摘要:根据GenBank中的序列设计引物, 克隆芽孢杆菌中的β-脱卤酶基因(命名为bhd)。以pET30a(+)为载体、Escherichia coli BL21(DE3)-CondonPlus为宿主菌, 实现了bhd的高效表达。使用HisTrapTMFF亲和层析柱纯化重组β-脱卤酶, 分子量约为23.1 kD。酶学性质研究表明, 纯化的重组β-脱卤酶水解3-氯丙酸制备3-羟基丙酸的最适反应体系为30 °C, 100 mmol/L, pH 7.0的磷酸钠缓冲液。在最适反应条件下, 重组β-脱卤酶的比活为16.2 U/mg, Km和Vmax分别为3.26 μmol/L和17.86 mmol/(min·g protein)。在最适反应条件下, 以10 mmol/L 3-氯丙酸为底物, 反应36 h的转化率在93%以上。

摘要:【目的】进一步研究橡胶树胶孢炭疽菌致病分子机理。【方法】通过含ILV1基因(具氯嘧磺隆抗性)的pSULF·gfp双元载体农杆菌AGL-1介导进行橡胶树胶孢炭疽菌遗传转化, 利用氯嘧磺隆抗性标记筛选转化子, 对转化子PCR验证及荧光显微观察; 采用离体古铜期橡胶树叶无伤接种法进行致病性缺陷转化子筛选, 并对转化子进行遗传稳定性检测。【结果】获得含3 721个转化子的T-DNA插入突变体库, 转化效率为150?400个转化子/106孢子, 从3 721个转化子中筛选得到致病性缺陷转化子25个; 随机选取20个转化子进行遗传稳定性测定, 在不含氯嘧磺隆PDA平板上继代培养10次后仍保持氯嘧磺隆抗性, 且表型稳定, 表明插入外源基因能够稳定遗传。【结论】可以利用根癌农杆菌介导橡胶孢炭疽菌转化, 构建橡胶树胶孢炭疽菌T-DNA插入突变体库, 筛选致病缺陷突变菌, 为进一步研究该菌致病相关基因提供材料。

摘要:环二鸟苷酸(Cyclic diguanylate，c-di-GMP)的发现已有29年。作为重要的细菌第二信使，c-di-GMP可参与调节细菌生物膜的合成与降解、运动、毒性、细胞周期、细胞分化等多种活动过程。胞外多糖(EPS)是细菌生物膜的主要组成成分，其合成和运输主要受c-di-GMP调控。目前细菌胞外多糖在医药、食品、农业、工业和环保等多个领域均有广泛的应用，其相关研究备受关注。本文旨在论述细菌中c-di-GMP合成与降解的调控，部分合成酶(Diguanylate cyclase，DGC)与降解酶(Phosphodiesterase，PDE)及其受体分子(Receptor)晶体结构等研究成果，并结合我们研究农杆菌ATCC31749中c-di-GMP对可德胶合成调控的基础上，重点阐述c-di-GMP对纤维素、藻酸盐、多聚氮乙酰葡萄糖胺(PNAG)和可德胶等EPS合成与运输的调控机制。