摘要:以G1株系的甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)RNA3为模板,以Oligo(dT)_(15)为引物合成cDNA第一链,以RNA3特异引物合成cDNA第二链。然后将双链DNA克隆在pGEM3zf(+)载体中。通过限制性内切酶图谱分析,构建了五个亚克隆,完成全序列1776bp的序列测定(不含Poly(A)尾巴)。对核苷酸序列和推测的氨基酸序列分析结果发现,RNA3含三个开放阅读框架(ORF),分别编码三个多肽,即P25、P4.6和蛋白N。与法国F2株系RNA3在核昔酸水平上的同源率达96.8％,相应的CRF F25、ORF P4.6和ORFN编码多肽的同源率分别为93.6％、93.2％和92.3％。P25含一个钉指结构(zinc finger),和酸性及碱性区域;蛋白N为疏水蛋白。ORF以外的两端序列高度保守,且3端可形成双发卡结构(double hairpin motif),说明这段序列在病毒侵染或复制中有十分重要的作用。进一步将RNA3 eDNA体外定点突变后使P25 ORS 与卢-半乳糖苷酶基因位于同一阅读框架以表达卢-半乳糖苷酶和P25融合蛋白,在诱导产物中检测到卢-半乳糖苷酶与P25的融合蛋白已在大肠杆菌…