摘要:【背景】重组酿酒酵母可用于生产多种药用蛋白和工业酶等外源蛋白，但蛋白分泌水平低是限制其异源蛋白高效生产的重要因素。异源蛋白表达和分泌过程可能会对宿主细胞产生多种胁迫，因此，研究胁迫响应相关基因对重组酵母异源蛋白生产的影响具有重要意义。Mhf1p是MHF组蛋白折叠复合体的组分之一，与DNA损伤修复及维持基因组稳定性有关，但其对异源蛋白生产的作用尚不清楚。【目的】研究MHF1过表达对重组酿酒酵母蛋白生产的影响。【方法】在分泌表达纤维素酶的重组酿酒酵母菌株中利用基于CRISPR-Cas9的基因组编辑技术整合过表达MHF1，分析其对产酶的影响，并探讨影响产酶的分子机理。【结果】与出发菌株相比，过表达MHF1菌株的外切纤维素酶CBH酶活性提高了38%。对过表达MHF1的CBH生产菌株中蛋白合成和分泌途径相关基因转录水平进行检测，发现与对照菌株相比，CBH1基因和与分泌相关的SEC22、ERV29等基因在不同时间点呈现不同程度显著上调。【结论】MHF1过表达可促进酿酒酵母异源外切纤维素酶的生产，并影响外源酶基因和分泌途径基因的表达，可能通过对多基因的协同表达影响促进产酶。

摘要:【目的】研究不同工业酿酒酵母宿主背景对重组酵母木糖利用效率的影响。【方法】将木糖利用途径的木糖还原酶(XR)、木糖醇脱氢酶(XDH)和木酮糖激酶(XK)编码基因串联后分别转入3株不同的工业酿酒酵母中，得到重组酵母ZQ1、ZQ5和ZQ7。分别对3个木糖途径代谢基因的表达水平、酶活和重组菌株的木糖发酵效率进行比较。【结果】重组菌株在木糖代谢基因转录、酶活性和木糖利用性能方面有很大差异，其中ZQ5木糖代谢能力最强，ZQ7其次，ZQ1木糖利用能力最弱。ZQ7在初始木糖浓度为20 g/L时木糖利用速率快于ZQ5，表明木糖浓度对重组菌发酵性能评价具有影响。【结论】不同菌株的遗传背景和木糖浓度对重组菌木糖利用的影响很大，评价重组酵母的木糖利用需考虑宿主的遗传背景和底物浓度的影响。

摘要:【背景】重组酿酒酵母广泛应用于生产工业酶和药用蛋白，但是目前仍旧存在异源蛋白产量低、分泌效率差的问题，限制了生产应用。【目的】提高重组酿酒酵母异源分泌蛋白的能力，构建高效的异源蛋白生产细胞工厂。【方法】采用基于CRISPR/Cas9的基因组编辑技术，以生产β-葡萄糖苷酶的重组酿酒酵母Y294-BGL为出发菌株，构建细胞壁蛋白基因CWP2破坏菌株。【结果】与出发菌株相比，破坏CWP2的破坏菌株在发酵96 h时胞外β-葡萄糖苷酶酶活可提高53%，胞内酶活提高了208%。此外，破坏菌生长未受到影响，对弱酸等环境胁迫的耐性没有下降，未造成过多内质网胁迫。进一步检测发现，破坏菌株胞内活性氧水平下降，同时蛋白胞内运输和分泌途径相关的关键基因表达转录及多个细胞壁生物合成相关基因表达下降。【结论】破坏细胞壁蛋白基因CWP2能够提高异源蛋白β-葡萄糖苷酶的胞外酶活，可作为促进酿酒酵母生产异源蛋白的靶点基因。

摘要:【目的】提高酿酒酵母的高耐温性，从而提高菌株在高温下的乙醇发酵性能。【方法】利用染色体整合过表达酿酒酵母液泡蛋白酶B编码基因PRB1。【结果】在41 °C高温条件下进行乙醇发酵，过表达PRB1基因的重组酿酒酵母菌株可在31 h内消耗全部的葡萄糖，而对照菌株在相同时间内仅消耗不到一半的葡萄糖。【结论】利用蛋白酶B基因过表达可构建耐高温酿酒酵母菌株，提高在高温条件下乙醇的发酵效率。

摘要:【目的】利用转录组测序研究硫酸锌添加提高絮凝酿酒酵母SPSC01乙酸胁迫耐性的分子机理。【方法】在10.0 g/L乙酸胁迫条件下，添加0.03 g/L硫酸锌，取对数期酿酒酵母细胞，与不添加硫酸锌的对照组细胞进行比较转录组分析。【结果】添加硫酸锌的实验组与对照组相比较，50个基因转录水平上调，162个基因转录水平下调，这些转录水平变化明显的基因涉及糖代谢、甲硫氨酸合成、维生素合成等多条代谢途径，此外，转录水平变化的基因还包括抗氧化酶基因等关键胁迫响应基因。【结论】硫酸锌添加可改变酿酒酵母全局基因转录水平，提高抗氧化酶及其他胁迫耐性相关基因的表达，影响细胞氧化还原平衡和能量代谢，通过对多基因转录的调控提高酿酒酵母乙酸耐受性。