摘要:为了简化解脂耶氏酵母表达载体构建过程、消除抗生素污染, 将mel基因(编码酪氨酸酶)作为新型报告基因用于构建新型酵母表达载体, 利用组装PCR人工合成基因mel, 并用重叠PCR将其与同源组成型强启动子pTEF、分泌性信号肽XPR2pre及强终止区LIP2t融合, 构建新型胞外及胞内表达载体, 并利用其在解脂耶氏酵母野生菌株中表达人源癌基因rho。成功获得mel全基因并将其与启动子、信号肽和终止区融合, 得到融合片段TXML, 用其替换原有表达载体的筛选标记基因ura3d4, 构建得到新型胞外及胞内表达载体pINA1297-M和pINA1297-a-M, 转化后的酵母阳性转化子性状明显, 随后利用此新型表达系统获得可溶性异源蛋白Rho。首次实现了将mel作为一种便捷、价廉、无污染的新型筛选标记基因运用于非常规酵母表达系统中, 更为mel在其它真核表达系统中的运用奠定了技术基础; 获得的可溶性Rho蛋白可为研究其性质、结构、功能及与Rho癌基因家族其它成员的相互作用提供条件。