过非生物降解和生物降解的共同作用,在培养第7天对四环素总去除率达到68% (对土霉素和盐酸强力霉素去除率分别为53%和56%),其分泌的细胞内液和细胞外液对四环素的去除率分别为40.77%和31.18%。同时,与未经MEH2305处理的四环素对照组比较,MEH2305降解四环素的产物对革兰氏阴性大肠杆菌(Escherichia coli) K88和革兰氏阳性枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 168的生理毒性作用显著降低。【结论】MEH2305可以作为一株潜在的有效且安全的四环素降解菌株,应用于抗生素的环境治理领域。

摘要:[目的] 初步探讨利用四环素类药物体外诱导嗜水气单胞菌耐药后,嗜水气单胞菌对四环素类药物敏感性的变化及其耐药机制。[方法] 筛选临床分离嗜水气单胞菌的四环素类敏感株,从含有1/4×MIC的强力霉素的TSA固体培养基开始,等比2倍提高诱导药物质量浓度对受试菌进行连续传代培养,以获得高耐诱导株;测定诱导菌对强力霉素和16种非诱导药物的最小抑菌浓度(MIC)及添加外排泵抑制剂N-甲基吡咯烷酮(NMP)后的MIC,分析其敏感性变化与外排作用的关系;提取诱导菌的DNA,PCR扩增其5个tet基因并测序。[结果] 诱导后菌株对强力霉素的MIC显著升高,对非诱导四环素类药物也有不同程度提高,对氟喹诺酮类药物的MIC比诱导前增加几十至上千倍;对氨基糖苷类药物和利福平的MIC则有不同程度的降低;添加NMP后,所有诱导菌株对强力霉素的MIC值均有不同程度的下降;四环素类耐药基因的检测结果表明,在诱导后7号菌株中同时检测到tetA和tetE;在诱导前后的2号菌株中检测到tetC;在诱导前后的1、3、4、5、6、7号菌株中均检测到tetE。[结论] 本研究表明tetE基因可能是介导气单胞菌分离株对四环素类药物耐药的优势基因,为阐明嗜水气单胞菌对四环素类药物耐药机制及耐药性与耐药基因之间的关系提供理论依据。

摘要:[目的] 探究环境中同时存在低浓度四环素（tetracycline，TC）和3，4-苯并芘（benzo [a] pyrene，Bap）对抗性基因tetA（C）产生高抗性突变的影响。[方法] 以大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）为宿主菌株，pACYC184质粒作为载体，四环素抗性基因tetA（C）作为研究对象，采用易错PCR构建基因文库的方法，建立基因突变位点对应高抗性的关系密码表。同时设置添加低浓度TC且添加0-30 mg/L Bap以及仅添加0-30 mg/L Bap的处理组，培养携带pACYC184质粒的大肠杆菌14 d，每组中随机挑选10株获得高抗性的菌株，对其中的tetA（C）基因片段进行测序，再结合突变位点密码表，计算高抗性菌株中由基因突变产生高抗性菌株的比例。[结果] 测序结果显示在低浓度TC选择压力下，Bap浓度越高时，高抗性基因突变株占的比例也越高（P ≤ 0.01），而不添加TC时，Bap浓度与高抗性基因突变株占比之间无变化规律（P>0.05）。[结论] 当环境中同时存在Bap和低浓度TC时，高抗性突变基因易于通过选择压力保存下来。

摘要:【目的】探究土壤中四环素残留对土培黄豆芽的生长发育、根际微生物及营养品质的影响，为正确评估抗生素残留对蔬菜种植业的影响及制定土壤-蔬菜系统中抗生素污染防控策略提供理论基础。【方法】模拟土壤中不同四环素残留水平(0、25、50 mg/kg)，采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)方法测定黄豆芽中的四环素残留量、理化方法测定黄豆芽的营养品质、高通量技术测定根际微生物群落。【结果】黄豆芽中四环素累积量随土壤中四环素残留量的增加而增加，累积量分布表现为根>下胚轴>子叶；四环素残留显著抑制黄豆芽的根和下胚轴的发育及其生物量、维生素C含量和抗氧化性，但增加了纤维素含量。在这些指标中维生素C含量的变化最显著，在黄豆芽生长第5天，25 mg/kg和50 mg/kg四环素残留组中，黄豆芽中维生素C含量较对照组分别降低41.35%和49.80%；此外，四环素残留显著影响黄豆芽根际微生物群落结构，尤其是与氮循环相关的属。其中，明显增加了不动杆菌属(Acinetobacter)和栖热菌属(Thermus)的相对丰度，减少了假黄色单胞菌属(Pseudoxanthomonas)和氢嗜菌属(Hydrogenophaga)的相对丰度。【结论】土壤中的四环素残留显著影响黄豆芽的生长发育、根际微生物群落结构以及维生素C等重要营养品质指标。