摘要:摘要:【目的】MRSA外排系统是其对多种药物耐药性的主要原因，为此研究鹰嘴豆芽素A对MRSA外排系统的抑制作用。【方法】以MRSA41577为供试菌株，通过二倍稀释法、双平板法和荧光分光光度法测定鹰嘴豆芽素A对MRSA41577的抑制作用及其对外排系统的影响;通过RT- PCR检测加药前后MRSA41577外排蛋白norA的表达量;SDS-PAGE检测加药前后与MRSA41577外排相关蛋白的变化，并用液相色谱质谱仪进行鉴定确认。【结果】鹰嘴豆芽素A本身无抑菌活性，但鹰嘴豆芽素A和环丙沙星联合作用后，MRSA41577对环丙沙星的敏感性显著提高，其中40μg/mL的鹰嘴豆芽素A能使环丙沙星对MRSA41577的MIC从64μg/mL降低到8μg/mL，且作用强度与药物浓度呈正相关。经鹰嘴豆芽素A处理MRSA41577后，菌体内环丙沙星的蓄积量随着药物处理时间的增加而增加，在处理15min时与对照组相比，菌体内环丙沙星蓄积量增加了83%(P﹤0.01)，与阳性对照利血平的作用效果相当。鹰嘴豆芽素A能降低MRSA41577的norA表达量，与对照组相比，鹰嘴豆芽素A和环丙沙星作用MRSA41577 16h后，norA的相对表达量降低了65%，其抑制效果优于阳性对照利血平的48%。SDS-PAGE电泳结果显示，鹰嘴豆芽素A作用MＲSA4157716h后，与对照组相比菌体的蛋白谱带发生了明显的变化，其中与外排系统相关的蛋白除norA蛋白明显减少外，ABC转运体ATP结合蛋白也明显减少。【结论】鹰嘴豆芽素A是MRSA41577的外排泵抑制剂，其作用机制是通过降低MRSA41577菌体内norA基因的表达量，进而减少norA蛋白的表达量，来抑制MRSA41577对环丙沙星等药物的排出而恢复其对药物的敏感性。

摘要:[目的] 研究染料木素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）外排蛋白的影响。[方法] 通过联合药敏实验检测染料木素影响MRSA对环丙沙星的敏感性；利用等重同位素多标签相对定量蛋白质组学（iTRAQ）技术，检测染料木素作用MRSA41577后菌体蛋白表达量的变化；通过生物信息学方法对差异显著的蛋白进行系统分析；通过qPCR和尼罗红外排实验，探讨耐药相关的蛋白介导细菌耐药的作用机制。[结果] 联合药敏实验结果显示，染料木素能增强MRSA对环丙沙星的敏感性；通过iTRAQ技术检测到差异显著蛋白共有129个，包括60个表达上调的蛋白和69个表达下调的蛋白；生物信息学分析结果显示，与细菌耐药相关的蛋白约有14个，其中，通过主动外排系统介导细菌耐药的蛋白主要有PstB、PstS等；qPCR结果显示，与对照组相比，PstB、PstS的基因表达量分别下降了51.6%和78.6%；尼罗红外排实验结果显示，染料木素与尼罗红之间存在竞争关系，为MRSA41577的竞争性抑制剂。[结论] 染料木素可通过降低MRSA41577外排基因pstB和pstS的mRNA表达量，进而影响PstB、PstS外排蛋白的表达来逆转细菌耐药；此外，染料木素还是MRSA41577的竞争性外排抑制剂，可通过与底物竞争外排的方式，使抗菌药物留在菌体内发挥抗菌作用。