摘要:以获得大量青霉素酶并将其用于分解牛奶中残留青霉素为目的, 通过PCR方法从蜡样芽孢杆菌ATCC10987基因组中获得了青霉素酶基因, 将该基因克隆至表达载体pET28a(+)中, 并转化到E. coli BL21中; 在IPTG诱导下对目的蛋白进行SDS-PAGE和酶活分析, 结果显示最大酶活力可达到480.0 U/mL; 利用Ni2+亲合层析柱纯化目的蛋白, 纯化后的目的蛋白纯度超过90%; 采用高碘酸钠氧化法制备固定化的青霉素酶, 并利用该固定化酶将牛奶(含0.5 U青霉素G/mL)中的青霉素分解到浓度小于4 ppb程度。

摘要:为了实现外源蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达, 利用硫氧还蛋白作为分子伴侣构建双顺反子翻译偶联表达载体pDICT。将大肠杆菌硫氧还蛋白基因插入到pET22b载体Nde I和EcoR I位点之间, 同时在硫氧还蛋白编码基因的终止密码子前加入核糖体结合位点, 构建成双顺反子翻译偶联表达载体pDICT。将蚓激酶基因F238克隆到该载体, 转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。SDS-PAGE结果表明, 所表达的蚓激酶F238是可溶性蛋白。利用血纤维蛋白法对表达产物进行活性测定, 重组蚓激酶F238不仅具有纤溶酶活性, 而且具有激活纤溶酶原的激酶活性。该双顺反子翻译偶联表达载体的构建, 为在大肠杆菌中可溶性表达外源蛋白提供了新方法。