摘要:【目的】 在大肠杆菌(Escherichia coli) MG1655-ΔrecA和Escherichia coli DH10B中构建CRISPR/LshCas13a质粒干扰系统，通过靶向非必需基因lacZ和必需基因polA，分别分析RNA编辑实验中的逃逸现象。【方法】 选取来自沙氏纤毛菌(Leptotrichia shahii)中的Cas13a蛋白编码基因LshCas13a，构建可诱导的CRISPR/LshCas13a的RNA编辑系统相关质粒，选取MG1655-ΔrecA和DH10B为研究对象。通过crisporo算法，设计靶向lacZ和polA的CRISPR RNA (crRNA)序列，考察利用LshCas13a质粒干扰实验靶向lacZ和polA的逃逸现象。再通过对逃逸菌落的数量和序列分析评估LshCas13a系统的逃逸现象，结合PCR和Sanger测序技术探究LshCas13a系统的逃逸事件。选取通过插入序列(insertion sequence, IS)转座破坏LshCas13a系统的LshCas13a基因的逃逸菌落，通过监测OD600进一步考察菌株的生长情况。【结果】 利用LshCas13a系统靶向MG1655-ΔrecA和DH10B中的lacZ和polA，发现靶向lacZ时，MG1655-ΔrecA通过LshCas13a基因点突变和IS转座突变方式逃逸；靶向polA时，MG1655-ΔrecA和DH10B通过点突变LshCas13a基因、IS转座和突变crRNA的直接重复(direct repeat, DR)序列等方式逃逸。LshCas13a编码基因的突变促进了菌株生长的恢复。【结论】 本研究利用LshCas13a质粒干扰系统研究了E. coli宿主RNA编辑中的多样化逃逸现象，包括了染色体编码的IS介导的LshCas13a转座突变、LshCas13a点突变、crRNA的DR序列突变或重组等情况。本研究为进一步优化CRISPR/LshCas13a基因编辑系统奠定了基础。