摘要:摘要:【目的】在阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae) GX-3中发现了一个编码中性pH范围内起作用的蔗糖酶基因，在大肠杆菌(Escherichia coli)中进行克隆表达及纯化，并研究该蔗糖酶的酶学性质，为蔗糖酶的应用研究及开发利用奠定基础。【方法】通过查找GenBank数据库中来自阴沟肠杆菌同属中的编码蔗糖酶的基因序列，对这些序列进行比对分析设计简并引物扩增保守区;利用PCR扩增目的基因，以pQE30为表达载体构建重组质粒;镍亲和层析纯化重组蛋白，对重组酶的酶学性质进行详细研究。【结果】一个编码蔗糖酶的基因(Einv)被从阴沟肠杆菌GX-3中发现和克隆。生物化学特性鉴定表明这个蔗糖酶的活性最适温度为40℃和最适pH为6.5。凝胶渗透色谱法分析显示Einv是以二聚体的形式存在。Einv这个蔗糖酶在1170 mmol/L的蔗糖条件下仍保留有80%以上的水解活性。而在高浓度的蔗糖条件下，Einv只有水解活性而没有转糖基的副反应发生。它能够水解棉子糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖和水苏糖。【结论】获得的Einv是一个在中性pH范围内起作用的β-呋喃果糖苷酶，只有水解功能而没有转糖基功能。这些特性表明这个中性蔗糖酶在食品工业具有重要的应用价值。

摘要:【目的】调控多基因表达对于优化代谢途径和合成生物学应用至关重要，构建不同的启动子和终止子组合，可作为毕赤酵母代谢途径改造和优化外源基因表达的有力分子调控工具。【方法】首先，将毕赤酵母组成型磷酸甘油酸激酶基因的启动子PPGK1进行截短，构建截短启动子分别调控报告基因(绿色荧光蛋白基因egfp和β-半乳糖苷酶基因lacZ)表达的毕赤酵母重组菌。检测重组菌的报告基团转录水平、荧光强度和β-半乳糖苷酶产量。然后，构建了不同强度启动子和终止子组合(共27种组合)调控egfp表达的重组菌。最后，选取能调控基因高、中、低表达的6个启动子-终止子组合，调控β-呋喃果糖苷酶基因表达，构建β-呋喃果糖苷酶分泌表达的重组菌。【结果】构建的截短启动子(PPP、PPE、PPG和PPD)的强度是野生型启动子PPGK1的70%–190%，最强的启动子为PPD。分别与9个终止子组合时，PPG、PPE和PPD启动子驱动egfp基因表达的强度最高的和最低的相比分别达到4倍、7倍和10倍。6个启动子-终止子组合调控β-呋喃果糖苷酶分泌表达的重组菌胞外酶产量最高的和最低的相比可达6倍。【结论】构建了不同的启动子-终止子组合，调控基因表达水平最高的和最低的相比达到10倍，可为优化毕赤酵母代谢工程和合成生物学应用中控制不同外源基因的表达量提供有力的分子工具。