目前尚无专门针对乳酸菌耐药性测定的标准与方法,所以大多研究者借鉴致病菌耐药性测定的标准与方法,并在此基础上做出适合于乳酸菌的调整与改良^{[13,14,15,16]}。乳酸菌耐药性检测方法有很多,包括用K-B纸片扩散法、打孔法、牛津杯法、肉汤稀释法、琼脂稀释法、E-test法。这几种方法的测定值及优缺点比较^[17,18]见表2。

近年来,发酵食品中分离的乳酸菌对抗生素的抗性研究成为各国研究者的关注热点。在不同来源和菌种这两个因素中,来源对菌株的药敏性影响更大^[19]。从市售发酵乳制品到各种自然发酵食品,都有从中分离的乳酸菌对抗生素存在抗性的报道,表明发酵食品中乳酸菌的耐药性现状不容乐观,需严密监控。

秦宇轩等利用纸片扩散法对分离自市售酸奶的100株乳酸菌进行针对7种抗生素的药敏试验,分离得到的菌株(包括德氏乳杆菌保加利亚亚种、干酪乳杆菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌)均对链霉素和庆大霉素耐药,其中42株对万古霉素耐药,对头孢氨苄、四环素、红霉素以及土霉素敏感^[20]。周宁等发现分离自不同品牌市售酸奶的18株保加利亚乳杆菌均对罗红霉素敏感,而对卡那霉素均耐药;对氨苄青霉素、青霉素G、金霉素、氯霉素、四环素、林克霉素、链霉素、新霉素及庆大霉素均表现出不同程度的耐药性^[21]。凡琴等采用琼脂平板稀释法对中国市售酸奶中常用乳酸菌菌种包括嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、双歧杆菌共43株乳酸菌进行了22种抗生素的药敏性检测,43株乳酸菌对甲氧苄啶、萘啶酮酸、环丙沙星、诺氟沙星、达氟沙星、多粘菌素E均耐药,对卡那霉素、四环素、克林霉素、多西环素、头孢噻吩表现出不同程度的耐药,对其他抗生素敏感或中度敏感,多重耐药乳酸菌检出率100%^[22]。D'Aimmo等对分离自商业乳制品和药品中的34株益生菌(包括双歧杆菌属和乳杆菌属)进行了MIC的测定,所有菌株均对氨苄青霉素、杆菌肽、克林霉素、双氯青霉素、红霉素、新生霉素、青霉素、利福平敏感;而对阿奇霉素、环丝氨酸、卡那霉素、萘啶酸、多粘菌素E和壮观霉素耐药^[23]。研究表明,市售酸奶中乳酸菌对多种抗生素存在普遍耐药性,对其进行的耐药检测及安全性评价亟待加强。

杨吉霞等用纸片扩散法分析牦牛奶酪中39株乳酸菌对8种常用抗生素的药敏性,试验菌株对万古霉素、新霉素、链霉素和萘啶酮酸的耐药率分别达到了92.3%、82.05%、97.4%和100%^[24]。吕耀龙等报道了分离自内蒙古达茂旗牧区自然发酵乳中的35株乳酸菌对氧氟沙星的耐药率为77.14%^[25]。Yuksekdag等报道分离自Kefir奶酪和Kashar奶酪的24株乳酸菌均耐万古霉素和庆大霉素,对阿莫西林、林可霉素、红霉素、四环素、氨苄西林的耐药率分别为88%、72%、68%、64%、56%^[26]。Casado Muñoz等对分离自Alorena green table olives (西班牙马拉加的一种自然发酵橄榄)发酵全过程的59株戊糖乳杆菌和13株假肠膜明串珠菌进行15种抗生素的敏感性检测,发现95%的戊糖乳杆菌和所有肠膜明串珠菌均对至少3种抗生素耐药^[27]。Pan等对11种中国发酵食品中分离的17株乳酸菌进行对氯霉素、卡那霉素、四环素、环丙沙星、氨苄青霉素、克林霉素和红霉素的抗性测定,发现耐药乳酸菌普遍存在于中国传统发酵食品中,其抗性发生率与原材料和生产区域有关^[28]。研究显示,传统方式发酵的乳制品和其他食品中的乳酸菌也存在对多种抗生素的耐药性,且耐药率普遍较高。