2021, 61(10):2999-3009.DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20200780CSTR: 32112.14.j.AMS.20200780
摘要:环介导等温扩增(LAMP)技术是一种新兴的核酸恒温扩增技术,与微流控芯片技术相结合,可实现对病原菌的快速检测,具有特异性强、灵敏度高、操作简单等优点。本文根据不同终产物的检测方法对目前检测病原菌的相关微流控LAMP芯片进行了分类与介绍,并对技术的改进和存在的问题进行了分析,以期为后续的相关研究提供参考。
2023, 63(12):4594-4605.DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20230262CSTR: 32112.14.j.AMS.20230262
摘要:【目的】建立一个基于环介导等温扩增与荧光探针结合的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒假单胞菌酵米面亚种(Burkholderia gladioli pv. cocovenenans)特异性检测方法。【方法】通过多重序列比对分析,选择B. gladioli pv. cocovenenans共有的bonA为靶位点,设计环介导等温扩增的特异性引物和荧光探针,通过19株B. gladioli和3株非目标菌株,验证该方法的特异性。将该方法的检测特异性与现有的基于实时荧光定量PCR鉴定B. gladioli pv. cocovenenans的方法进行比较,并对建立的方法进行灵敏度探究。【结果】建立的环介导等温扩增荧光鉴定方法对B. gladioli pv. cocovenenans具有特异性,能在30 min内得出结果,且该方法能进行可视化直接观测。该方法的基因组DNA最低检测限度为1.98 pg/μL,检测灵敏度为2.7×102 CFU/mL。另外,该方法能应用到食品样品中B. gladioli pv. cocovenenans的检测。【结论】本研究建立了一个快速、可视化、特异性强的检测方法,能有效用于B. gladioli pv. cocovenenans的快速筛查,为保障食品安全提供了一种快速、准确的分子检测手段。
2009, 49(3):378-382.
摘要:摘要:【目的】采用改良环介导等温扩增(LAMP)技术,快速检测婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌。【方法】以阪崎肠杆菌(ATCC29544)的16S-23S rRNA间区序列作为靶序列,设计内、外引物和环引物,通过肉眼观察白色沉淀,判断检测结果。【结果】LAMP检测阪崎肠杆菌的灵敏度为0.101 CFU/mL,人工污染阪崎肠杆菌的婴儿配方奶粉的检出限为1.1 CFU/g。采用试剂盒提取DNA,从样品处理到报告结果,耗时1 h。而对照,PCR检测阪崎肠杆菌的灵敏度为101 CFU/mL,人工污染阪崎肠杆菌的婴儿配方奶粉的检出限为1100 CFU/g。采用同样方法提取DNA,从样品处理到报告结果,耗时3 h。【结论】因此,LAMP检测婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌灵敏度高,耗时短,方法简便。