摘要:【背景】肺炎支原体是导致儿童和青少年呼吸道感染的重要病原体，长期以来由于其临床表现不特异而容易错过最佳治疗时期。【目的】结合多酶恒温扩增(multienzyme isothermal rapid amplification, MIRA)技术和核酸试纸条建立一种快速检测肺炎支原体的方法。【方法】以肺炎支原体社区获得性肺炎呼吸窘迫综合征(community acquired respiratory distress syndrome, CARDS)毒素编码基因为靶基因设计引物和探针，对反应体系的温度、时间等进行优化，评估其敏感性，通过检测肺炎支原体和其余7种病原体分析其特异性，并对35份临床样本进行验证。【结果】MIRA核酸试纸条法在37 ℃条件下，15 min内便可完成对肺炎支原体的检测，最低检出限为10 copies/μL；除肺炎支原体外，其余7种病原体均不能扩增，特异性较好。以实时荧光PCR检测为标准，MIRA核酸试纸条法对35份临床样本检测后的诊断特异度为100.00%、灵敏度为96.15%、阴性预测值为90.00%、阳性预测值为100.00%。【结论】本研究建立了MIRA核酸试纸条法检测肺炎支原体的方法，具有快速便携、灵敏度高、特异性好等优势，易于在基层推广使用。

摘要:【背景】鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)是一种重要的人畜共患病病原体，可引起鹦鹉热，该病若未能得到及时诊断和治疗，将会危及患者生命健康。【目的】建立一种基于酶促重组等温扩增(enzymatic recombinase amplification,ERA)结合胶体金侧流层析技术的快速检测鹦鹉热衣原体的方法。【方法】以鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白(major outer membrane protein,MOMP)基因保守序列为靶标，设计特异性引物和探针。通过优化反应体系中的探针浓度、孵育温度和反应时间等关键参数，建立ERA结合胶体金侧流层析检测方法。评估该方法的灵敏度与特异性，并使用49份临床生物样本进行方法验证。【结果】该方法在37℃条件下15 min内可检测出最低10 copies/μL的鹦鹉热衣原体DNA。特异性测试表明，该方法仅对鹦鹉热衣原体呈阳性反应，对其他4种相关呼吸道病原体均无交叉反应。相较于实时荧光定量PCR (real time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)方法，该方法在49份临床样本的检验中灵敏度为94.7%(36/38)、特异度为100%(11/11)、阴性预测值为84.6%(11/13)、阳性预测值为100%(36/36)、Kappa值为0.89。结果显示该方法具有良好的临床应用前景。【结论】本研究建立的ERA结合胶体金侧流层析方法操作简便、无需特殊仪器设备，能够快速、灵敏地检测鹦鹉热衣原体。该方法为鹦鹉热衣原体的快速诊断提供了新的技术支持，适用于资源有限的实验室和现场检测。