摘要:【背景】我国作为农业大国，对农药的大量使用是不可避免的，但是农药的超范围使用、超标及高检出率对于环境的污染与人体健康的威胁日趋严重。【目的】碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)对有机磷农药具有积极的降解作用，因此，本文对鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus) Z23(LGG Z23)所产碱性磷酸酶的提取条件进行优化，并研究其对有机磷农药的降解作用。【方法】使用单因素试验和正交试验优化ALP的提取条件；使用对硝基苯酚法测定酶活力；使用分级沉淀和层析法提纯ALP；使用乙酰胆碱酯酶抑制法测定ALP对有机磷农药的降解率。【结果】LGG Z23所产ALP的最优提取条件为：细胞破碎时间15 min，破碎功率450 W，料液比(质量体积比)1:6，提取液pH 10.0，此条件下酶活力为(4.95±0.26) U/mL，比优化前提高2.11倍；对6种有机磷农药的降解率效果为敌敌畏(95.79%±0.01%)>甲基对硫磷(90.69%±0.03%)>毒死蜱(88.90%±0.02%)>敌百虫(86.07%±0.03%)>马拉硫磷(85.31%±0.02%)>乐果(83.18%±0.03%)，其中对敌敌畏和甲基对硫磷的降解效果最好，可达90%以上，并且降解作用差异显著(P<0.05)。【结论】本研究为LGG Z23所产ALP的应用研究提供了理论依据和实验数据。

摘要:【目的】制备鼠李糖乳杆菌菌毛亚基SpaA多克隆抗体，研究其种属特异性。【方法】应用PCR方法从鼠李糖乳杆菌GG的基因组扩增出spaA，并连接到质粒pET-28α(+)中。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导表达和镍柱纯化制备重组SpaA。通过免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体，利用全菌ELISA、Western和Dot-blot分析了SpaA在18株乳酸菌(12个种)中的分布特征。【结果】表达的重组SpaA分子量为36 kD，与预期大小一致；获得的SpaA抗体效价为1:12 800。Western结果显示抗体与天然SpaA具有良好的反应性。在测定的18株乳酸菌中，鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌3个种属菌株的spaA基因PCR和RT-PCR检测均为阳性。但全菌ELISA和Dot-blot结果显示，只有3株鼠李糖乳杆菌的全菌细胞与SpaA抗体呈特异性反应，而其它种属的菌株没有明显的交叉反应。【结论】尽管spaA基因在鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌中具有高度同源性，但SpaA蛋白只特异性地呈现在鼠李糖乳杆菌细胞表面。本研究中获得的SpaA抗体，为高黏附性鼠李糖乳杆菌的免疫磁珠分离及菌毛功能研究提供了工具。